【摘要】：第一部分：龍血竭對藥物誘導大鼠肝纖維化的干預作用及可能機制 目的：觀察龍血竭對藥物誘導的肝纖維化大鼠的治療作用并初步探討其作用機制。 方法：健康清潔級SD雄性大鼠36只,體重(200±20)g,隨機分為3組：正常對照組、模型組、藥物干預組,每組12只,以硫代乙酰胺誘導大鼠肝纖維化。模型組、藥物干預組均給予10%硫代乙酰胺-生理鹽水溶液腹腔注射(首次250mg/kg,此后200mg/kg),空白組給予生理鹽水0.5m1腹腔注射,2次/周。2周后,模型組、空白組每天加用生理鹽水2ml灌胃。藥物干預組：每只每天加用龍血竭0.6克溶于3ml生理鹽水灌胃,共8周。第8周末處死大鼠,測定各組肝纖維化大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白、IV型膠原的含量。取肝組織作病理切片,進行HE染色觀察肝臟的病理變化,masson染色觀察肝組織中膠原的增生程度。 結(jié)果：硫代乙酰胺8周后成功誘導大鼠肝纖維化模型。模型組大鼠血清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和IV型膠原水平較正常組均升高(P0.05),有統(tǒng)計學意義；給藥六周后,大鼠血清透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和IV型膠原水平與模型組相比明顯降低(P0.01)；模型組大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平較正常組均顯著升高(P0.05),藥物干預組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平與模型組相比明顯降低(P0.01)；纖維化程度：正常對照組大鼠無肝纖維化；模型組與正常對照組大鼠相比肝臟組織纖維化程度更高,藥物肝臟纖維化程度均優(yōu)于模型組；masson染色后觀察,模型組膠原纖維沉積較為明顯,藥物干預組膠原纖維沉積較模型組有明顯改善。 結(jié)論：硫代乙酰胺可成功誘導大鼠肝纖維化。龍血竭能夠降低肝纖維化大鼠血清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和IV型膠原及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶水平,并能改善纖維化大鼠程肝臟的病理損傷程度,減少肝纖維化大鼠肝組織中膠原纖維的增生,上述作用可能與其主要成分龍血素B單體抑制肝星狀細胞的增殖,促進活化的肝星狀細胞凋亡,從而抑制參與肝纖維化及血管新生啟動與進展的重要因子有關。 第二部分：龍血素B對肝星狀細胞增殖及促血管新生的影響 目的：觀察龍血素B對肝星狀細胞增殖及透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白、IV型膠原含量的影響。檢測肝星狀細胞藥物處理前后血管內(nèi)皮生長因子、低氧誘導因子、神經(jīng)纖毛蛋白1mRNA表達的影響。 方法：用MTT法觀察龍血素B對肝星狀細胞增殖的影響。計算IC50,以IC50,IC50/2, IC50/10三個濃度處理細胞,并檢測細胞上清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原的含量；采用熒光實時定量PCR(RT-PCR)(?),檢測肝星狀細胞藥物處理前后血管內(nèi)皮生長因子、低氧誘導因子、神經(jīng)纖毛蛋白1mRNA表達的影響。 結(jié)果：龍血素B的IC50為0.3ug.ul-1;與正常對照組相比藥物干預組細胞上清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和Ⅳ型膠原水平均減低(P0.05)；與正常對照組相比藥物干預組細胞內(nèi)VEGF和HIF-1及NRP-1的基因表達明顯下調(diào)。 結(jié)論：龍血素B可抑制肝星狀細胞的增殖,并降低細胞上清中透明質(zhì)酸酶、層粘連蛋白和Ⅳ型膠原的含量,還可下調(diào)細胞內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子,神經(jīng)纖毛蛋白1和低氧誘導因子mRNA的表達。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

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本文編號：2674280