【摘要】：目的:肝纖維化是肝內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生,是多種慢性肝病發(fā)展的共同結(jié)局,最終發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌。但肝纖維化至今尚無(wú)有效的治療手段。迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)是一種天然多功能酚酸類化合物,多項(xiàng)研究表明其具有抗氧化、抗炎及抗纖維化等廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。其次法國(guó)科學(xué)家最近證實(shí)肝臟中巨噬細(xì)胞極化表型的變化與肝纖維化的關(guān)系密切。故本研究探討RA對(duì)肝臟纖維化的作用療效,以及其與巨噬細(xì)胞相關(guān)的作用機(jī)制。分析RA在改善肝臟纖維化的作用中,對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響。實(shí)驗(yàn)方法:1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將40只成年雄性KM小鼠隨機(jī)分為4組,即空白對(duì)照組(Oil+NS,ip,n=10),RA對(duì)照組(Oil+RA,ip,n=10),CCl_4模型組(CCl_4+NS,ip,n=10),RA治療組(CCl_4+RA,ip,n=10)。測(cè)定四組小鼠中每一只的血清ALT,AST水平。并用Real-time PCR的方法測(cè)定肝臟組織中肝纖維化標(biāo)志物以及不同極化表型的巨噬細(xì)胞標(biāo)志物m RNA水平。2.體外實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)J774A.1巨噬細(xì)胞系,隨機(jī)分組,即空白對(duì)照組,RA對(duì)照組,LPS/IL-4模型組和RA實(shí)驗(yàn)組。LPS和IL-4分別誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞系極化為M1和M2型巨噬細(xì)胞,RA體外干預(yù)后,Real-time PCR的方法測(cè)定各組別不同極化表型的巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物m RNA水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1.1與CCl_4模型組比較,RA改善了CCl_4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠的血清學(xué)ALT,AST水平(P≤0.05)。1.2 CCl_4造模后,肝臟組織中的纖維化指標(biāo)α-SMA,Colα1(I)和Colα1(Ⅲ)的mRNA水平顯著升高(P≤0.01)。與CCl_4模型組比較,RA治療后上述肝纖維化指標(biāo)的mRNA水平下降(P≤0.05)。1.3 CCl_4造模后,肝臟組織中的M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物(TNF-α,IL-1β,NOS2)和M2型的標(biāo)志物(Arg-1,Mrc2)mRNA水平明顯升高(P≤0.01)。與CCl_4模型組比較,RA干預(yù)后M1和M2型的標(biāo)志物不同程度均有所下降(P≤0.05)。2.體外實(shí)驗(yàn)與體外LPS/IL-4模型組比較,RA顯著減少了M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物(TNF-α,IL-1β,NOS2)的mRNA水平(P≤0.05),但I(xiàn)L-12與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RA對(duì)M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物除Arg-1的m RNA水平改變具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P≤0.05),對(duì)其余無(wú)明顯影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:RA可能通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的極化方向改善CCl_4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化,進(jìn)一步的研究將有利于肝纖維化的治療。
【圖文】：

圖 1 小鼠體內(nèi)肝纖維化標(biāo)志物水平的變化Control：空白對(duì)照組；RA：RA 對(duì)照組；CCl4：CCl4模型組；CCl4+RA：RA 治療組**p≤0.01 vs 空白組 ，#p≤0.05 vs 模型組。3.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物的變化CCl4造模后，模型組小鼠的 M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物（TNF-α, IL-1β, N型的標(biāo)志物（Arg-1, Mrc2）mRNA 較空白對(duì)照組明顯升高，差異具有（**p≤0.01vs 空白組，圖 2，圖 3），表明 CCl4導(dǎo)致的肝纖維化模型中，M1 型和 M2 型巨噬細(xì)胞的含量均增多。RA 治療后發(fā)現(xiàn)上述兩個(gè)極化表型標(biāo)志物 mRNA 水平較模型組下降，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（#p≤0.05vs 模圖 3）。

圖 2 小鼠體內(nèi) M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物的變化Control：空白對(duì)照組；RA：RA 對(duì)照組；CCl4：CCl4模型組；CCl4+RA：RA 治療組。**p≤0.01 vs 空白組 ，，#p≤0.05 vs 模型組。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2652948