發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 06:41

【摘要】： 目的:肝纖維化是多種慢性肝損傷的共同后果,進(jìn)一步則可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌,是一類世界性的嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell ,HSC)是肝纖維化發(fā)生的核心環(huán)節(jié),活化的HSC通過旁分泌與自分泌作用合成分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrixes, ECM),同時(shí)合成、釋放大量金屬蛋白酶組織抑制物(tissue inhibitors of metalloproteinases ,TIMPs),抑制膠原酶、明膠酶等基質(zhì)金屬蛋白酶活性,減少ECM降解,導(dǎo)致ECM合成大于降解,最終過量積聚在肝內(nèi)形成肝纖維化。這一復(fù)雜的病理過程是多條細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路和一系列細(xì)胞信息分子網(wǎng)絡(luò)共同控制的結(jié)果,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor beta, TGF-β)等細(xì)胞因子分別通過TGFβ-Smad通路、MAPK (絲裂原激活的蛋白激酶,mitogen activated protein kinase)通路、PI-3K通路等眾多細(xì)胞信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)交互影響,共同介導(dǎo)肝纖維化復(fù)雜的病理生理變化。Rho-ROCK信號(hào)通路是體內(nèi)普遍存在的一條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,它通過調(diào)節(jié)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的聚合狀態(tài),參與調(diào)控了細(xì)胞形態(tài)特征、細(xì)胞粘附與遷移、細(xì)胞增殖與凋亡、基因轉(zhuǎn)錄等生物學(xué)行為,引起細(xì)胞收縮、游走粘附、生長(zhǎng)分裂、應(yīng)力纖維產(chǎn)生及平滑肌運(yùn)動(dòng)、膠原合成等生物效應(yīng),與哮喘、高血壓、動(dòng)脈硬化、腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移以及多種器官纖維化等疾病密切相關(guān)。目前關(guān)于Rho-ROCK信號(hào)通路在肝纖維化時(shí)的變化規(guī)律及其與肝纖維化的關(guān)系研究尚不多,通過研究ROCK1蛋白在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過程的不同階段的表達(dá)情況,進(jìn)一步證實(shí)Rho-ROCK信號(hào)通路在肝纖維化及肝硬化中的作用,為以后不斷開發(fā)診斷及治療肝纖維化的新方法帶來新的希望。 方法:①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康♂Wistar大鼠隨機(jī)分為2組:包括正常對(duì)照組及模型組。正常對(duì)照組即正常飼養(yǎng),模型組即腹腔注射四氯化碳,2次/周,劑量2ml/Kg體重。分別在腹腔注射四氯化碳后3天、6天、2周、4周、6周、8周時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取6只大鼠處死,取部分肝組織以中性甲醛溶液固定、石蠟包埋,多聚賴氨酸涂布的載玻片制作4μm組織切片,用于HE染色及免疫組化;另取部分肝組織迅速液氮凍存,用于PCR檢測(cè)。 ②檢測(cè)指標(biāo):HE染色觀察肝臟組織的病理學(xué)變化,用以觀察肝纖維化程度。利用熒光定量PCR方法檢測(cè)不同時(shí)間段ROCK1基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化情況。免疫組化分別檢測(cè)ROCK1、膠原Ⅰ、膠原Ⅲ的組織定位及表達(dá)情況。 ③數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析:檢測(cè)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1 HE染色:在實(shí)驗(yàn)早期,大鼠肝臟肝血竇擴(kuò)張充血,炎細(xì)胞浸潤(rùn)伴肝細(xì)胞灶性壞死,中期時(shí)肝細(xì)胞腫脹變性,空泡樣改變,匯管區(qū)纖維組織增生,實(shí)驗(yàn)后期肝細(xì)胞大量變性壞死,間質(zhì)纖維組織增生,纖維間隔形成,后期假小葉形成,膠原纖維沉積明顯增加,肝實(shí)質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂。 2熒光定量PCR顯示:隨著肝纖維化的進(jìn)展,Rock1基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平逐漸升高,其△△CT值逐漸變大,至第8周時(shí)趨于平穩(wěn)。 3免疫組化顯示:ROCK1、膠原Ⅰ、膠原Ⅲ陽性表達(dá)面積逐漸增多,ROCK1分別與膠原Ⅰ(r=0.970)和膠原Ⅲ( r=0.870)呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論:ROCK1在四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維的過程中,其組織表達(dá)水平逐漸升高,與組織內(nèi)膠原的變化成正相關(guān)。隨著肝纖維化的進(jìn)展,ROCK1基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平亦逐漸升高,提示其功能也是增強(qiáng)的,說明其在肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到了重要作用,間接說明了Rho/ Rho激酶信號(hào)通路可能是肝纖維化發(fā)生的另一條重要信號(hào)通路。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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