發(fā)布時(shí)間：2020-05-04 23:46

【摘要】：目的:探索簡(jiǎn)便、高效和穩(wěn)定的胰腺腺泡分離、純化的新方法,并進(jìn)行培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察,探討不同方法對(duì)細(xì)胞功能的影響。 方法:18只SD大鼠隨機(jī)分成改進(jìn)方法組和傳統(tǒng)方法(內(nèi)灌注法)組,戊巴比妥腹腔麻醉后,改進(jìn)方法組采用改進(jìn)方法迅速切取并剪碎胰腺組織后置于新鮮配制的細(xì)胞分離液中,置入旋轉(zhuǎn)水浴槽37℃,120r/min攪動(dòng)20分鐘消化沉降,過(guò)濾獲得細(xì)胞懸液,D-Hanks液(不含鈣離子的Hanks液)清洗后獲得胰腺腺泡細(xì)胞,離心收集后培養(yǎng);傳統(tǒng)方法組采用內(nèi)灌注法獲取胰腺腺泡細(xì)胞。然后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞存活率測(cè)定、純度鑒定、細(xì)胞內(nèi)鈣離子及胰腺腺泡細(xì)胞培養(yǎng)上清液中淀粉酶測(cè)定。 結(jié)果:兩種方法分離新鮮的大鼠胰腺腺泡細(xì)胞鏡下均呈葡萄樣聚集,單個(gè)胰腺細(xì)胞呈球形,少量細(xì)胞形狀不規(guī)則,培養(yǎng)數(shù)4小時(shí)后細(xì)胞分散均相對(duì)均勻。電鏡下新鮮分離的細(xì)胞可見(jiàn)胰腺腺泡細(xì)胞典型超微結(jié)構(gòu),大量的酶原顆粒(zymogen granules,Z)和豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum,RER);培養(yǎng)12h后雖然可見(jiàn)酶原顆粒減少,但仍然可見(jiàn)大量的酶原顆粒和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng);在培養(yǎng)的腺泡細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)一些細(xì)胞器的微小碎片。改進(jìn)方法所獲得的胰腺腺泡產(chǎn)率(細(xì)胞數(shù)量)為(5.0±0.27)×10~6/g胰腺,純度為(81.11±2.15)%,與傳統(tǒng)方法所獲得的胰腺腺泡數(shù)量(4.8±0.49)×10~6/g胰腺,純度(80.89±3.98)%相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P0.05);而細(xì)胞存活率為(91.33±1.80)%顯著高于傳統(tǒng)方法(83.56±4.69)%,(P0.05);細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度為(3.71±0.42)μmol/L顯著低于傳統(tǒng)方法組(5.29±0.30)μmol/L,( P0.05 );改進(jìn)法所獲得的胰腺腺泡細(xì)胞培養(yǎng)上清液中淀粉酶在培養(yǎng)后1h、4h、10h的含量分別為(315.65±15.65)U/L、(836.84±52.69)U/L、(1621.25±158.58)U/L,顯著高于傳統(tǒng)方法同時(shí)間點(diǎn)(283.92±19.45)U/L、(621.71±42.34)U/L、(1406.06±151.38)U/L的含量(P0.05)。 結(jié)論:改進(jìn)方法是一種簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、高效且對(duì)細(xì)胞活力及外分泌功能影響較小的胰腺腺泡細(xì)胞分離提純方法。
【圖文】：

圖 5 分離后 2h 大鼠胰腺腺泡細(xì)胞(x40) 圖 6 分離后 10h 分散開(kāi)的大鼠胰腺腺泡細(xì)胞(x40)FIG.5. Rat acinar cells after 2 hours that be isolated (x40). FIG. 6. Rat acinar cellsafter 10 hours that be isolated (x40).

圖 8 分離 12h 后的胰腺腺泡細(xì)胞 ×6700（電子顯微鏡）。藍(lán)色箭頭所示為酶原顆粒。紅色箭頭所示為粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。黑色箭頭所示為細(xì)胞器微小碎片。FIG. 8. Cultured pancreatic acinar cell. ×6700 . Electron micrograph of pancreaticacinar cells cultured for12h. Blue arrowhead indicates zymogen granule. Redarrowhead indicates rough endoplasmic reticulum. Black arrowhead indicates cellular
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R576

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 侯月來(lái);;27例高脂血癥性急性胰腺炎臨床分析[J];臨床醫(yī)藥實(shí)踐;2010年01期

2 周仙花;毛偉星;薄挽瀾;;核因子NF-κB在胰腺炎細(xì)胞模型中的實(shí)驗(yàn)研究[J];放射免疫學(xué)雜志;2010年01期

3 張喜娟;嚴(yán)祥;;心房鈉尿肽在消化系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];國(guó)際消化病雜志;2010年01期

