【摘要】： 目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是以甘油三酯在肝內過度貯積而引起的臨床病理綜合征,其范疇包括單純性脂肪肝(NASFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和NASH相關性肝硬化。目前非酒精性脂肪肝的發(fā)病機制尚不明確,以Day等提出的“二次打擊”學說得到普遍公認。近年來隨著對細胞凋亡的研究,不斷有證據表明：在NAFLD中肝細胞凋亡可能是單純非酒精性脂肪肝發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)“二次打擊”理論的關鍵步驟,也是該過程的重要標志,與炎癥程度和纖維化進展相關。在細胞凋亡的兩個進化保守的信號轉導途徑中,Bcl-2家族成員的構成比例是凋亡調控的關鍵因素,尤其這一家族的兩個代表性成員Bcl-2和Bax是Bcl-2基因家族中分別抑制和促進肝細胞凋亡的結構相似、作用相反的一對胞內蛋白質,其比值直接決定肝細胞接受死亡信息后,細胞是走向生存還是死亡的命運。本實驗采用高脂膽固醇飲食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,觀察大鼠肝組織中凋亡調控蛋白Bcl-2、Bax的活性和基因表達情況,對Bcl-2、Bax在NAFLD發(fā)病機理中的作用進行初步探討,同時觀察降脂益肝沖劑對肝組織Bcl-2 Bax基因表達的影響,探討其可能的分子治療機制,為臨床應用提供理論依據。 方法：1.動物模型的建立及標本的采集：70只雄性Wistar大鼠正常喂養(yǎng)一周后,隨機分為正常對照組(N組)：給予正常飼料；模型對照組(M組),用藥組(D組)：給予高脂飼料(85%普通飼料,13%的豬油和2%的膽固醇),實驗設4、8、12周三個時相點,相對應的組別分別為N1、N2、N3,M1、M2、M3,D組,每組各10只。于實驗第8周末,D組開始給予降脂益肝沖劑1ml／100g,以0.8g/ml的濃度溶解灌胃,每日兩次,持續(xù)4W。同時M組和N組分別給予等量的生活飲用水灌胃。分階段處死各組大鼠,自腹主動脈采血,迅速取出肝臟,按常規(guī)制備血清及肝組織切片,并留取少量肝組織于-70℃低溫保存。 2.檢測指標：測體重、體長、肝濕重,并計算肝指數(肝濕重／體重×100%)、Lee's指數(體重0.33/體長×1000)等體質指標；全自動生化分析儀測定丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、血脂含量；光鏡下評估肝脂肪變性、炎癥活動度和纖維化程度；蛋白印跡法(Western Blot)檢測肝組織中凋亡調控蛋白Bcl-2、Bax的表達。 結果：1.N組大鼠肝小葉結構完整,肝索圍繞中央靜脈呈放射狀排列,細胞呈多邊形,大小一致；各項生化指標均在正常范圍；肝組織內可見凋亡調控蛋白Bcl-2、Bax的表達,且二者比值保持平衡。 2.4周末,M1組大鼠出現(xiàn)輕度脂肪變,無炎性細胞浸潤,無纖維化；血清轉氨酶水平、血脂含量較N1組升高；肝組織凋亡調控蛋白Bcl-2表達下降,Bax表達增多,二者比值下降(P0.01)。 3.8周末,M2組大鼠肝組織呈單純性脂肪肝改變,無炎性細胞浸潤,纖維化S1期；血清轉氨酶水平、血脂含量較N2組明顯升高；肝組織凋亡調控蛋白Bcl-2表達較N2組顯著下降,Bax表達增多,二者比值下降(P0.01)。 4.12周末,M3組大鼠肝細胞呈彌漫性脂肪變,伴大量炎性細胞浸潤,肝纖維化S2期；血清轉氨酶水平、血脂含量較N3組顯著升高；肝組織凋亡調控蛋白Bcl-2表達較N3組顯著下降,Bax表達增多,二者比值更低(P0.01)。D組大鼠肝脂變程度、炎癥活動度、纖維化較M3組明顯減輕；血清學各項指標均有顯著改善；(P0.01或P0.05)；肝組織Bcl-2表達較M3組明顯增多,Bax表達減少,二者比值升高,但仍較N3組低(P均0.01)。 結論：1.高脂高膽固醇飲食可以成功復制NAFLD大鼠模型,脂質代謝紊亂、炎癥損傷以及肝細胞凋亡與NAFLD的發(fā)生密切相關。 2.正常大鼠肝臟表達一定量的Bcl-2、Bax蛋白,且二者比值Bcl-2、Bax保持平衡,NAFLD大鼠肝臟Bcl-2蛋白表達下調,Bax蛋白表達增多,Bcl-2、Bax降低,且隨造模時間延長Bcl-2、Bax兩者比值顯著下降。 3.降脂益肝沖劑對NAFLD具有良好的防治效果,其發(fā)揮治療作用可能與上調肝臟Bcl-2蛋白表達,減少Bax蛋白,糾正二者平衡失調有關。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.5

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