【摘要】：目的： AcSDKP是一個(gè)氮端乙酰化的內(nèi)源性四肽，主要由它的前體物胸腺素β4經(jīng)由脯氨酰寡肽酶（POP）水解而釋放。在血液中的濃度一般為納摩爾級(jí)。AcSDKP是一種多功能性生理調(diào)控因子，具有多種生物學(xué)活性，如抑制心臟成纖維細(xì)胞增殖，造血干細(xì)胞生長等。然而，AcSDKP在體內(nèi)能夠被血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）降解,失去其結(jié)構(gòu)和功能，從而為其臨床應(yīng)用帶來困難。本課題擬通過對AcSDKP進(jìn)行D型氨基酸的改構(gòu)，獲得一種能夠不被ACE降解，同時(shí)又保持其原有的抗纖維化生物學(xué)活性的AcSDKP異構(gòu)體小肽，以期為AcSKDP在抗纖維化方面的應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 以D型氨基酸替代的方式構(gòu)建AcSDKP異構(gòu)體，采用Fmoc-固相合成AcSDKP異構(gòu)體，，并通過高效液相色譜（HPLC）進(jìn)行純化。然后通過HPLC檢測異構(gòu)體AcSDKP抗ACE降解的能力；MTT法和BrdU法檢測異構(gòu)體AcSDKP對小鼠成纖維細(xì)胞（L929）和原代培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測異構(gòu)體AcSDKP對骨髓干細(xì)胞（BMSC）向巨噬細(xì)胞分化的影響。Western blot方法檢測異構(gòu)體AcSDKP對心臟成纖維細(xì)胞磷酸化Smad2蛋白（P-Smad2）表達(dá)的影響。構(gòu)建SD大鼠肝纖維化模型，通過對肝臟組織切片HE染色觀察和血清中相關(guān)指標(biāo)的生化檢測，研究AcSDKP異構(gòu)體對肝纖維化的影響。 結(jié)果： 成功合成了AcSDKP以及三種異構(gòu)體AcSDKP（AcSD(d)KP, AcSDK(d)P，AcSD(d)K(d)P），純度均在98%以上。ACE降解實(shí)驗(yàn)證實(shí)，而三種異構(gòu)體AcSDKP均能夠抵抗ACE降解。AcSD(d)K(d)P對L929細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞增殖均有抑制作用。AcSD(d)K(d)P能夠抑制BMSC向巨噬細(xì)胞分化。AcSD(d)K(d)P能抑制心臟成纖維細(xì)胞P-Smad2的表達(dá)。動(dòng)物證實(shí)AcSD(d)K(d)P具備一定的抗肝纖維化活性，對肝臟有一定的保護(hù)作用。 結(jié)論： 成功構(gòu)建了能夠抵抗ACE降解，抑制成纖維細(xì)胞增殖，抑制巨噬細(xì)胞分化具有抗纖維化活性的AcSDKP異構(gòu)體，為其作為一種抗纖維化藥物應(yīng)用積累了資料。
【圖文】：

酸加 99.9%水；B：0.1%三氟乙酸加 99.9%乙腈；梯度洗脫；流速為 1ml／min；檢測波長為：215nm；色譜圖見圖 1。圖1 四肽異構(gòu)體粗品HPLC色譜分析圖3）四肽異構(gòu)體粗品 HPLC 純化：取濾液 3ml 用 HPLC 純化，選用 C18色譜柱（Hypersil-ODS2， 5um10×250mm），流動(dòng)相：A：0.1%三氟乙酸加99.9%水；B：0.1%三氟乙酸加 99.9%乙腈；梯度洗脫；流速為 10ml／min；

圖 2 四肽異構(gòu)體粗品 HPLC 純化色譜分析圖4）四肽異構(gòu)體純品分析：取少量樣品，配成 0.5mg/ml，過濾，取 20μl用 HPLC 分析，條件同四肽異構(gòu)體粗品 HPLC 分析條件，色譜圖見圖 3。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2671076