4 黃剛;湯為學(xué);陶小紅;;生長(zhǎng)抑素對(duì)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白F-actin分布和細(xì)胞外分泌功能的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年07期

5 張茂生;吳勇;;高脂血癥急性胰腺炎4例及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年05期

6 林旭紅;李永渝;;急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制及相關(guān)治療的研究進(jìn)展[J];中國(guó)病理生理雜志;2010年05期

7 楊龍菊;;高脂血癥性急性胰腺炎的臨床分析[J];中華全科醫(yī)學(xué);2010年05期

8 裴廣輝;梁健;宋文利;王智平;莫春柏;;異丙腎上腺素預(yù)處理對(duì)大鼠胰腺移植后缺血再灌注損傷的抑制作用[J];世界華人消化雜志;2010年09期

9 侯伊玲;薄海;劉子泉;夏時(shí)海;;缺血預(yù)處理抑制大鼠胰腺移植缺血再灌注胰腺細(xì)胞凋亡:活性氧與線粒體DNA修復(fù)酶的作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年18期

10 石莉;劉金萍;;16例復(fù)發(fā)性胰腺炎病因分析[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2010年13期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 崔宗杰;張雙鳳;李婷婷;牛方方;梁慧媛;韓宗強(qiáng);;受體氧化分析:單線態(tài)氧分子等對(duì)不同G蛋白偶聯(lián)受體的獨(dú)特氧化調(diào)控作用[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

2 韓宗強(qiáng);張雙鳳;李婷婷;梁慧媛;崔宗杰;;甲硫氨酸亞砜還原酶與大鼠胰腺腺泡細(xì)胞CCK1型受體的氧化激活[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

3 梁慧媛;王碧玨;崔宗杰;;活性氧中只有單線態(tài)氧分子可特異性激活胰腺腺泡細(xì)胞CCK1受體[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

4 許永春;馮青青;李春安;幸軍;李婷婷;;單核細(xì)胞趨化蛋白在重癥急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用[A];首屆江西省科協(xié)學(xué)術(shù)年會(huì)江西省中醫(yī)藥學(xué)術(shù)發(fā)展論壇論文集[C];2010年

5 唐文富;王佳;陳光遠(yuǎn);黃熙;;大承氣湯保護(hù)胰腺AR42J細(xì)胞的藥效成分篩選與配伍研究[A];第二十一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家級(jí)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

6 胡國(guó)勇;沈佳慶;黃麗;徐選福;郭傳勇;王興鵬;;Reg4在急性胰腺炎后胰腺再生過(guò)程中的表達(dá)及意義[A];第九次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)題報(bào)告論文集[C];2009年

7 黃剛;湯為學(xué);陶小紅;;生長(zhǎng)抑素對(duì)急性胰腺炎治療機(jī)制的初步研究[A];第九次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)題報(bào)告論文集[C];2009年

8 葉麗敏;周力;陳曉琴;;高脂血癥性急性胰腺炎20例臨床診斷與分析[A];2009年貴州省中西醫(yī)結(jié)合消化系病學(xué)術(shù)交流暨專(zhuān)題學(xué)術(shù)講座論文匯編[C];2009年

9 張雙鳳;崔宗杰;;小分子氧化劑對(duì)CCK1受體的調(diào)控[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

10 沈筠;趙曉婷;崔宗杰;;大鼠胰腺腺泡細(xì)胞中TRP通道的表達(dá)及其功能[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 程銳;長(zhǎng)鏈Omega-3多不飽和脂肪酸對(duì)重癥急性胰腺炎的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

2 張紅;脂多糖、去氧膽酸鈉對(duì)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的損傷作用和粉防己堿的防治效應(yīng)及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

3 周旭春;環(huán)氧合酶-2與胰腺癌、酒精性胰腺腺泡細(xì)胞退行性變[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

4 邵宏偉;抗癌中藥有效成分誘導(dǎo)胰腺泡細(xì)胞凋亡治療急性胰腺腺炎的可行性及機(jī)理研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 白亮;大鼠胰腺腺泡細(xì)胞TAP與HMGB1表達(dá)的相關(guān)性[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2010年

2 張奕秉;高脂血癥性急性胰腺炎的臨床特點(diǎn)和預(yù)后分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 錢(qián)衛(wèi)鋒;低分子肝素時(shí)段干預(yù)急性壞死性胰腺炎大鼠微循環(huán)障礙實(shí)驗(yàn)研究[D];南華大學(xué);2010年

4 黃剛;生長(zhǎng)抑素對(duì)急性胰腺炎治療機(jī)制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

5 王碩;芒硝腹部外敷治療急性胰腺炎腹脹的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 葛全興;一種簡(jiǎn)便高效的大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)方法及其對(duì)細(xì)胞功能的影響[D];廣東藥學(xué)院;2010年

7 湯茂春;塞來(lái)昔布對(duì)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞炎癥損傷的影響[D];上海交通大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：2649167