【摘要】： 目的:觀察瘦素對體外脂質(zhì)變性人肝L-02細胞甘油三酯含量以及OB-Rb(瘦素受體)、STAT3(信號轉導和轉錄激活子蛋白3)、MTP(微粒體甘油三酯轉移蛋白) mRNA表達的影響,以推斷瘦素、瘦素受體及其后信號通路,與非酒精性脂肪肝之間的可能關系,以探討瘦素調(diào)節(jié)脂變肝細胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的作用機制,為今后進一步研究提供理論依據(jù)。 方法:采用隨機對照研究,以離體人肝L-02細胞為研究對象。用10%(V/V)醫(yī)用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細胞24小時,制備肝細胞脂肪變性模型。后分別加入重組人瘦素(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)孵育24小時,油紅O染色觀察細胞形態(tài)和細胞內(nèi)脂滴的形成情況,高效液相色譜法檢測細胞內(nèi)甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法檢測MTP、OB-Rb和STAT3的mRNA表達。從而確定瘦素改善細胞脂肪變性的最佳濃度,作出量效關系。然后以瘦素最佳濃度分別孵育模型組細胞0h、6h、12h、24h、48h,使用上述觀察方法,從而確定瘦素改善細胞脂肪變性的最佳時間,作出時效關系。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析,以P0.05作為差異顯著性標準。 結果:用脂肪乳注射液孵育人肝L-02細胞24小時后,經(jīng)油紅O染色后倒置顯微鏡觀察,人肝L-02細胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴;高效液相色譜法檢測示細胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增高,成功的制備肝細胞脂肪變性模型。加入瘦素(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)孵育24小時后,油紅O染色示胞漿內(nèi)脂滴與模型組比較明顯減低;高效液相色譜法結果發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)甘油三酯含量隨瘦素劑量的增高而降低;半定量RT-PCR法檢測各組細胞的OB-Rb及其目標基因STAT3、MTP的mRNA水平,結果顯示:瘦素處理組較模型組相比,OB-Rb及其目標基因的mRNA表達明顯上升,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。以瘦素(10-7mol/L)濃度為處理濃度,分別孵育模型組細胞0h、6h、12h、24h、48h后,結果發(fā)現(xiàn):瘦素呈時間依賴性的降低脂變細胞內(nèi)甘油三酯含量,同時呈時間依賴性的增加OB-Rb及其目標基因的mRNA的表達。 結論: 1.瘦素能降低體外人L-02脂變肝細胞內(nèi)甘油三酯的含量,呈時間、劑量依賴關系。 2.瘦素能促進OB-Rb及其目標基因STAT3、MTP基因的表達增強,呈劑量依賴關系。 3.瘦素降低細胞內(nèi)甘油三酯作用可能與OB-Rb及其目標基因表達上調(diào)有關。 4.人L-02脂變細胞內(nèi),可能存在以瘦素受體數(shù)量減少為原因的瘦素抵抗。
【圖文】：

實 驗 結 果1 肝細胞脂肪變性模型的建立：正常肝細胞為多邊形，胞核圓形，藍染, 胞膜界限清楚，細胞漿豐富，漿內(nèi)可見少量脂滴，呈紅色圓形，人肝 L-02 細胞用等體積的含體積分數(shù) 10醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培養(yǎng)基孵育人肝 L-02 胞 24 小時后，油紅 O 染色顯示胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴，肝細胞腫大細胞核位于細胞中央，，符合肝細胞小泡性脂肪變性特征（見圖 1、2）。高效相測定細胞內(nèi)總甘油三酯含量，模型組與正常組比較，細胞內(nèi)總甘油三酯含由 0.425±0.012mmol/g 蛋白上升至 1.592±0.238mmol/g 蛋白,明顯增高，差別統(tǒng)計學意義(p<0.01)，（見圖 3）。

