【摘要】：第一部分：龍血竭對藥物誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的干預(yù)作用及可能機(jī)制 目的：觀察龍血竭對藥物誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的治療作用并初步探討其作用機(jī)制。 方法：健康清潔級SD雄性大鼠36只,體重(200±20)g,隨機(jī)分為3組：正常對照組、模型組、藥物干預(yù)組,每組12只,以硫代乙酰胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化。模型組、藥物干預(yù)組均給予10%硫代乙酰胺-生理鹽水溶液腹腔注射(首次250mg/kg,此后200mg/kg),空白組給予生理鹽水0.5m1腹腔注射,2次/周。2周后,模型組、空白組每天加用生理鹽水2ml灌胃。藥物干預(yù)組：每只每天加用龍血竭0.6克溶于3ml生理鹽水灌胃,共8周。第8周末處死大鼠,測定各組肝纖維化大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白、IV型膠原的含量。取肝組織作病理切片,進(jìn)行HE染色觀察肝臟的病理變化,masson染色觀察肝組織中膠原的增生程度。 結(jié)果：硫代乙酰胺8周后成功誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型。模型組大鼠血清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和IV型膠原水平較正常組均升高(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；給藥六周后,大鼠血清透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和IV型膠原水平與模型組相比明顯降低(P0.01)；模型組大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平較正常組均顯著升高(P0.05),藥物干預(yù)組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平與模型組相比明顯降低(P0.01)；纖維化程度：正常對照組大鼠無肝纖維化；模型組與正常對照組大鼠相比肝臟組織纖維化程度更高,藥物肝臟纖維化程度均優(yōu)于模型組；masson染色后觀察,模型組膠原纖維沉積較為明顯,藥物干預(yù)組膠原纖維沉積較模型組有明顯改善。 結(jié)論：硫代乙酰胺可成功誘導(dǎo)大鼠肝纖維化。龍血竭能夠降低肝纖維化大鼠血清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和IV型膠原及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平,并能改善纖維化大鼠程肝臟的病理損傷程度,減少肝纖維化大鼠肝組織中膠原纖維的增生,上述作用可能與其主要成分龍血素B單體抑制肝星狀細(xì)胞的增殖,促進(jìn)活化的肝星狀細(xì)胞凋亡,從而抑制參與肝纖維化及血管新生啟動與進(jìn)展的重要因子有關(guān)。 第二部分：龍血素B對肝星狀細(xì)胞增殖及促血管新生的影響 目的：觀察龍血素B對肝星狀細(xì)胞增殖及透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白、IV型膠原含量的影響。檢測肝星狀細(xì)胞藥物處理前后血管內(nèi)皮生長因子、低氧誘導(dǎo)因子、神經(jīng)纖毛蛋白1mRNA表達(dá)的影響。 方法：用MTT法觀察龍血素B對肝星狀細(xì)胞增殖的影響。計(jì)算IC50,以IC50,IC50/2, IC50/10三個濃度處理細(xì)胞,并檢測細(xì)胞上清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原的含量；采用熒光實(shí)時定量PCR(RT-PCR)(?),檢測肝星狀細(xì)胞藥物處理前后血管內(nèi)皮生長因子、低氧誘導(dǎo)因子、神經(jīng)纖毛蛋白1mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果：龍血素B的IC50為0.3ug.ul-1;與正常對照組相比藥物干預(yù)組細(xì)胞上清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和Ⅳ型膠原水平均減低(P0.05)；與正常對照組相比藥物干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)VEGF和HIF-1及NRP-1的基因表達(dá)明顯下調(diào)。 結(jié)論：龍血素B可抑制肝星狀細(xì)胞的增殖,并降低細(xì)胞上清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和Ⅳ型膠原的含量,還可下調(diào)細(xì)胞內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子,神經(jīng)纖毛蛋白1和低氧誘導(dǎo)因子mRNA的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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