【摘要】：背景：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是一個世界性的公共衛(wèi)生問題,同時HBV也是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)及肝硬化患者疾病進展的重要因素,故抗病毒治療是治療的關(guān)鍵。目前國際公認(rèn)的兩類有效的抗病毒藥物分別是干擾素(interferon, IFN)和核苷(酸)類似物[nucleos(t)ide analogues, NUCs]。 NUCs抑制HBV復(fù)制療效確切可靠,可降低或阻止肝硬化及原發(fā)性肝癌的發(fā)生；但隨著治療時間延長,NUCs可導(dǎo)致HBV耐藥突變的發(fā)生,從而引起肝炎發(fā)作。因此,在HBV感染者的治療中,定期檢測,盡早發(fā)現(xiàn)NUCs相關(guān)的HBV耐藥,并及時給予有效的挽救治療具有重要意義。焦磷酸測序是一種新型的DNA測序技術(shù),可快速準(zhǔn)確的定量檢測HBV逆轉(zhuǎn)錄區(qū)的多個耐藥位點,且與直接測序法符合率高。 目的：研究在NUCs抗病毒治療中,采用焦磷酸測序法檢測HBV逆轉(zhuǎn)錄區(qū)NUCs相關(guān)10個耐藥位點,并分析其突變情況,即突變位點、突變模式及相互關(guān)系；rtA181耐藥突變的既往用藥、臨床特征及個體化再治療的療效。 方法：采用焦磷酸測序法對180例慢性HBV感染者的HBV逆轉(zhuǎn)錄區(qū)10個耐藥突變位點(rtI169T、rtV173L、 rtL180M、 rtA181V／T、rtT184G、 rtA194T、 rtS202I、 rtM204V/I、 rtN236T、rtM250V)進行定量檢測。分別總結(jié)耐藥突變位點與拉米夫定(lamivudine, LAM)、阿德福韋酯(adefovir dipivoxil, ADV)、恩替卡韋(entecavir, ETV)、替比夫定(telbivudine, LdT)之間的關(guān)系。其中54例CHB及相關(guān)肝硬化患者,在NUCs治療中病毒學(xué)突破并檢出rtA181突變,檢測其血清HBVDNA、HBsAg定量及ALT水平,焦磷酸基因測序法定量檢測HBV的逆轉(zhuǎn)錄區(qū)10個NUCs相關(guān)耐藥突變位點�；仡櫺苑治霾煌盟幨坊颊叩牟《咀儺惸Ｊ�,比較病毒學(xué)突破時與基線、rtA181單個與多個位點變時的HBV DNA載量,分析發(fā)生病毒學(xué)突破時,含rtA181T與含rtA181V位點突變患者的血清學(xué)指標(biāo)。前瞻性隊列研究分析不同個體化干預(yù)措施的療效。正態(tài)分布的計量資料用t檢驗進行比較,不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用Mann-Whitney檢驗分析,兩組間計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗或Fisher's確切概率法。 結(jié)果：①NUCs治療過程的耐藥突變模式：71例拉米夫定(LAM)相關(guān)耐藥出現(xiàn)4個耐藥突變位點呈10種耐藥突變模式,以rtM204位點多見,rtM204V突變均伴有rtL180M聯(lián)合突變；35例ADV相關(guān)耐藥檢出2個突變位點6種突變模式,以rtA181位點為多見,可聯(lián)合rtN236T突變；40例替比夫定(LDT)相關(guān)突變出現(xiàn)4個耐藥突變位點呈6種突變模式,均含有rtM204I突變位點；11例恩替卡韋(ETV)相關(guān)耐藥突變出現(xiàn)7個耐藥位點呈6種耐藥突變模式,在M204V聯(lián)合L180M基礎(chǔ)上,以rtT184L突變多見。 ②54例rtA181突變的患者中,35例(64.8%)為包含rtA181T的突變。既往用藥主要為ADV和LAM。應(yīng)用多種NUCs者,多位點突變占57.6%(19/33)；單一NUCs者,多位點突變占28.6%(6/21),χ2=4.342,P0.05。 ③rtA181突變的患者發(fā)生病毒學(xué)突破時,患者血清HBV DNA載量較初次NUCs抗病毒治療時低[(5.66±1.01)1og10拷貝/ml比(6.75±0.81)log1o拷貝/ml, t=-4.210, P0.01],含rtA181T位點突變患者較含rtA181V位點突變患者乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)水平高[(3.80±0.45) log10IU/ml比(3.46±0.60) log10IU/ml,t=2.109, P0.05]。 ④對rtA181突變的患者分別給予加用或換用恩替卡韋和加用替比夫定治療,隨訪滿24周時,HBV DNA≥6log10拷貝/ml的患者中,8例加用或換用恩替卡韋,4例加用替比夫定,其發(fā)生病毒學(xué)應(yīng)答者分別為8例和3例,HBV DNA陰轉(zhuǎn)者分別為3例和1例；HBV DNA6log10拷貝/ml中,14例加用或換用恩替卡韋,7例加用替比夫定,其發(fā)生病毒學(xué)應(yīng)答者分別為14例和5例,HBV DNA陰轉(zhuǎn)者分別為12例和4例。 結(jié)論：①長期應(yīng)用NUCs治療的慢性HBV感染者,可于逆轉(zhuǎn)錄區(qū)篩選出NUCs相關(guān)HBV耐藥。LAM相關(guān)耐藥突變以M204為主,其中rtM204V突變均伴有rtL180M聯(lián)合突變；ADV相關(guān)耐藥突變以rtA181突變?yōu)橹�、ETV相關(guān)耐藥突變均在M204+rtL180M存在的基礎(chǔ)上、以聯(lián)合rtT184L突變?yōu)橹�；LDT相關(guān)突變中均存在rtM204I. rtA181是LAM與ADV的交叉耐藥位點。 ②用藥史與rtA181突變模式有一定關(guān)系,應(yīng)用多種NUCs的患者,易出現(xiàn)多位點突變和多重耐藥。 ③對rtA181耐藥突變的患者,加用或換用恩替卡韋干預(yù)治療的療效好于加用替比夫定方案。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2667549