【摘要】： 背景 原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)是一種肝內(nèi)進(jìn)行性、非化膿性小膽管破壞伴門靜脈區(qū)炎癥、纖維化的自身免疫性肝病,最終可進(jìn)展為肝硬化和肝衰竭而死亡。PBC的病因和確切發(fā)病機(jī)制至今尚不完全清楚,肝膽管上皮細(xì)胞異常表達(dá)線粒體抗原、T細(xì)胞介導(dǎo)的異常免疫反應(yīng)和宿主自身抗原發(fā)生變化等機(jī)制都可能參與PBC的發(fā)生。PBC在全球范圍內(nèi)都有發(fā)生,尤其在北美國(guó)家40歲以上婦女發(fā)病率逐年增多的趨勢(shì)；在我國(guó),近年來隨著診斷技術(shù)的進(jìn)步,從文獻(xiàn)報(bào)道和來院就醫(yī)的PBC患者數(shù)量看來,PBc發(fā)現(xiàn)率有增多的趨勢(shì)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)PBC尚無特效的治療方法,對(duì)早中期患者通常認(rèn)為熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid, UDCA)仍為其最有效的治療方法。然而,UDCA不能阻斷疾病進(jìn)程,PBC發(fā)展到后期只能通過肝移植來解決,且肝移植后復(fù)發(fā)率很高。 Th17細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的一種CD4+T細(xì)胞亞群,通過分泌效應(yīng)細(xì)胞因子IL-17在自身免疫性疾病中起著重要的作用。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)動(dòng)物模型中,發(fā)現(xiàn)過繼輸注Th17細(xì)胞比輸注Thl細(xì)胞更能有效誘發(fā)EAE,注射IL-17也能加重EAE動(dòng)物的炎性癥狀和嚴(yán)重程度,而采用IL-17基因缺陷小鼠則可以減弱疾病的進(jìn)程。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),正常小鼠肝CD4+T細(xì)胞分泌IL-17高于其脾CD4+T細(xì)胞分泌的IL-17；PBC小鼠自身免疫模型中肝組織和外周血Th17細(xì)胞及IL-17過度表達(dá),實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Th17細(xì)胞在肝細(xì)胞微環(huán)境中對(duì)肝臟自身免疫疾病過程可能起重要作用。 目的 基于以上國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀和存在問題,本研究擬對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化患者(PBC)、乙肝肝硬化患者(HBV-PHC)及正常人(HC)分別行外周血Thl7細(xì)胞／CD4+T細(xì)胞比例和IL-17表達(dá)水平的檢測(cè),同時(shí)分析其血清IL-17表達(dá)水平與肝臟損傷標(biāo)志物血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(ALP)濃度的關(guān)系,初步探討PBC患者外周血Th17細(xì)胞比例和功能的變化及其臨床意義。為我們今后進(jìn)一步研究Th17細(xì)胞在自身免疫性肝病中作用,提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù),進(jìn)而可能為PBC的免疫學(xué)治療靶點(diǎn)提供一個(gè)新的思路,不僅具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值,而且具有巨大的應(yīng)用前景和社會(huì)效益。 方法 1流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)研究對(duì)象外周血Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例。 2采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法檢測(cè)研究對(duì)象血清IL-17水平,同時(shí)用酶動(dòng)力速率檢測(cè)血清GGT和ALP的濃度,比較IL-17水平與GGT、ALP濃度的相關(guān)性。 3實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)研究對(duì)象外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-17mRNA基因表達(dá)水平。 結(jié)果 1.經(jīng)PMA/Ionomycin刺激三組研究對(duì)象外周血單個(gè)核細(xì)胞4h后流式檢測(cè),最終以散點(diǎn)圖中IL-17染色陽(yáng)性表示Th17細(xì)胞,用CellQuest軟件分析數(shù)據(jù)。PBC患者組和乙肝肝硬化患者組外周血Thl7/CD4~+T細(xì)胞水平分別為[(0.83±0.58)%]、[(0.81±0.45)%],顯著高于健康組[(0.58±0.20)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但PBC患者組和乙肝肝硬化患者組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.采用ELISA法對(duì)三組研究對(duì)象血清IL-17水平進(jìn)行檢測(cè),PBC患者組和乙肝肝硬化患者組血清IL-17水平分別為[(24.6±9.7)pg/ml]、[(21.6±6.1)pg/ml],顯著高于健康組[(18.0±2.1)pg/ml],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但PBC患者組和乙肝肝硬化患者組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí),我們用酶動(dòng)力速率法分別檢測(cè)三組研究對(duì)象中的GGT和ALP這兩個(gè)反映膽汁淤積的血清學(xué)指標(biāo)。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清中GGT和ALP水平分別為：PBC患者組[(320±267)U/L]、[(204±126)U/L]；乙肝肝硬化患者組[(246±156)U/L]、[(132±113)U/L]；健康對(duì)照組[(23±12)U/L]、[(60±13)U/L],任意兩組之間比較,差異均有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)各組外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-17mRNA表達(dá)水平。與乙肝肝硬化患者組、健康組相比,PBC患者組的IL-17mRNA的表達(dá)量均顯著性升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),尤其PBC患者組的表達(dá)量是健康組的2.21倍(P0.05)：乙肝肝硬化患者組和健康組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.基于各組血清學(xué)IL-17水平和GGT、ALP濃度,分別對(duì)三組研究對(duì)象上述指標(biāo)間進(jìn)行相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：PBC患者組血清IL-17水平與GGT、ALP濃度呈顯著正相關(guān)性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)而乙肝肝硬化患者組和健康組,未見明顯的相關(guān)性,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 在本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)PBC患者組和乙肝肝硬化患者組外周血Th17細(xì)胞及血清IL-17水平明顯高于健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PBC患者組外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-17mRNA水平明顯高于乙肝肝硬化患者組和健康組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Th17細(xì)胞及其分泌的促炎因子IL-17,可能在PBC免疫發(fā)病和炎癥性疾病預(yù)后中起著重要作用。目前PBC尚無特異性的治療方法,因此進(jìn)一步研究Th17細(xì)胞在PBC發(fā)病機(jī)理中的作用有望成為幫助患者重建免疫系統(tǒng)的又一新的靶點(diǎn),為人類治療PBC提供新的思路。
【圖文】：

