發(fā)布時(shí)間：2020-05-04 20:04

【摘要】： 目的:觀察瘦素對體外脂質(zhì)變性人肝L-02細(xì)胞甘油三酯含量以及OB-Rb(瘦素受體)、STAT3(信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子蛋白3)、MTP(微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白) mRNA表達(dá)的影響,以推斷瘦素、瘦素受體及其后信號通路,與非酒精性脂肪肝之間的可能關(guān)系,以探討瘦素調(diào)節(jié)脂變肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的作用機(jī)制,為今后進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。 方法:采用隨機(jī)對照研究,以離體人肝L-02細(xì)胞為研究對象。用10%(V/V)醫(yī)用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細(xì)胞24小時(shí),制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。后分別加入重組人瘦素(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)孵育24小時(shí),油紅O染色觀察細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況,高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法檢測MTP、OB-Rb和STAT3的mRNA表達(dá)。從而確定瘦素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳濃度,作出量效關(guān)系。然后以瘦素最佳濃度分別孵育模型組細(xì)胞0h、6h、12h、24h、48h,使用上述觀察方法,從而確定瘦素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳時(shí)間,作出時(shí)效關(guān)系。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示,用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以P0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果:用脂肪乳注射液孵育人肝L-02細(xì)胞24小時(shí)后,經(jīng)油紅O染色后倒置顯微鏡觀察,人肝L-02細(xì)胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴;高效液相色譜法檢測示細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增高,成功的制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。加入瘦素(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)孵育24小時(shí)后,油紅O染色示胞漿內(nèi)脂滴與模型組比較明顯減低;高效液相色譜法結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量隨瘦素劑量的增高而降低;半定量RT-PCR法檢測各組細(xì)胞的OB-Rb及其目標(biāo)基因STAT3、MTP的mRNA水平,結(jié)果顯示:瘦素處理組較模型組相比,OB-Rb及其目標(biāo)基因的mRNA表達(dá)明顯上升,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。以瘦素(10-7mol/L)濃度為處理濃度,分別孵育模型組細(xì)胞0h、6h、12h、24h、48h后,結(jié)果發(fā)現(xiàn):瘦素呈時(shí)間依賴性的降低脂變細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量,同時(shí)呈時(shí)間依賴性的增加OB-Rb及其目標(biāo)基因的mRNA的表達(dá)。 結(jié)論: 1.瘦素能降低體外人L-02脂變肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量,呈時(shí)間、劑量依賴關(guān)系。 2.瘦素能促進(jìn)OB-Rb及其目標(biāo)基因STAT3、MTP基因的表達(dá)增強(qiáng),呈劑量依賴關(guān)系。 3.瘦素降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯作用可能與OB-Rb及其目標(biāo)基因表達(dá)上調(diào)有關(guān)。 4.人L-02脂變細(xì)胞內(nèi),可能存在以瘦素受體數(shù)量減少為原因的瘦素抵抗。
【圖文】：

實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果1 肝細(xì)胞脂肪變性模型的建立：正常肝細(xì)胞為多邊形，胞核圓形，藍(lán)染, 胞膜界限清楚，細(xì)胞漿豐富，漿內(nèi)可見少量脂滴，呈紅色圓形，人肝 L-02 細(xì)胞用等體積的含體積分?jǐn)?shù) 10醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培養(yǎng)基孵育人肝 L-02 胞 24 小時(shí)后，油紅 O 染色顯示胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴，肝細(xì)胞腫大細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，，符合肝細(xì)胞小泡性脂肪變性特征（見圖 1、2）。高效相測定細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含量，模型組與正常組比較，細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含由 0.425±0.012mmol/g 蛋白上升至 1.592±0.238mmol/g 蛋白,明顯增高，差別統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，（見圖 3）。

實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果1 肝細(xì)胞脂肪變性模型的建立：正常肝細(xì)胞為多邊形，胞核圓形，藍(lán)染, 胞膜界限清楚，細(xì)胞漿豐富，漿內(nèi)可見少量脂滴，呈紅色圓形，人肝 L-02 細(xì)胞用等體積的含體積分?jǐn)?shù) 10醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培養(yǎng)基孵育人肝 L-02 胞 24 小時(shí)后，油紅 O 染色顯示胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴，肝細(xì)胞腫大細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，符合肝細(xì)胞小泡性脂肪變性特征（見圖 1、2）。高效相測定細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含量，模型組與正常組比較，細(xì)胞內(nèi)總甘油三酯含由 0.425±0.012mmol/g 蛋白上升至 1.592±0.238mmol/g 蛋白,明顯增高，差別統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，（見圖 3）。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R575.5

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本文編號：2648921