【摘要】：研究背景：肝纖維化(hepatic fibrosis, HF)是多種慢性肝臟疾病發(fā)生發(fā)展的共同病理基礎(chǔ),是形成肝硬化的必經(jīng)病理階段。肝纖維化的實(shí)質(zhì)是肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的過度沉積,其中心環(huán)節(jié)是處于靜止期的肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells, HSCs)的活化和向肌成纖維樣細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致大量細(xì)胞外基質(zhì)的合成；與此同時(shí),細(xì)胞外基質(zhì)的降解減少,由此導(dǎo)致了其合成與降解的不平衡促進(jìn)了肝纖維化的形成。因此抑制激活的HSCs細(xì)胞的活化、增殖及促進(jìn)HSCs細(xì)胞的凋亡成為治療肝纖維化的重要途徑。 目的：CIP-A5是基于基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的結(jié)構(gòu)而設(shè)計(jì)的N1-乙酰基取代吡咯烷類化合物的衍生物,一直被視為一種治療肝硬化的候選化合物。本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)為研究對象,觀察CIP-A5對HSC-T6細(xì)胞株的增殖、凋亡及相關(guān)纖維化細(xì)胞因子的影響,從分子生物學(xué)水平闡明CIP-A5抗纖維化的作用機(jī)制。 方法： 1.明膠酶活性篩選實(shí)驗(yàn)：化合物活性篩選實(shí)驗(yàn),以琥珀酰明膠降解法檢測化合物CIP-A5對人Ⅳ型膠原酶活性抑制作用；以SDS-PAGE明膠酶譜分析HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)上清液MMP-2、MMP-9水平,評價(jià)化合物對酶活性的影響。 2.化合物CIP-A5對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響：研究CIP-A5抗肝纖維化作用,分別采用MTT法觀察其對HSC-T6生長抑制作用；采用流式細(xì)胞術(shù)觀察其誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞凋亡的影響；以臺(tái)盼藍(lán)染色法,檢查化合物處理后藍(lán)染細(xì)胞的比例,評價(jià)化合物對肝星狀細(xì)胞抑制作用性質(zhì)。 3.化合物CIP-A5對大鼠肝星狀細(xì)胞相關(guān)纖維化細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響：以免疫印跡法檢測CIP-A5對活化的肝星狀細(xì)胞HSC-T6中MMP-2、MMP-9及相關(guān)纖維化細(xì)胞因子TGF-p、TNF-α、CTGF的表達(dá)水平,評估CIP-A5作為一種新型化合物用于抗肝纖維化作用的可能。 結(jié)果：CIP-A5濃度在5-30ng/ml范圍內(nèi),與明膠酶直接孵育30min,明膠酶的激活作用從28.4%增加到126.7%；與HSC-T6細(xì)胞接觸24h后,CIP-A5(1-100μ/ml)對培養(yǎng)上清中MMP-2的活性由38.6%提高至190.5%,MMP-9的活性由22.4%增加至170.0%；在與TGF-p共同孵育后,CIP-A5對培養(yǎng)上清中MMP-2的活性由30.0%增加至169.5%,MMP-9的活性由21.4%增加至170.0%；以Western blot分析發(fā)現(xiàn)該化合物對活化的MMP-2的表達(dá)量由50%提高到160.8%,MMP-9的表達(dá)量也由30.0%增加至109.5%；CIP-A5(1-100μg/ml)經(jīng)過72h共同孵育,TIMP-1的表達(dá)抑制率分別為10.6%,32.8%,51.7%,67.3%及79.5%；在與系列濃度的CIP-A5(1-100μg/ml)共同孵育72h后,TGF-β與TNF-α的表達(dá)呈劑量依賴性降低,其中TGF-p的表達(dá)抑制率從15.7%增加至50%；TNF-α的表達(dá)抑制率從32.8%增加至160%；CTGF抑制率分別為15.3%,26.8%,41.5%,68.6%以及79.1%。 結(jié)論：化合物CIP-A5能夠抑制由TGF-β誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞的活化和增殖；能夠提高和增強(qiáng)明膠酶活性,降低TIMP-1、TGF-β1、TNF-α、CTGF的表達(dá),從而發(fā)揮抗肝纖維化作用。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 袁云霞;徐文方;劉健;陳明慧;孟紅;曲顯俊;;基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑LY52對人卵巢上皮癌細(xì)胞SKOV3中MMP-2,MMP-9表達(dá)及其侵襲轉(zhuǎn)移能力的抑制作用[J];癌癥;2006年06期

2 金珍婧,遲寶榮,馬麗娜,趙文靜,苑坤;CTGF-mRNA在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化中的表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

3 黃月紅,張莉娟,陳運(yùn)新,陳治新,王小眾;白細(xì)胞介素-10對實(shí)驗(yàn)性肝纖維化大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1,-2的影響[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年03期

4 李紫瓊;鄭勇;;TIMPs和MMPs與肝纖維化研究進(jìn)展[J];實(shí)用肝臟病雜志;2007年05期

5 陳治新,陳運(yùn)新,翁山耕,黃月紅,張莉娟,王小眾;PDGF-BB對肝星狀細(xì)胞表達(dá)MMP-2及TIMP-1的影響[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2003年01期

6 劉菲;謝建萍;黃柳云;周建亮;譚德明;潘一峰;;β-雌二醇及其納米粒對肝星狀細(xì)胞TGF-β1和CTGF的影響[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2007年06期

7 王吉q，

本文編號(hào)：2664635