【摘要】：目的：觀察烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠T淋巴細胞凋亡的影響,證實烏司他丁的直接免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)；通過分析烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠脾淋巴細胞氧化應(yīng)激水平及線粒體凋亡信號通路等的影響,闡釋其改善T淋巴細胞凋亡的分子機制。 方法：清潔級Wistar大鼠36只,隨機分為(n=12)：(1)假手術(shù)對照(Sham)組；(2)重癥急性胰腺炎(SAP)模型組；(3)烏司他丁治療組。采用膽胰管逆行注入5%�；悄懰徕c的方法制備大鼠SAP模型,烏司他丁治療組在制作SAP模型后經(jīng)尾靜脈緩慢注射烏司他丁1萬U/Kg體重。術(shù)后24小時首先采用直接免疫熒光法對CD4+和CD8+T淋巴細胞進行標(biāo)記,再應(yīng)用Annexin-V/PI雙染法標(biāo)記凋亡細胞,流式細胞儀檢測各組大鼠CD4+、CD8+T淋巴細胞比例及各亞群凋亡細胞比例；以2,7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針檢測各組大鼠淋巴細胞內(nèi)活性氧水平,羥胺法檢測血清超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥酸法檢測血清丙二醛含量；以羅丹明123為探針,流式細胞儀檢測各組大鼠淋巴細胞線粒體膜電位,采用酯化鈣黃綠素和氯化鈷共孵育的方法檢測線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放水平。 結(jié)果：1、與假手術(shù)對照組相比,SAP模型組CD4+T淋巴細胞比例、CD4+/CD8+T淋巴細胞比值均顯著下降(P0.01),同時CD4+T、CD8+T淋巴細胞亞群凋亡細胞比例均顯著升高(P0.01),尤以CD4+T淋巴細胞為著,烏司他丁治療組CD4+T淋巴細胞的凋亡比例顯著降低(P0.01), CD4+T淋巴細胞比例和CD4+/CD8+T淋巴細胞比值則顯著回升(P0.01);2、SAP模型組淋巴細胞內(nèi)ROS熒光強度及血清MDA含量顯著高于假手術(shù)對照組(P0.01),血清SOD活力則顯著低于假手術(shù)對照組(P0.01),烏司他丁治療組淋巴細胞內(nèi)ROS水平和血清MDA含量顯著下降(P0.01),血清SOD活力則顯著回升(P0.01);3、SAP模型組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔異常開放的淋巴細胞比例較假手術(shù)對照組顯著升高(P0.01),線粒體膜電位降低的淋巴細胞比例增多(P0.01),烏司他丁治療組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的異常開放和線粒體膜電位下降的淋巴細胞比例顯著下降(P0.01)。 結(jié)論：1、烏司他丁通過減少SAP大鼠CD4+T淋巴細胞的異常凋亡,改善機體免疫抑制狀態(tài),起到直接的免疫增強效應(yīng)；2、烏司他丁可顯著降低SAP大鼠脾淋巴細胞內(nèi)ROS水平,提高血清SOD活力及降低血清MDA含量,從而通過有效提高機體對氧自由基的清除能力,降低淋巴細胞凋亡程度,減輕氧化應(yīng)激對SAP大鼠免疫功能的影響；3、烏司他丁通過打斷ROS與線粒體損害間的惡性循環(huán),阻斷線粒體凋亡信號通路,從而實現(xiàn)其減少淋巴細胞凋亡,改善機體免疫功能的作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R576

【參考文獻】

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