【摘要】： 目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是以甘油三酯在肝內(nèi)過(guò)度貯積而引起的臨床病理綜合征,其范疇包括單純性脂肪肝(NASFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和NASH相關(guān)性肝硬化。目前非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制尚不明確,以Day等提出的“二次打擊”學(xué)說(shuō)得到普遍公認(rèn)。近年來(lái)隨著對(duì)細(xì)胞凋亡的研究,不斷有證據(jù)表明：在NAFLD中肝細(xì)胞凋亡可能是單純非酒精性脂肪肝發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)“二次打擊”理論的關(guān)鍵步驟,也是該過(guò)程的重要標(biāo)志,與炎癥程度和纖維化進(jìn)展相關(guān)。在細(xì)胞凋亡的兩個(gè)進(jìn)化保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中,Bcl-2家族成員的構(gòu)成比例是凋亡調(diào)控的關(guān)鍵因素,尤其這一家族的兩個(gè)代表性成員Bcl-2和Bax是Bcl-2基因家族中分別抑制和促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡的結(jié)構(gòu)相似、作用相反的一對(duì)胞內(nèi)蛋白質(zhì),其比值直接決定肝細(xì)胞接受死亡信息后,細(xì)胞是走向生存還是死亡的命運(yùn)。本實(shí)驗(yàn)采用高脂膽固醇飲食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,觀察大鼠肝組織中凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、Bax的活性和基因表達(dá)情況,對(duì)Bcl-2、Bax在NAFLD發(fā)病機(jī)理中的作用進(jìn)行初步探討,同時(shí)觀察降脂益肝沖劑對(duì)肝組織Bcl-2 Bax基因表達(dá)的影響,探討其可能的分子治療機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：1.動(dòng)物模型的建立及標(biāo)本的采集：70只雄性Wistar大鼠正常喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N組)：給予正常飼料；模型對(duì)照組(M組),用藥組(D組)：給予高脂飼料(85%普通飼料,13%的豬油和2%的膽固醇),實(shí)驗(yàn)設(shè)4、8、12周三個(gè)時(shí)相點(diǎn),相對(duì)應(yīng)的組別分別為N1、N2、N3,M1、M2、M3,D組,每組各10只。于實(shí)驗(yàn)第8周末,D組開始給予降脂益肝沖劑1ml／100g,以0.8g/ml的濃度溶解灌胃,每日兩次,持續(xù)4W。同時(shí)M組和N組分別給予等量的生活飲用水灌胃。分階段處死各組大鼠,自腹主動(dòng)脈采血,迅速取出肝臟,按常規(guī)制備血清及肝組織切片,并留取少量肝組織于-70℃低溫保存。 2.檢測(cè)指標(biāo)：測(cè)體重、體長(zhǎng)、肝濕重,并計(jì)算肝指數(shù)(肝濕重／體重×100%)、Lee's指數(shù)(體重0.33/體長(zhǎng)×1000)等體質(zhì)指標(biāo)；全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血脂含量；光鏡下評(píng)估肝脂肪變性、炎癥活動(dòng)度和纖維化程度；蛋白印跡法(Western Blot)檢測(cè)肝組織中凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)。 結(jié)果：1.N組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝索圍繞中央靜脈呈放射狀排列,細(xì)胞呈多邊形,大小一致；各項(xiàng)生化指標(biāo)均在正常范圍；肝組織內(nèi)可見凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá),且二者比值保持平衡。 2.4周末,M1組大鼠出現(xiàn)輕度脂肪變,無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),無(wú)纖維化；血清轉(zhuǎn)氨酶水平、血脂含量較N1組升高；肝組織凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2表達(dá)下降,Bax表達(dá)增多,二者比值下降(P0.01)。 3.8周末,M2組大鼠肝組織呈單純性脂肪肝改變,無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),纖維化S1期；血清轉(zhuǎn)氨酶水平、血脂含量較N2組明顯升高；肝組織凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2表達(dá)較N2組顯著下降,Bax表達(dá)增多,二者比值下降(P0.01)。 4.12周末,M3組大鼠肝細(xì)胞呈彌漫性脂肪變,伴大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝纖維化S2期；血清轉(zhuǎn)氨酶水平、血脂含量較N3組顯著升高；肝組織凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2表達(dá)較N3組顯著下降,Bax表達(dá)增多,二者比值更低(P0.01)。D組大鼠肝脂變程度、炎癥活動(dòng)度、纖維化較M3組明顯減輕；血清學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著改善；(P0.01或P0.05)；肝組織Bcl-2表達(dá)較M3組明顯增多,Bax表達(dá)減少,二者比值升高,但仍較N3組低(P均0.01)。 結(jié)論：1.高脂高膽固醇飲食可以成功復(fù)制NAFLD大鼠模型,脂質(zhì)代謝紊亂、炎癥損傷以及肝細(xì)胞凋亡與NAFLD的發(fā)生密切相關(guān)。 2.正常大鼠肝臟表達(dá)一定量的Bcl-2、Bax蛋白,且二者比值Bcl-2、Bax保持平衡,NAFLD大鼠肝臟Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào),Bax蛋白表達(dá)增多,Bcl-2、Bax降低,且隨造模時(shí)間延長(zhǎng)Bcl-2、Bax兩者比值顯著下降。 3.降脂益肝沖劑對(duì)NAFLD具有良好的防治效果,其發(fā)揮治療作用可能與上調(diào)肝臟Bcl-2蛋白表達(dá),減少Bax蛋白,糾正二者平衡失調(diào)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.5

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本文編號(hào)：2664766