【摘要】：梗阻性黃疸是臨床較常見的病理狀態(tài)，它的出現(xiàn)導(dǎo)致了機(jī)體各系統(tǒng)器官的損害以及相應(yīng)的病理生理改變，其中最主要的是肝臟損傷，也是其它并發(fā)癥的重要誘因。梗阻性黃疸對肝臟的損害是多方面的，隨著對細(xì)胞凋亡(APO)規(guī)律的深入研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)梗阻性黃疸時(shí)的膽汁瘀積、活性氧自由基和某些細(xì)胞因子、線粒體功能障礙等均可成為引起肝細(xì)胞凋亡的因素。各種研究表明NO也參與了凋亡的生物調(diào)整，NO對細(xì)胞凋亡起著雙向調(diào)控作用，在某些細(xì)胞中，NO可以促進(jìn)凋亡，而在另外一些細(xì)胞中卻可以抑制凋亡，目前NO對梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡影響方面的研究尚未見報(bào)告。本研究利用大鼠梗阻性黃疸模型對大鼠梗阻性黃疸時(shí)血清和肝組織NO含量、肝細(xì)胞凋亡以及血清和肝組織NO含量對梗阻性黃疸大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響進(jìn)行了研究，并進(jìn)一步對NO對梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡影響的機(jī)制作了的探討。 材料和方法：Wistar大鼠，雄性，共54只，體重250g-300g。隨機(jī)將大鼠分為（1）正常組（K組）：6只大鼠未做處理，自由進(jìn)食水。（2）假手術(shù)組（S組）：18只大鼠僅做膽總管的游離，不做結(jié)扎，其他處理同梗阻性黃疸組。（3）梗阻性黃疸組（O組）：18只大鼠，10%水合氯醛麻醉后，經(jīng)上腹部正中切口將膽總管雙重結(jié)扎，，術(shù)后自由進(jìn)食水。（4）梗阻性 WP=95 黃疸+L-Arg組（A組）6大鼠只，在制備梗阻性黃疸模型的基礎(chǔ)上腹腔注射L-Arg100mg/kg.天，共7天；（5）梗阻性黃疸+L-NAME組（N組）6只大鼠，在制備梗阻性黃疸模型基礎(chǔ)上膜腔注射L-NAME 50mg/kg.天，共7天。其中假手術(shù)組（S組）、梗阻性黃疸組（O組）又各自分別按術(shù)后3天、5天、7天分為S3、S5、S7和O3、O5、O7小組，每小組均為6只大鼠。觀察如下指標(biāo)： 1、一般情況觀察：包括動(dòng)物精神狀態(tài)、毛色、飲食狀況及開腹所見。2、下腔靜脈抽血采用多道全自動(dòng)生化分析儀檢測血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST），總膽紅素（TBil）。3、采用硝酸還原酶法測定血清及肝組織NO。4、肝組織HE染色后光鏡下觀察肝臟的病理改變。5、原位雜交方法檢測正常組、假手術(shù)組及梗阻性黃疸組肝組織中iNOS mRNA表達(dá)情況。6、采用TUNEL方法檢測各組肝細(xì)胞凋亡。7、免疫組化染色觀察各組肝組織中Fas、Bcl-2、Caspase-3及NF-κBP65的表達(dá)情況。 結(jié)果：1、正常組和假手術(shù)組各大鼠行動(dòng)敏捷，對疼痛刺激反應(yīng)靈敏，皮膚、尿液顏色無改變;開腹后見:腹腔無腹水，肝臟顏色鮮紅，表面有光澤，質(zhì)地柔軟;光鏡下見：肝細(xì)胞無腫脹、壞死，肝細(xì)胞索排列整齊。