化患者組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但這一整體趨勢(shì)的變化提示Thl7細(xì)胞與自身免疫性疾病及炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究結(jié)果支持PBC患者體內(nèi)存在Th17細(xì)胞高表達(dá)，值得進(jìn)一步研究其免疫功能與疾病之間可能存在的關(guān)系。(見圖2，，3:表2，3，)心心 心心心心心心心心心心心心心心 PPPBC1.2腸 腸腸朋朋峨 峨 HHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHBV.PHCI一1腸 腸卜卜瀏 瀏瞪 -------買 買麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟麟淞 淞琢琢廠一 ...，…。 ............................. ....... HHHHHCO一 6%%%幽幽瀚 瀚 白出卜間 CD4FITC圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)研究對(duì)象外周血體丁h17細(xì)胞表達(dá)水平結(jié)果示意圖(圖片右上角數(shù)字代表其所占CD4+T細(xì)胞的比例)

圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三組研究對(duì)象外周血丁h17細(xì)胞表達(dá)水平比較表2三組研究對(duì)象組間結(jié)果比較組別例數(shù)Th17/CD4+(%)IL一17(pg/mL)GGT(IU/L)ALP(IU/L)PBC組HBV一PHC組HC組0.83士0.580.81士0.450.58士0.2024.6士9.721.6士6.118.0士2.1320士267204士12623士12246士156132士11360士13尸00

本文編號(hào)：2662340