【摘要】： 目的:建立肝細(xì)胞脂肪變性的細(xì)胞模型,研究解偶聯(lián)蛋白2在正常肝細(xì)胞及不同程度脂肪變的肝細(xì)胞中表達(dá)情況,探討解偶聯(lián)蛋白2與肝細(xì)胞脂肪變的關(guān)系及其對肝細(xì)胞能量代謝的影響。 方法:將正常人肝細(xì)胞株HL-7702作為實(shí)驗(yàn)對象,用脂肪乳劑(臨床靜脈營養(yǎng)藥物)培養(yǎng)肝細(xì)胞,使其發(fā)生不同程度的脂肪變,作為肝細(xì)胞脂肪變的模型。正常培養(yǎng)的細(xì)胞作為對照組,另設(shè)四組為模型組,其培養(yǎng)液內(nèi)脂肪乳劑的濃度分別為0.5μl/ml、1.0μl/ml、2.0μl/ml及3.0z;μl/ml。分別干預(yù)24小時、48小時、72小時后,檢測細(xì)胞活力以及細(xì)胞受損的情況(培養(yǎng)液中ALT、AST泄漏量),同時用油紅O染色發(fā)生脂肪變的肝細(xì)胞,顯示肝細(xì)胞內(nèi)脂肪變的情況,并測定細(xì)胞內(nèi)TG及ATP含量。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)UCP2mRNA表達(dá)水平,免役印跡檢測UCP2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果:脂肪乳劑培養(yǎng)細(xì)胞48小時之內(nèi)各組ALT、AST水平較之正常對照組無明顯差異(p＞0.05),成功制備出NAFLD模型。油紅O染色顯示正常對照組則無明顯脂滴堆積,而模型組肝細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴,而且脂滴的量隨著脂肪乳劑濃度的增加而不斷增多。模型組細(xì)胞內(nèi)甘油三脂(TG)含量明顯高于正常組(p＜0.01),細(xì)胞內(nèi)的ATP含量隨著脂肪的不斷堆積而減少(p＜0.05)。正常肝細(xì)胞內(nèi)可以檢測到UCP2mRNA表達(dá),且隨著脂肪乳劑濃度的不斷增加,UCP2mRNA表達(dá)量也增加。模型組與正常對照組表達(dá)量相比,差異具有顯著性(P＜0.01),模型組之間的表達(dá)量差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。正常組內(nèi)未檢測到UCP2蛋白,模型組中隨著肝細(xì)胞脂肪變程度的加重,UCP2蛋白表達(dá)也增加(P＜0.05) 結(jié)論:應(yīng)用脂肪乳劑在合理的濃度和干預(yù)時間段內(nèi)培養(yǎng)肝細(xì)胞,可以運(yùn)用體外培養(yǎng)的方法成功地制備出NAFLD細(xì)胞模型。脂肪變性的肝細(xì)胞中UCP2表達(dá)較正常肝細(xì)胞增加,且與脂肪變程度呈正相關(guān),與細(xì)胞內(nèi)TG含量呈正相關(guān),與細(xì)胞內(nèi)的ATP含量呈負(fù)相關(guān)。UCP2的表達(dá)在蛋白質(zhì)和核酸水平具有不一致性。UCP2對脂肪變的肝細(xì)胞無明顯保護(hù)作用,甚至?xí)又丶?xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R575

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 劉琳;解耦聯(lián)蛋白2在非酒精性脂肪性肝病過氧化損傷中的作用探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：2652879