實 驗 結 果1 肝細胞脂肪變性模型的建立：正常肝細胞為多邊形，胞核圓形，藍染, 胞膜界限清楚，細胞漿豐富，漿內(nèi)可見少量脂滴，呈紅色圓形，人肝 L-02 細胞用等體積的含體積分數(shù) 10醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培養(yǎng)基孵育人肝 L-02 胞 24 小時后，油紅 O 染色顯示胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴，肝細胞腫大細胞核位于細胞中央，符合肝細胞小泡性脂肪變性特征（見圖 1、2）。高效相測定細胞內(nèi)總甘油三酯含量，模型組與正常組比較，細胞內(nèi)總甘油三酯含由 0.425±0.012mmol/g 蛋白上升至 1.592±0.238mmol/g 蛋白,明顯增高，差別統(tǒng)計學意義(p<0.01)，（見圖 3）。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R575.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 黃丹丹;李自成;;瘦素對糖尿病性心肌病發(fā)病機制的影響[J];廣東醫(yī)學;2011年09期

2 張冬雪;朱慧莉;黃薇;張強;郭春;劉冬;黃燕;袁琦;;瘦素和瘦素受體在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的表達[J];中華婦幼臨床醫(yī)學雜志(電子版);2011年04期

3 孫雷雷;車淑玉;于洪升;蔣捍東;;非小細胞肺癌患者瘦素、OB-Rb、VEGF的表達及其臨床意義[J];山東醫(yī)藥;2011年25期

4 龔美蓉;王耘;姜軍作;徐斌;;不同電針頻率對肥胖大鼠下丘腦瘦素受體和胰島素受體基因表達的影響[J];時珍國醫(yī)國藥;2011年08期

5 龔姍;郝天羽;張書芬;;瘦素在人類生殖領域的研究現(xiàn)狀[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2011年04期

6 張旭;高艷華;趙海珍;;瘦素及其受體在胎盤組織中的表達及與新生兒出生體重的關系[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2011年16期

7 朱婷婷;趙萬;王凱;王蓉;殷詠梅;;瘦素干擾他莫昔芬抑制乳腺癌細胞MCF-7增殖作用的機制[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2011年07期

8 趙彩彥;王亞東;周俊英;李婧;;瘦素及其受體在非酒精性脂肪性肝炎發(fā)病機制中的作用[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年01期

9 崔楠;鄒大進;;誰決定脂肪的來去?[J];生命世界;2006年10期

10 李娟;張嶺漪;;血管內(nèi)皮生長因子與非酒精性脂肪性肝病[J];臨床肝膽病雜志;2011年08期

相關會議論文 前10條

1 趙紅莉;李雙慶;魏松全;李曉佳;安振梅;謝泰;;成人成骨細胞瘦素受體表達研究[A];中華醫(yī)學會第六次全國內(nèi)分泌學術會議論文匯編[C];2001年

2 潘傳芳;孫保木;劉成海;;脂肪性肝纖維化過程中肝臟瘦素受體蛋白表達及磷酸化的水平的變化[A];第二十次全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術會議暨消化疾病診治進展學習班論文匯編[C];2008年

3 毛湘冰;譙仕彥;;亮氨酸通過mTOR信號通路調(diào)節(jié)C2C12肌管瘦素受體表達的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2009學術年會論文集（下冊）[C];2009年

4 徐成勝;吳勇波;曾和松;;瘦素、胰島素及白細胞介素-6對鼠平滑肌細胞瘦素受體mRNA表達的影響[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

5 王佑民;傅祖植;;全長SD大鼠長胞內(nèi)段瘦素受體(OBRa)cDNA的克隆及其真核表達質(zhì)粒構建[A];中華醫(yī)學會第六次全國內(nèi)分泌學術會議論文匯編[C];2001年

6 周世勇;韓明哲;王華慶;;瘦素受體與急性白血病中的關系及其相關意義[A];第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文集[C];2006年

