【摘要】：目的:研究炎性環(huán)境下LPS對腸神經(jīng)膠質(zhì)細胞增殖及凋亡的影響,并初步探討其機制。方法:1.體外培養(yǎng)大鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細胞株(enteric glial cells,EGCs),采用免疫熒光染色法檢測EGCs中纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及鈣結合蛋白S-100β表達情況;2.將EGCs分為空白對照組、TNF-α+IFN-γ組、LPS+TNF-α+IFN-γ組、TNF-α+IFN-γ+RET受體抑制劑組、LPS+TNF-α+IFN-γ+RET受體抑制劑組,采用MTT比色法、BrdU法檢測EGCs增殖活力;TUNEL染色法、Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術、Hoechst33342染色法檢測EGCs凋亡情況;Caspase-3活性試劑盒檢測EGCs的Caspase-3相對活性;蛋白免疫印跡法檢測RET、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的相對表達水平。結果:1.免疫熒光染色結果顯示本實驗所用細胞株可同時表達GFΑP及鈣結合蛋白S-100β;2.MTT結果顯示,與正常對照組相比,不同濃度的LPS(100,200,400μg/mL)抑制EGCs增殖(P0.05),不同濃度的TNF-α(50,100,200ng/mL)+IFN-γ(100ng/mL)明顯降低EGCs生存率(P0.05)。MTT及BrdU結果顯示,與TNF-α(50 ng/mL)模型組對比,LPS處理使細胞增殖能力顯著降低(P0.05)。同時,在TNF-α+IFN-γ組及LPS+TNF-α+IFN-γ組中,RET受體抑制劑處理后,EGCs細胞增殖能力均進一步降低(P0.05)。3.TUNEL染色結果和流式細胞術(Annexin V-FITC/PI雙染法)檢測結果均顯示各組間EGCs凋亡無顯著變化,組間無統(tǒng)計學差異(P0.05)。Hoechst 33342細胞凋亡形態(tài)學觀察結果顯示各組中無明顯核偏移現(xiàn)象,凋亡小體數(shù)目無明顯改變。Caspase-3活性試劑盒檢測結果顯示各組間Caspase-3的相對活性無顯著變化,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.蛋白免疫印跡法檢測結果顯示:與正常對照組相比較,TNF-α+IFN-γ組EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相對表達量下調(diào)(P0.05)。與TNF-α+IFN-γ模型組對比,LPS處理使EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相對表達量降低(P0.05)。同時,對于TNF-α+IFN-γ組及LPS+TNF-α+IFN-γ組,RET受體抑制劑處理后EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相對表達量均進一步降低(P0.05)。各組中EGCs細胞內(nèi)PI3K的表達水平并無顯著的差異(P0.05)。結論:1.本實驗所用細胞株經(jīng)鑒定為大鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細胞株。2.炎性環(huán)境下LPS可抑制EGCs增殖,其機制可能與抑制RET及PI3K/AKT信號通路有關;炎性環(huán)境下LPS對EGCs凋亡無明顯影響。
【圖文】：

細胞株GFΑP蛋白、S100β蛋白表達情況

圖 3.9 Hoechst 染色法觀察 EGCs 凋亡情況 (放大倍數(shù)，100 .4 Caspase-3 活性試劑盒檢測 EGCs Caspase-3 表達情況
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R574

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 向辰;;治療腦瘤的一種新方法[J];生物學通報;1988年02期

2 林啟祥;;神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子[J];國外醫(yī)學情報;1984年04期

3 顧繼杰;神經(jīng)膠質(zhì)生長因子研究進展[J];基礎醫(yī)學與臨床;1994年06期

4 靳仕信;;十一、神經(jīng)膠質(zhì)[J];遵義醫(yī)學院學報;1978年02期

5 黨紅波,葛均波,王克強,虞勇,張英明,史劍慧;神經(jīng)膠質(zhì)生長因子對阿霉素中毒性心肌細胞的影響[J];解剖學雜志;2002年06期

6 胡人義，范淑榮;大白鼠海馬神經(jīng)毯內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)突起與神經(jīng)無突起間關系的超微結構研究[J];神經(jīng)解剖學雜志;1994年01期

