發(fā)布時間：2020-05-04 17:34

【摘要】：目的 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞（Liver sinusoidal endothelial cells,LSECs）是肝內(nèi)主要抗原遞呈細(xì)胞，可將抗原遞呈至T細(xì)胞，并誘導(dǎo)多種類型T細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受。目前尚缺乏HBV通過LSECs誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫耐受的研究報道。我們的研究目的在于闡明肝竇內(nèi)皮細(xì)胞在HBV感染獲得性免疫應(yīng)答中的功能，并研究通過天然免疫刺激劑（NOD1與TLR3配體）刺激LSECs，激活HBV的特異性免疫應(yīng)答及其可能的機制。為抗HBV免疫干預(yù)新策略的研究提供了理論依據(jù)。 方法 1.用膠原酶灌注與抗-CD146免疫磁珠分離方法分離C57BL/6小鼠LSECs。 2.尾靜脈高壓水注射PSM2質(zhì)粒方式構(gòu)建含HBV抗原特異T細(xì)胞小鼠模型�？笴D90.2磁珠分離方法分離HBV特異T細(xì)胞。 3. CFSE染色檢測NOD1、TLR3配體單獨或聯(lián)合刺激LSECs誘導(dǎo)的HBV特異T細(xì)胞增殖情況。 4.用NOD1、TLR3配體單獨或聯(lián)合刺激LSECs,3h收集細(xì)胞，，定量RT-PCR檢測IFN-β、IFN-γ、ISG15、IRF3、IL-6、TNF-α、TGF-β、IL-10、CCL2、CCL5、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10、β-actin mRNA表達(dá)水平。20h收集細(xì)胞及上清，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子：MHC-Ⅱ、CD80、CD86、PD-L1、CD106、CD54。定量ELISA檢測細(xì)胞上清中的細(xì)胞因子：IFNα/β/γ、TNF-α、IL-6。 結(jié)果 1. NOD1-TLR3協(xié)同刺激促進(jìn)小鼠LSECs誘導(dǎo)HBV抗原特異T細(xì)胞增殖。 2. NOD1-TLR3協(xié)同刺激上調(diào)小鼠LSECs趨化因子包括，CCL2、CCL5、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10mRNA表達(dá)水平。 3. NOD1-TLR3協(xié)同刺激上調(diào)小鼠LSECs粘附分子（CD54、CD106）的表達(dá)。 4. NOD1-TLR3刺激促進(jìn)LSECs分泌促炎性因子（IL-6、TNF-α）。 結(jié)論 1. LSECs對HBV抗原（HBsAg/HBeAg）的提呈不能誘導(dǎo)HBV特異性T細(xì)胞的增殖。 2.而模式識別受體（NOD1與TLR3）配體協(xié)同刺激可介導(dǎo)LSECs由免疫抑制狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槊庖呒せ顮顟B(tài)，誘導(dǎo)HBV特異性T細(xì)胞體外增殖。其可能機制包括：LSECs中NOD1與TLR3共同激活后，首先可誘導(dǎo)LSECs分泌多種趨化因子募集T細(xì)胞；誘導(dǎo)表面粘附分子CD54和CD106明顯上調(diào)，可能通過增強免疫突觸的形成促進(jìn)T細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附，為T細(xì)胞提供增殖活化信號。另外誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子IL6及TNF-α表達(dá)，可可能作為輔助因子增強信號分子誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)。本研究的創(chuàng)新點 1.我們的結(jié)果第一次顯示了HBV通過LSECs誘導(dǎo)了抗原特異性T細(xì)胞免疫耐受。 2.初步闡明了NOD1-TLR3的刺激可改變LSECs對HBV特異性T細(xì)胞應(yīng)答的免疫抑制狀態(tài)及其可能的機制。探索了NOD-TLR激動劑作為免疫調(diào)節(jié)劑的可能性，為抗HBV免疫干預(yù)新策略的研究提供了理論依據(jù)。 本研究的意義NOD1-TLR3介導(dǎo)的LSECs可參與HBV感染中特異性免疫應(yīng)答的激活，為探索NOD1-TLR3激動劑作為免疫調(diào)節(jié)劑和疫苗佐劑的應(yīng)用前景以及為抗病毒免疫干預(yù)新策略的研究提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李永偉;朱明芬;郭云蔚;陳偉;凌小強;李剛;;乙型肝炎病毒對HepG2細(xì)胞表達(dá)TLR3的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年12期

2 劉然義,屈伸,王劍波,過建莉,周華;共刺激分子B7-1與IL-6協(xié)同誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2000年02期

本文編號：2648752