發(fā)布時(shí)間：2017-03-24 20:07

  本文關(guān)鍵詞：自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能改變及其在治療中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原遞呈分子MHCⅡ、CD40表達(dá)的變化及巨噬細(xì)胞吞噬功能的改變,以及氫化可的松琥珀酸鈉和復(fù)方甘草酸苷對AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響并研究其意義,從而探討AIH的發(fā)病機(jī)制及復(fù)方甘草酸苷對于AIH治療作用的免疫學(xué)機(jī)制,為AIH的治療以及復(fù)方甘草酸苷的應(yīng)用開辟新的前景。 方法：(1)造模：4-6周齡的雌性C57BL/6小鼠,以同種系S-100肝抗原與弗氏完全佐劑充分乳化后分別于第一天及第7天兩次予小鼠腹腔注射建立AIH的動物模型,對照組采用同劑量的生理鹽水與弗氏佐劑的混合液,并于免疫后第4周末處死小鼠；(2)提取、分離、培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞：提取后置培養(yǎng)箱培養(yǎng)后,用不含小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液漂洗,然后加含小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)以備用；(3)配制藥物及體外細(xì)胞加藥：含小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液分別將氫化可的松琥珀酸鈉和復(fù)方甘草酸苷濃度分別調(diào)配至1mg/m1,對照組僅加入培養(yǎng)液,培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min,然后加入異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標(biāo)記的大腸桿菌(escherichia coli, E.coli)共孵育；(4)巨噬細(xì)胞表面抗原遞呈分子測定：加入不含F(xiàn)ITC標(biāo)記E.coli共孵育,用流式細(xì)胞儀測定抗原呈遞分子MHCⅡ及其協(xié)同共刺激分子CD40在正常小鼠及AIH模型小鼠巨噬細(xì)胞表面的表達(dá)情況,從而判斷巨噬細(xì)胞的抗原遞呈能力；(5)AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與FITC標(biāo)記的E.coli共孵育1小時(shí),用熒光顯微鏡檢測吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)量和吞噬細(xì)菌的總數(shù),并用流式細(xì)胞儀檢測驗(yàn)證吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)量,分析AIH加藥組與未加藥組和對照組巨噬細(xì)胞吞噬功能的差異。 結(jié)果：(1)流式細(xì)胞術(shù)檢測AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原提呈分子MHCⅡ表達(dá)較對照組明顯減低,(對照組VS AIH模型組為：0.762±0.049vs.0.362±0.035,P=0.000),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原提呈分子CD40的表達(dá)也顯著低于對照組,(對照組VS.AIH模型組為：0.885±0.025vs.0.409±0.018,P=0.000),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(2)熒光顯微鏡檢觀察AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)顯著低于對照組(吞噬率：0.208±0.046vs.0.465±0.081,P=0.000；吞噬指數(shù)：0.390±0.105vs.0.848±0.091,P=0.000)；氫化可的松琥珀酸鈉能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)(吞噬率：0.208±0.046vs.0.428±0.073,吞噬指數(shù)：0.390±0.105vs.0.798±0.065),復(fù)方甘草酸苷也使AIH腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)明顯升高(吞噬率：0.178±0.039vs.0.375±0.094,吞噬指數(shù)：0.353±0.078vs.0.702±0.084),與AIH小鼠未加藥腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(3)利用流式細(xì)胞儀驗(yàn)證對照組小鼠、AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞未加藥組及加氫化可的松琥珀酸鈉組、復(fù)方甘草酸苷組的吞噬率(分別為：0.368±0.067,0.184±0.020,0.351±0.047,0.342±0.020),結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了熒光顯微鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果,即AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率顯著降低,氫化可的松琥珀酸鈉和復(fù)方甘草酸苷均能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率。 結(jié)論：①AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原遞呈分子MHCⅡ、CD40表達(dá)減低,巨噬細(xì)胞抗原遞呈功能減低,可能是AIH發(fā)病的重要一環(huán)。②AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)也顯著低于對照組,氫化可的松琥珀酸鈉處理后的AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)顯著提高,對研究AIH的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。③復(fù)方甘草酸苷也能顯著提高AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù),其可能為AIH的治療提供一個(gè)嶄新的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：自身免疫性肝炎 巨噬細(xì)胞 抗原遞呈 甘草酸苷 吞噬功能 氫化可的松
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面MHCⅡ、CD40分子的表達(dá)16-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對象和方法16-17
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對象及主要試劑16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-17
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-20
• 1.2.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面MHCⅡ分子的表達(dá)17-19
• 1.2.2 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面CD40分子的表達(dá)19-20
• 1.3 討論20-23
• 1.4 小結(jié)23-24
• 二、氫化可的松琥珀酸鈉對AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響24-33
• 2.1. 實(shí)驗(yàn)對象和方法24-25
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象和分組24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-29
• 2.3 討論29-31
• 2.4 小結(jié)31-33
• 三、復(fù)方甘草酸苷對AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響33-40
• 3.1. 實(shí)驗(yàn)對象和分組33-34
• 3.1.1 主要試劑33
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-37
• 3.3 討論37-39
• 3.4 小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述47-54
• 綜述參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能改變及其在治療中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：266096