7 曹瑞治,劉康;神經(jīng)膠質(zhì)生長因子對周圍神經(jīng)損傷后作用的組織學觀察[J];山西醫(yī)科大學學報;2000年06期

8 程涓;張策;;神經(jīng)膠質(zhì)-免疫機制在疼痛中的作用[J];中國康復理論與實踐;2008年06期

9 王伍超;郭曉麗;胡理;;神經(jīng)膠質(zhì)細胞活化在神經(jīng)病理性疼痛中的作用研究進展[J];中國疼痛醫(yī)學雜志;2017年08期

10 崔梅影;;人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株的帶型[J];國外醫(yī)學.醫(yī)學遺傳學分冊;1979年01期

相關會議論文 前10條

1 陳倩;楊樟;徐祖才;;神經(jīng)膠質(zhì)互動調(diào)控腺苷水平在癲癇中的作用研究[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)病學分會第十次全國腦電圖與癲癇診治進展高級講授班及學術研討會日程冊&論文匯編[C];2015年

2 范斌;谷劍秋;郭陽;;碧蘿芷對小神經(jīng)膠質(zhì)細胞活化的影響[A];中華醫(yī)學會第十七次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編（上）[C];2014年

3 ;神經(jīng)膠質(zhì)[A];中國解剖學會2010年年會論文文摘匯編[C];2010年

4 韋有恒;韓海雄;曹躍瓊;;CMTM3基因在人神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤發(fā)生發(fā)展中功能的初步研究[A];2010’全國腫瘤分子標志及應用學術研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

5 ;神經(jīng)膠質(zhì)[A];中國解剖學會2009年年會論文文摘匯編[C];2009年

6 ;神經(jīng)膠質(zhì)[A];中國解剖學會2008年年會論文文摘匯編[C];2008年

7 岳文慧;鄔力祥;黃柏勝;劉發(fā)益;羅潔;;肥大細胞脫顆粒液對大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞凋亡的影響[A];傳承與發(fā)展，，創(chuàng)湖南省生理科學事業(yè)的新高——湖南省生理科學會2011年度學術年會論文摘要匯編[C];2011年

8 張秀麗;;馬桑內(nèi)酯致癇大鼠海馬區(qū)谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)內(nèi)含量變化研究[A];第九次全國神經(jīng)病學學術大會論文匯編[C];2006年

9 石健;麻彤輝;;神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子beta(GMFβ)在小鼠腦積水病理條件下的表達分析[A];吉林省第六屆生命科學大型學術報告會論文集[C];2008年

10 張秀麗;鄭德樞;鄧平;孫衛(wèi)文;陳盛強;;馬桑內(nèi)酯致癇大鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細胞形態(tài)學及化學性質(zhì)研究[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

相關博士學位論文 前4條

1 李雷;Rig-I調(diào)控化學缺氧誘導神經(jīng)膠質(zhì)炎癥機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2018年

2 左鵬;神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子γ在斑馬魚血管芽細胞遷移和卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機制研究[D];浙江大學;2014年

3 匡曉燕;神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子-β介導膠質(zhì)瘤源性血管新生的作用及其機制初探[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

4 廖永暉;脊髓星形膠質(zhì)細胞在Ⅱ型糖尿病小鼠機械痛敏中的作用及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2011年

相關碩士學位論文 前6條

1 李峗;炎性環(huán)境下LPS對腸神經(jīng)膠質(zhì)細胞增殖及凋亡影響的體外研究[D];蘭州大學;2019年

2 石健;神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子beta (GMFβ) 在小鼠腦積水病理條件下的表達分析[D];東北師范大學;2009年

3 邵杰;內(nèi)皮抑素對膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響研究[D];蘇州大學;2012年

4 陳亮;CD82/KAI1和CD9/MRP-1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株中的表達及表達意義的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

5 喬保華;PPARγ激動劑吡格列酮減輕大鼠創(chuàng)傷性腦損傷膠質(zhì)反應及神經(jīng)保護作用的研究[D];山東大學;2010年

6 田偉;中藥丹參舒頸丸治療頸髓受壓的實驗研究[D];中國中醫(yī)研究院;2005年

本文編號：2649248