而梗阻性黃疸組、A組、N組各組大鼠均有不同程度的行動(dòng)遲緩、對疼痛刺激反應(yīng)遲鈍，皮膚、尿液呈黃色;肝臟呈程度不等的瘀膽狀，表面無光澤，結(jié)扎處近肝側(cè)膽總管呈直徑約0.3cm-0.6cm不等的擴(kuò)張;細(xì)胞呈不同程度腫脹、脂肪變性，肝內(nèi)小膽管擴(kuò)張，但未見明顯肝細(xì)胞壞死，少量纖維組織增生。 2、血清和肝組織中NO含量在梗阻性黃疸組各個(gè)時(shí)相均明顯高于假手術(shù)組的相應(yīng)時(shí)相（P0.01），并且隨著梗阻時(shí)間的延長逐漸升高；同時(shí)血清ALT、AST、TBil值和肝細(xì)胞凋亡指數(shù)亦在梗阻性黃疸組各個(gè)時(shí)相均明顯高于假手術(shù)組的相應(yīng)時(shí)相（P0.01），并且隨著梗阻時(shí)間的延長逐漸升高； WP=96 A組給予L-Arg后血清和肝組織中NO含量上升（P0.01），而血清ALT、AST、TBil值和肝細(xì)胞凋亡指數(shù)下降（P0.01），N組給予L-NAME后血清和肝組織中NO含量下降（P0.01），而血清ALT、AST、TBil值和肝細(xì)胞凋亡指數(shù)升高（P0.01）。 3、正常組及假手術(shù)組肝組織未見Fas、Bcl-2、Caspase-3、NF-KBP65蛋白表達(dá)，梗阻性黃疸組隨著梗阻時(shí)間的延長肝組織Fas、Bcl-2、Caspase-3、NF-κBP65蛋白表達(dá)量逐漸增多。A組給予L-Arg后隨著血清和肝組織中NO含量上升肝組織Fas、Caspase-3蛋白表達(dá)減少（P0.01），Bcl-2、NF-κBP65蛋白表達(dá)增多（P0.01）。而N組給予L-NAME后隨著血清和肝組織中NO含量下降肝組織Fas、Caspase-3蛋白表達(dá)增多（P0.01），Bcl-2、NF-κBP65蛋白表達(dá)減少（P0.01）。 4、原位雜交iNOS mRNA陽性細(xì)胞為胞漿內(nèi)呈藍(lán)色或紫色著染。正常組、假手術(shù)組未見陽性細(xì)胞，而梗阻性黃疸7天組肝組織出現(xiàn)明確的陽性雜交信號，提示梗阻性黃疸肝細(xì)胞有iNOS mRNA表達(dá)。 結(jié)論：1、梗阻性黃疸時(shí)血清和肝組織中NO含量增加，并且隨著梗阻病程的延長血清和肝組織中NO含量增高。其原因?yàn)楣Ｗ栊渣S疸時(shí)肝組織中iNOS產(chǎn)生增多。 2、梗阻性黃疸時(shí)出現(xiàn)肝細(xì)胞凋亡，同時(shí)血清ALT、AST、TBil值增高，并且隨著梗阻時(shí)間的延長肝細(xì)胞凋亡指數(shù)和血清ALT、AST、TBil值逐漸升高；而梗阻性黃疸時(shí)機(jī)體產(chǎn)生的NO抑制肝細(xì)胞凋亡、減少肝酶的釋放，起到保護(hù)肝細(xì)胞的作用。 3、梗阻性黃疸時(shí)肝細(xì)胞凋亡過程中啟動(dòng)了Fas凋亡途徑和Caspase-3的激活，而Bcl-2和NF-κBP65的表達(dá)亦隨梗阻性黃疸時(shí)間的延長、肝細(xì)胞凋亡的增加而增加；梗阻性黃疸時(shí)增高的NO通過抑制Fas、Caspase-3的表達(dá)，而增強(qiáng)Bcl-2、NF-κBP65的表達(dá)而起到抑制肝細(xì)胞凋亡的作用。 WP=97 本研究的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)是，首次研究了NO對梗阻性黃疸肝細(xì)胞凋亡的影響，證明了梗阻性黃疸時(shí)肝細(xì)胞凋亡是損傷肝細(xì)胞的重要途徑，梗阻性黃疸時(shí)增高的NO具有抑制肝細(xì)胞凋亡的作用，上述結(jié)果為明確梗阻
【圖文】：

