【摘要】：背景和目的:自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一種由免疫介導(dǎo)的肝臟炎癥性疾病,可以急性或慢性形式存在。AIH臨床表現(xiàn)多種多樣,可隱匿起病無任何癥狀,也可急性起病甚至表現(xiàn)為急性肝衰竭。目前臨床上治療AIH的方法主要是單獨(dú)使用糖皮質(zhì)激素或聯(lián)合免疫抑制劑硫唑嘌呤,這種方法需要長期服用藥物,并且容易產(chǎn)生副作用,且完全緩解率并不高,因此迫切需要尋找和探討新的有效治療方法。脫落乳牙牙髓干細(xì)胞(stem cells from human exfoliated deciduous tooth,SHED)組織來源豐富、容易獲取、無創(chuàng)傷、具有較低的免疫排斥反應(yīng)。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)SHED對多種自身免疫性疾病都有較好的治療效果。本研究采用SHED對刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)的小鼠自身免疫性肝炎進(jìn)行干預(yù),并評估SHED的治療效果及其機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)SHED并鑒定其增殖能力和多向分化能力。C57BL/6小鼠隨機(jī)分為三組,每組5只:正常對照組(Control)、自身免疫性肝炎組(Con A)和治療組(SHED+ConA)。ConA誘導(dǎo)24h后,收集各組小鼠肝臟組織和外周血。采用ELISA法檢測小鼠外周血TNF-α和IFN-γ炎癥因子的水平,并檢測外周血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平。進(jìn)行肝臟Knodell評分。分離的肝臟組織通過HE染色和免疫組化染色對其進(jìn)行組織學(xué)分析。結(jié)果:1、SHED具有較強(qiáng)的自我增殖能力。茜素紅染色和油紅O染色均呈陽性,表明SHED具有自我增殖、多向分化能力。2、ConA組小鼠血清ALT和AST以及Knodell評分均較Control組顯著升高,SHED+ConA組ALT、AST和Knodell評分均較ConA組顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、ConA組小鼠血清及肝臟組織內(nèi)炎癥因子TNF-α和IFN-γ的表達(dá)水平較Control組顯著升高,SHED+ConA組較ConA組顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、ConA組小鼠肝臟組織內(nèi)CD3~+和CD4~+T細(xì)胞表達(dá)水平較Control組顯著升高,SHED+ConA組較ConA組顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、ConA組小鼠肝臟組織內(nèi)NF-κB的表達(dá)水平較Control組顯著升高,SHED+ConA組較ConA組顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1、SHED體外培養(yǎng)具有較強(qiáng)的自我增殖能力,并具有成骨、成脂多向分化能力。2、SHED對ConA誘導(dǎo)的小鼠自身免疫性肝炎具有治療作用。3、SHED可以抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠肝臟內(nèi)CD3~+和CD4~+T細(xì)胞的活化,減少Th1細(xì)胞分泌炎癥因子TNF-α和IFN-γ,緩解肝臟損傷。4、SHED通過阻斷NF-κB信號通路,抑制炎癥因子TNF-α和IFN-γ的表達(dá),緩解肝臟損傷。
【圖文】：

3 尾靜脈注射 SHED 治療 ConA 誘導(dǎo)的小鼠自身免疫性肝炎第零天注射 SHED 1×106（SHED+ConA 組）和生理鹽水（Co注射 ConA 15mg/Kg，二十四小時(shí)后處死，收集血漿和肝臟標(biāo)本驗(yàn)性自身免疫性肝炎模型的建立方法參考 Zhu[25]等人的驗(yàn)在北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心通過細(xì)菌檢測養(yǎng)在溫度（22℃）和濕度（55%）適宜的環(huán)境中，同時(shí)周期檢測，關(guān)燈時(shí)間為晚上 7:00。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法通過了會審查并符合其標(biāo)準(zhǔn)。（LA2013-92）BL/6 雌性小鼠隨機(jī)分為三組，即正常對照組（Control）Con A）和治療組（SHED+ConA），每組 5 只。飼養(yǎng)一組于實(shí)驗(yàn)開始第 0 天，小鼠在麻醉下，通過尾靜脈注射 始第 7 天，治療組和自身免疫性肝炎組小鼠于麻醉下，溶液，注射劑量為 15mg/kg。靜脈注射 ConA 24h 后觀察各組小鼠狀態(tài)，于 1%戊巴比

圖 4 SHED 光鏡下的形態(tài)及自我增殖能力檢測鏡下觀察 SHED 貼壁成長，，呈長梭形和多角形；B，CCK-8 法檢測顯示 SHE強(qiáng)的自我增殖能力。標(biāo)尺=500μm。將 SHED 接種于 10cm 的培養(yǎng)皿，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4 小時(shí)后貼壁生長，光鏡下顯示細(xì)胞成長梭形和多角形（圖 4A）。細(xì)胞呈指 4B），細(xì)胞形態(tài)一致，呈長梭形。SHED 多向分化能力
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.1

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本文編號：2650432