【摘要】：目的運用雙向熒光差異凝膠電泳(DIGE)聯(lián)合串聯(lián)基質(zhì)輔助激光解吸飛行質(zhì)譜儀(MALDI-TOF/TOF MS)篩選原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)患者抗線粒體抗體(AMA)陽性與陰性間血清標志物,并探討其在PBC中的臨床意義。 方法收集符合AASLD標準的PBC患者30例。其中AMA+患者20例,AMA-(間接免疫熒光法測AMA及酶聯(lián)免疫吸附法測AMA-M2均為陰性)患者10例。首先使用DIGE技術對篩選組(4對性別、年齡和病理分期匹配的AMA+和AMA-PBC患者)進行血清差異表達蛋白質(zhì)點分析,而后使用MALDI-TOF/TOF MS對這些蛋白質(zhì)進行進一步的鑒定。最后使用Western blot法在所有樣本中對鑒定得到的血清淀粉樣蛋白P(SAP)和玻連蛋白(VN)進行表達水平驗證。 結果在PBC患者中分離獲得1840個蛋白質(zhì)點。結果經(jīng)生物信息學分析后發(fā)現(xiàn),AMA+與AMA-PBC患者組間差異倍數(shù)1.5或-1.5以上的點共有28個差異點(P0.05)。其中,AMA+組患者較陰性組表達上調(diào)的蛋白質(zhì)點共9個,而相對表達下調(diào)的蛋白質(zhì)點共19個。經(jīng)進一步鑒定最終得到9個蛋白質(zhì),SAP、血清淀粉樣蛋白A、血小板堿性蛋白、維生素D結合蛋白-3、VN、α1微球蛋白、間α球蛋白抑制因子、載指蛋白A-IV和補體H相關蛋白2。Western blot驗證結果顯示,AMAPBC患者其VN表達水平高于AMA陽性患者(P0.01),而SAP在兩者間的表達量無統(tǒng)計學差異(P=0.175)。 結論本研究首次使用蛋白質(zhì)組學技術探尋AMA+與AMA-PBC患者之間的血清標志物,研究結果表明DIGE聯(lián)合MALDI-TOF/TOF MS是篩選此類血清標志物的可靠技術。VN在AMA-PBC患者中明顯升高,可能是此類患者膽管損傷較AMA+患者更為嚴重的原因之一,仍需在臨床大樣本,尤其是在AMA-PBC患者中進行驗證,同時分析該標志物與各種生化及免疫指標的相關性,確定其臨床意義。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

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1 ;Primary biliary cirrhosis:What do autoantibodies tell us?[J];World Journal of Gastroenterology;2010年29期

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本文編號：2679234