78附圖 1 S 組肝細(xì)胞無腫脹、壞死，肝細(xì)胞索排列整齊HE×200附圖 3 S 組肝臟組織肝細(xì)胞有少量的凋亡 TUNELDAB 染色 蘇木素淺染×100附圖 2 O7組肝細(xì)胞水腫，肝細(xì)胞脂肪變性，肝內(nèi)小膽管增生、擴(kuò)張 HE×200附圖 4 O7組見肝細(xì)胞凋亡較多 TUNEL DAB 染色蘇木素淺染 ×400

78附圖 1 S 組肝細(xì)胞無腫脹、壞死，肝細(xì)胞索排列整齊HE×200附圖 3 S 組肝臟組織肝細(xì)胞有少量的凋亡 TUNELDAB 染色 蘇木素淺染×100附圖 2 O7組肝細(xì)胞水腫，肝細(xì)胞脂肪變性，肝內(nèi)小膽管增生、擴(kuò)張 HE×200附圖 4 O7組見肝細(xì)胞凋亡較多 TUNEL DAB 染色蘇木素淺染 ×400
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R575

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張忠濤,王宇,奧村忠芳;IL-1β通過誘導(dǎo)一氧化氮的產(chǎn)生抑制肝細(xì)胞能量代謝[J];中華肝膽外科雜志;2002年05期

2 周玉坤;一氧化氮與肝再生[J];肝膽胰外科雜志;1996年04期

3 張修禮;一氧化氮在肝細(xì)胞損害中的作用研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué).傳染病學(xué)分冊;1997年03期

4 唐漫;一氧化氮─體內(nèi)新型的生物活性物質(zhì)[J];醫(yī)師進(jìn)修雜志;1996年08期

5 趙勝利;一氧化氮在肝病中的作用[J];醫(yī)學(xué)文選;1999年03期

6 朱錫光,韓本立;一氧化氮在大鼠急性膽道感染后肝損傷中的作用及其機(jī)理研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年04期

7 郝進(jìn)東,王偉;一氧化氮在內(nèi)科臨床的應(yīng)用[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;1996年02期

8 蔣道榮,姚登福,邱歷偉,陸建新,吳瑋;不同肝病患者一氧化氮合酶(NOS)表達(dá)水平及其臨床意義[J];中國醫(yī)師雜志;2001年04期

9 李淑翠;李慶忠;王垣芳;劉金蘋;張樹平;;青藤堿抗大鼠肝臟缺血/再灌注損傷作用的機(jī)制探討[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年15期

10 陳森洲;王險(xiǎn)峰;施文祥;王程強(qiáng);李勝聯(lián);;鉛中毒所致血清中一氧化氮含量與幾種血清酶活性逆向變化的研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張成平;李紹祥;聞煒;邱萍;胡大榮;袁峰;;人工肝支持系統(tǒng)在治療重型肝炎中的臨床應(yīng)用[A];第二屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

2 李丹華;任雨笙;姚元慶;妮珍;李林;張芳;;高原地區(qū)妊高征患者一氧化氮和內(nèi)皮素水平及其相互關(guān)系[A];加入WTO和中國科技與可持續(xù)發(fā)展——挑戰(zhàn)與機(jī)遇、責(zé)任和對策（下冊）[C];2002年

3 彭曦;汪仕良;馮晉斌;尤忠義;黎鰲;;一氧化氮對燒傷大鼠血小板功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1997年

4 邢新艷;劉振宇;黃張根;;金屬氧化物的添加對V_2O_5／AC催化劑煙氣同時(shí)脫硫脫硝的影響[A];第十三屆全國催化學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 蔣靜靜;杜靖;杜立中;;一氧化氮和亞硝酸乙酯吸入對急性高氧肺損傷新生大鼠肺水通道蛋白1和5的影響[A];第三屆長三角圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 趙保路;;體內(nèi)一氧化氮自由基的ESR研究和ESR成像[A];第十三屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2004年

7 胡先保;鄭翔;裘衛(wèi)東;;羥乙基淀粉130/0．4預(yù)擴(kuò)容對剖腹產(chǎn)術(shù)者血中皮質(zhì)素和一氧化氮水平的影響[A];2007年浙江省麻醉學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

8 邱洪晟;伏峰;馮咪咪;路西春;劉愛中;尹宏斌;;漢維族青年各100名唾液中一氧化氮含量檢測初探[A];FDI、CSA臨床口腔進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1999年