7 衣雪潔;李秋萍;趙大林;高淑杰;;耐力訓練對高脂膳食雌性大鼠瘦素受體和性發(fā)育的影響[A];體質(zhì)研究與健康促進論文集[C];2006年

8 郭英杰;王安利;;丙酮酸鈣對游泳大鼠瘦素和瘦素受體水平的影響[A];第八屆全國體育科學大會論文摘要匯編（一）[C];2007年

9 馬濤;;增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變和增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變中瘦素表達的相關研究[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

10 王芳;馬向華;沈捷;;吡格列酮對瘦素誘導的血管平滑肌細胞PCNA及OB—R表達的影響[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

相關重要報紙文章 前7條

1 記者 許琦敏;減肥信號受控于腦中“通訊員”[N];文匯報;2008年

2 曾凡新 董志 傅潔民;新靶點研究促進減肥新藥開發(fā)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

3 陳漢橋;大連為單純肥胖癥防治提供依據(jù)[N];中國醫(yī)藥報;2004年

4 張驍；束梅英;瘦素研究進展[N];中國醫(yī)藥報;2004年

5 傅杰英 吳艷華;針灸減肥新思路———刺激胃經(jīng)穴位降低瘦素抵抗[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 本報記者 唐逸;中國科學院上海生命科學研究院 劉勇發(fā)現(xiàn)胖瘦“調(diào)節(jié)閥”[N];北京科技報;2010年

7 記者 李天舒;我科研人員找出防治脂肪肝分子靶標[N];健康報;2009年

相關博士學位論文 前10條

1 黃蓉;瘦素及其受體與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征關系的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

2 劉正娟;瘦素對瘦素長、短型受體mRNA表達調(diào)節(jié)作用的研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

3 周世勇;瘦素受體與急性白血病中的關系及其相關意義[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2005年

4 賀松其;瘦素調(diào)控大鼠肝纖維化的信號轉導機制及保肝寧的干預作用[D];第一軍醫(yī)大學;2007年

5 陳靜;重慶市人群肥胖與相關疾病的關系調(diào)查及肥胖大鼠下丘腦瘦素受體的表達及意義[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

6 聶瑩雪;大鼠缺血再灌注損傷后皮層瘦素受體表達及ERK2、STAT3、NOS變化的研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

7 孫淑娟;瘦素調(diào)控血管新生機理的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

8 王友彬;瘦素對抽脂術后即時自體顆粒脂肪移植成活的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

9 李培兵;瘦素促進傷口愈合作用的機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2005年

10 薛秀蘭;靶向瘦素基因的siRNA對肝星狀細胞生物學活性影響的實驗研究[D];華中科技大學;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 袁文曄;瘦素對體外脂變HL-02細胞內(nèi)甘油三酯含量的影響[D];南華大學;2007年

2 李晶;血管內(nèi)皮生長因子和瘦素與糖尿病視網(wǎng)膜病變關系的研究[D];石河子大學;2006年

3 余慧;子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液瘦素的測定[D];蘇州大學;2007年

4 龔成;細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2在瘦素促進子宮內(nèi)膜癌細胞增殖中的作用[D];華中科技大學;2007年

5 李麗;非酒精性脂肪性肝病大鼠血清瘦素濃度及肝臟瘦素受體表達的研究[D];河北醫(yī)科大學;2005年

6 門潔;芳香化酶、瘦素及瘦素受體在子宮內(nèi)膜癌組織中表達的研究[D];青島大學;2005年

7 楊孝良;瘦素對人前脂肪細胞增殖及分化的影響[D];南昌大學;2008年

8 肖維;JAK2/STAT3信號轉導通路在瘦素促進子宮內(nèi)膜癌細胞增殖中的作用[D];華中科技大學;2007年

9 紀艷婷;血清瘦素及瘦素受體基因Gln223Arg多態(tài)性與妊娠期糖尿病的相關性研究[D];山東大學;2009年

10 葉潔梅;瘦素與前列腺癌關系的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2008年

本文編號：2648921