【摘要】： 目的: 1、探討UCP-2在軟脂酸誘導的HepG2細胞胰島素抵抗中的表達及其作用。 2、探討UCP-2在軟脂酸誘導的HepG2細胞胰島素抵抗中的作用機制。 方法: 1.用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HepG2細胞,并進行常規(guī)傳代。 2、實驗設立正常對照組、高胰島素組、軟脂酸組(PA組)和干預組。 3、檢測細胞培養(yǎng)液中與胰島素抵抗及脂變相關的一些指標:葡萄糖、SOD、MDA、GGT、TG、ALT、ASL,油紅O鑒定HepG2細胞脂肪變性情況,流式細胞術(FCM)檢測細胞膜電位變化,RT-PCR、Western Blot檢測UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白水平表達變化。 結果: 1、HepG2細胞的胰島素抵抗體外模型建立成功 用葡萄糖氧化酶法檢測細胞培養(yǎng)液中葡萄糖濃度,軟脂酸組葡萄糖濃度和高胰島素組無統(tǒng)計學差異(P0.05),表明用軟脂酸誘導HepG2細胞的胰島素抵抗體外模型成功建立。 2.對照組、軟脂酸組、干預組的ALT、AST、TG,GGT的變化 軟脂酸組ALT、AST、TG,GGT水平明顯高于其他兩組(P0.05),且有統(tǒng)計學意義,其他兩組無明顯差異,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3.油紅O染色觀察各組細胞脂肪變性情況 對照組和干預組細胞內可見少量橘紅色脂滴,軟脂酸組細胞內可見大量明顯脂滴。 4.流式細胞術檢測細胞線粒體膜電位變化 軟脂酸組(PA組)膜電位降低,低于對照組和干預組,且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 5.各組UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白表達的變化。 與對照組和干預組相比,軟脂酸組UCP-2、NF-κB蛋白表達明顯升高(P0.05),IRS-2、PI-3K則軟脂酸組明顯低于對照組和干預組(P0.05),各組的mRNA表達水平隨蛋白同步升高或降低。 結論: 1、軟脂酸在體外成功誘導了HepG2細胞發(fā)生胰島素抵抗,同時發(fā)生了脂肪變性。 2、UCP2表達升高使線粒體膜電位降低,加重了細胞損害,加入抑制劑京尼平后,得到明顯改善。 3、通過檢測和胰島素信號傳導通路相關的IRS-2、PI3K的表達水平,在PA組二者均降低,加入UCP-2抑制劑京尼平后,二者表達升高,提示UCP-2在肝臟胰島素抵抗中起著重要作用,其機制可能和肝臟胰島素抵抗的信號傳導通路障礙有關。
【圖文】：

圖 2 軟脂酸誘導 HepG2 細胞膜電位水平的變化Fig 2 Changs in mitochondriai membrane potential of HepG2 cell induced b: A :Control group; B: P A group; C: Intervention groupβ-actin GAPDH PI3K

各組UCP-2、IRS-2、及NF-κBmRNA表達變化
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.5

【參考文獻】

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本文編號：2652673