【摘要】：目的： 1.利用甘草制作胃動(dòng)力低下大鼠模型，觀察其胃殘留率及小腸推進(jìn)率的影響； 2.觀察檳榔對(duì)胃動(dòng)力低下大鼠胃殘留率、小腸推進(jìn)率的影響，并利用SPECT測(cè)定胃半排空時(shí)間，觀察檳榔對(duì)胃動(dòng)力作用的影響； 3.透射電鏡觀察檳榔對(duì)Cajal間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變及其與周?chē)c神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系，免疫組化方法探索檳榔對(duì)c-kit在模型大鼠胃組織中表達(dá)的影響。 4.采用HPLC對(duì)檳榔成分進(jìn)行分析，觀察其對(duì)離體胃平滑肌細(xì)胞收縮效應(yīng)的影響，并使用LC-MS分析有效組分。 方法： 1.胃動(dòng)力低下大鼠模型的建立 制備生甘草溶液，分為2.5、5、7.5、10、15g/kg5個(gè)劑量組，予大鼠每日灌胃，持續(xù)5d。以苯酚紅測(cè)定法，，紫外分光光度計(jì)測(cè)胃殘留率，并測(cè)量計(jì)算小腸推進(jìn)率。使用SPECT檢測(cè)99mTc-MIBI溶液在各組大鼠胃內(nèi)的半排空時(shí)間。 2.檳榔對(duì)胃動(dòng)力的影響 采用方法1建立胃動(dòng)力低下大鼠模型，以莫沙必利作為對(duì)照藥物，分為模型組（10g/kg甘草）、正常對(duì)照組（0.9％NaCl）、西藥組（0.4mg/kg莫沙必利）以及中藥檳榔組（10g/kg檳榔），灌胃7d后，測(cè)量各組大鼠的胃殘留率、小腸推進(jìn)率、胃半排空時(shí)間。 3.檳榔對(duì)胃內(nèi)ICC超微結(jié)構(gòu)及c-kit表達(dá)的影響 造模方法同1，分組方案同2，摘取全胃，并取胃底、胃體、胃竇組織各兩塊。其中一塊制作超薄切片，透射電子顯微鏡觀察記錄；另一塊制作免疫組化標(biāo)本，觀察c-kit抗體表達(dá)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞面積。 4.檳榔有效組分的分析提取及其對(duì)離體平滑肌的作用制備檳榔凍干粉，制作豚鼠平滑肌肌條，觀察不同批次提取物對(duì)肌條的效應(yīng)，選取有效批次檳榔提取物，HPLC記錄其紫外吸收?qǐng)D譜并提取有效成分，觀察其對(duì)豚鼠離體平滑肌的收縮效應(yīng)，LC-MS測(cè)定其分子量。 結(jié)果： 1.不同劑量（2.5、5、7.5、10、15g/kg）甘草溶液灌胃后發(fā)現(xiàn)，10g/kg劑量組的胃殘留率比其它組別要高，明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.01），且胃半排空時(shí)間延長(zhǎng)（P＜0.05）。而5g/kg劑量組的小腸推進(jìn)率與正常對(duì)照組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 2.與正常對(duì)照組相比，中藥檳榔組及莫沙必利組的胃殘留率降低（P＜0.05），胃半排空時(shí)間縮短，而小腸推進(jìn)率增大；同時(shí)，模型組胃殘留率高于其他三組（P＜0.05），胃半排空時(shí)間延長(zhǎng)。檳榔組與莫沙必利組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.電鏡觀察發(fā)現(xiàn)模型組大鼠胃內(nèi)ICC形狀較扁，甚至不規(guī)則，向外伸展的突起變短小；其余三組大鼠ICC呈紡錘形,有巨大的卵圓形核及向外伸展的長(zhǎng)突起，25000倍放大觀察發(fā)現(xiàn)，胞質(zhì)內(nèi)有豐富的線粒體，大量滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。檳榔組ICC與周?chē)哪c神經(jīng)元軸突間突觸樣連接增多。四組中，胃內(nèi)C-kit陽(yáng)性表達(dá)最高部位均為胃竇部，高于胃體部、胃底部。檳榔組的c-kit陽(yáng)性表達(dá)面積最高，尤其在胃竇部（7.97±0.39萬(wàn)μm2）。 4.分取檳榔不同組分進(jìn)行豚鼠離體平滑肌實(shí)驗(yàn)，選取有效組分進(jìn)行HPLC成分分析，紫外吸收光譜顯示69個(gè)峰值，其中34、42最高，提取該組分，發(fā)現(xiàn)10μmol/L劑量BL42對(duì)平滑肌胃環(huán)形肌和胃縱行肌的收縮效應(yīng)最強(qiáng)，其曲線下面積分別為5.96±0.58,5.64±0.52g/s，接近于Ach效應(yīng)。LC-MS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該有效成分分子量不同于檳榔堿。 結(jié)論： 1.在劑量為10g/kg時(shí)，中藥甘草可以增加大鼠的胃殘留率，延長(zhǎng)胃半排空時(shí)間，因此可以用來(lái)建立胃動(dòng)力低下大鼠模型。 2.檳榔能夠降低胃動(dòng)力低下模型大鼠的胃殘留率，縮短胃半排空時(shí)間，并增高小腸推進(jìn)率，推測(cè)檳榔具有促進(jìn)胃動(dòng)力作用。 3.檳榔能夠增加胃動(dòng)力低下大鼠胃內(nèi)ICC與周?chē)c神經(jīng)系統(tǒng)的聯(lián)系，并使c-kit在胃竇、胃體、胃底的陽(yáng)性表達(dá)面積加大，提示檳榔的促胃動(dòng)力作用與ICC具有一定聯(lián)系。 4.HPLC制備的檳榔內(nèi)組分BL34、BL42對(duì)豚鼠離體平滑肌具有較強(qiáng)收縮效應(yīng)，且該作用類(lèi)似于Ach，該物質(zhì)成分的具體分子結(jié)構(gòu)尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。
【圖文】：

南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文表 1. 各組胃殘留率及小腸推進(jìn)率的比較（ X ±s）組別 動(dòng)物數(shù)量 藥物 胃殘留率（％） 小腸推進(jìn)率（％）對(duì)照組 n=5 0.9％NaCl 51.25±8.44 67.83±10.79實(shí)驗(yàn)Ⅰ組n=52.5g/kg 甘草 50.41±10.72 63.37±5.99實(shí)驗(yàn)Ⅱ組n=55g/kg 甘草 62.37±12.56 57.0±12.26＃實(shí)驗(yàn)Ⅲ組n=57.5g/kg 甘草 70.53±6.29＃59.28±8.34實(shí)驗(yàn)Ⅳ組n=510g/kg 甘草 76.49±7.22＊65.42±5.17實(shí)驗(yàn)Ⅴ組n=515g/kg 甘草 64.39±11.05＃60.77±8.82與對(duì)照組相比，＊P＜0.01，＃P＜0.05。

各組大鼠胃半排空時(shí)間比較（X±s）.與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)Ⅳ組胃半排空時(shí)間延長(zhǎng)，＃P＜0.05，n=5
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R573

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2654551