9 王秋萍;江滿杰;李澤卿;湯健;薛飛;季俊峰;;一氧化氮在鼻息肉及鼻粘膜慢性炎癥中的意義探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

10 刁鵬;張大峰;王靜懿;何衛(wèi)平;項(xiàng)民;張琦;;金納米粒子修飾電極的電化學(xué)催化活性研究[A];中國化學(xué)會(huì)第26屆學(xué)術(shù)年會(huì)納米化學(xué)分會(huì)場論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 唐永煌;肝病治療宜趨利避害[N];健康時(shí)報(bào);2005年

2 趙文;“古藺肝蘇”可改善肝細(xì)胞功能[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

3 上官婉兒;預(yù)防藥物傷肝[N];四川科技報(bào);2006年

4 蔡fg東;酒精是肝炎病毒的“幫兇”[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

5 健康時(shí)報(bào)記者 鄭帆影;乙肝攜帶者多補(bǔ)維生素[N];健康時(shí)報(bào);2007年

6 北京地壇醫(yī)院肝病專家 崔振宇邋口述 健康時(shí)報(bào)記者 戴志悅 整理;護(hù)肝別“大動(dòng)肝火”[N];健康時(shí)報(bào);2007年

7 蔡鐵勇（主任醫(yī)師）;要了解損害肝臟的因素[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2006年

8 呂萍;如何認(rèn)識(shí)肝炎主要癥狀的出現(xiàn)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

9 劉彬;乙肝需要復(fù)查的化驗(yàn)項(xiàng)目有哪些[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2005年

10 祝閱武;茴三硫的抗氧化作用[N];健康報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 崔永澤;一氧化氮對大鼠梗阻性黃疸桿細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制[D];吉林大學(xué);2004年

2 何建國;吸入一氧化氮與肺動(dòng)脈高壓臨床療效的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

3 封寧;基于神經(jīng)生物學(xué)的神經(jīng)元真實(shí)感仿真[D];浙江大學(xué);2005年

4 崔曉輝;硫化氫在大鼠內(nèi)毒素休克發(fā)生發(fā)展中的作用及其對一氧化氮和一氧化碳的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

5 黨軍;TGFβ_1、NO、雙肺血流及DVHS變化與放射性肺損傷相關(guān)關(guān)系研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

6 張志紅;淀山湖類毒素-A污染狀況及其神經(jīng)毒性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

7 張華;外源一氧化氮促進(jìn)小麥種子萌發(fā)及其信號作用機(jī)制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 陳曉光;非創(chuàng)傷性肢體缺血預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及機(jī)制探討[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

9 王濤;腎上腺髓質(zhì)素、尾加壓素Ⅱ及一氧化氮在先心病肺動(dòng)脈高壓中作用的研究[D];山東大學(xué);2004年

10 金翼熙;針刺涌泉穴治療急性腦出血模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李凡;丁酸鈉對結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制及iNOS表達(dá)的影響[D];武漢大學(xué);2004年

2 顧立軍;丙烯選擇性催化還原一氧化氮的研究[D];華南理工大學(xué);2003年

3 樸虎國;復(fù)方丹參注射液對缺氧-再復(fù)氧損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[D];延邊大學(xué);2005年

4 樸龍鎮(zhèn);2型糖尿病患者血清IL-10和NO水平與早期糖尿病腎病的關(guān)系[D];延邊大學(xué);2005年

5 江海龍;冠心病患者及其介入治療后血漿中新型氣體信號分子硫化氫水平變化的臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 呂海波;膝骨性關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證型與一氧化氮、轉(zhuǎn)化生長因子-β1的關(guān)系研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2008年

7 王俊霞;大建中湯對脾陽虛大鼠疼痛模型血中NO、β-EP影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];貴陽中醫(yī)學(xué)院;2008年

8 李曉京;外源一氧化氮（NO）緩解小白菜銅脅迫的生理效應(yīng)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 巫國誼;N-乙酰半胱氨酸對實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

10 池詔丞;大鼠肝臟缺血預(yù)處理中一氧化氮和內(nèi)皮素對微循環(huán)的調(diào)節(jié)作用[D];吉林大學(xué);2004年

本文編號：2656342