【摘要】： 肝纖維化是一種肝臟對慢性損傷的“愈合反應(yīng)”,表現(xiàn)為肝臟炎癥細胞浸潤、肝內(nèi)膠原纖維異常增生、肝細胞變性壞死、肝組織結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞。臨床研究和動物實驗都已證明,持續(xù)炎癥是慢性肝病發(fā)展至肝纖維化的必經(jīng)途徑。因此探討肝纖維化時的肝性炎癥對深入研究肝纖維化的形成機制具有重要意義。 用于肝纖維化研究的動物模型有:中毒性肝損傷模型、膽汁性肝損傷模型、免疫性肝損傷性肝纖維化模型等,本研究則選用小鼠膽總管結(jié)扎致肝纖維化的動物模型。該模型具有操作簡單、穩(wěn)定可靠等特點,成為研究中十分常用的實驗?zāi)Ｐ�。在小鼠體內(nèi)行膽總管結(jié)扎術(shù)后,引起肝內(nèi)膽汁淤積(intrahaptic cholestasis,IC),肝細胞受到膽汁刺激,釋放趨化因子和細胞因子,使炎癥細胞等聚集到肝臟炎癥部位,進而出現(xiàn)肝細胞凋亡、壞死,反復(fù)與持續(xù)肝壞死與炎癥細胞浸潤就形成了肝纖維化的啟動因素。 在本課題中,通過膽總管結(jié)扎術(shù)成功建立并評價了小鼠膽汁淤積性肝纖維化模型,并以此為體內(nèi)模型研究了肝纖維化形成過程中的肝性炎癥。本實驗選用與炎癥相關(guān)的MCP-1、ICAM-1和MPO作為評價肝性炎癥浸潤的指標,觀察肝性炎癥的變化情況。實驗結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,肝臟組織MCP-1,ICAM-1和MPO mRNA表達水平明顯升高,炎癥細胞浸潤,導(dǎo)致肝功能受損。 Fox(forkhead/winged helix transcription factor)基因家族是2000年才統(tǒng)一命名的功能多樣的“翼螺旋”轉(zhuǎn)錄因子,該家族成員具有一個高度保守的Forkhead結(jié)構(gòu)域,具有DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄活化和轉(zhuǎn)錄抑制等功能,但不同亞類的調(diào)節(jié)功能有很大差異。Fox蛋白家族成員主要通過參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑廣泛調(diào)節(jié)各種生命活動。已有研究證明Foxj1、Foxd1、Foxp3、Foxo基因參與免疫自穩(wěn)和炎癥調(diào)節(jié),其中Foxo在炎癥相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。轉(zhuǎn)錄因子Foxo家族成員包括Foxo1、Foxo4、Foxo3a、Foxo6等,它們主要功能包括調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)細胞的平衡,通過多種不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與細胞周期停滯、細胞凋亡和抗氧化應(yīng)激等免疫相關(guān)調(diào)節(jié),還在物質(zhì)代謝等方面也發(fā)揮重要作用。由此提示:Foxo基因可能通過參與炎癥應(yīng)答,在調(diào)控肝性炎癥進程中發(fā)揮重要作用。 在課題中我們采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)、實時熒光定量PCR技術(shù),探討了Foxo基因家族成員在肝性炎癥進程中各時間點的mRNA表達水平。研究結(jié)果顯示:在小鼠膽總管結(jié)扎術(shù)后第1天至14天,肝組織中Foxo1基因的mRNA表達明顯低于假手術(shù)組(p0.05),且其表達水平的變化與炎癥指標ICAM-1表達變化呈一定相似性; Foxo4和Foxo6的表達變化非常相似,即在小鼠膽總管結(jié)扎術(shù)后第1天、3天,肝組織中Foxo4和Foxo6基因的mRNA表達水平明顯上升(P0.05)。以上結(jié)果首次提示:Foxo基因極有可能參與肝性炎癥的進程,在調(diào)控肝纖維化形成的早期過程中發(fā)揮重要作用。
【圖文】：

天狼猩紅染色結(jié)果顯示，小鼠膽總管結(jié)扎后2周，可見肝小葉中央靜脈周圍有大量的纖維絲形成，膠原纖維束沉積，呈較寬的條索狀纖維深入肝小葉見圖1-4。圖1-2 實時熒光定量PCR分析α-SMA結(jié)果FIG.1-2. Expression of α-SMA in liver from sham-operated control and bile duct ligatedmice.Quantitative reverse transcription PCR analysis determines expression of α-SMA in liversfrom sham and BDL mice normalized to TBP as internal control.The α-SMA mRNA levels weresignificantly higher in 5d and 2W of modeling than in sham-operated control.（p<0.01）

21Sham BDL 14d圖1-3 α-SMA免疫組化染色（20×）FIG.1-3 . Immunohistochemical staining of the rat liver by using anti-α-SMA (NeoMarkers) insham-operated control (C) mice and bile duct ligated (BDL) mice, reveals significant increase ofα-SMA-staining cells (dark brown) in the BDLrat liver from 2 weeks.Sham BDL-14d圖1-4 天狼猩紅染色 (20×）FIG.1-4 . Sirius red staining in sham-operated control mice and bile duct ligated mice. Collagencan be recognized by dark red staining of bands and fibers.Prolonged biliary obstruction wasaccompanied by a marked increase in collagen deposition around the portal triad and the centralvein (CV),evidenced by the Sirius red stain, which tinges the fibers of collagen in red.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R575.22

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Chau-Ting Yeh;Pei-Yeh Chang;Jeng-Chang Chen;;Comparison of murine cirrhosis models induced by hepatotoxin administration and common bile duct ligation[J];World Journal of Gastroenterology;2005年27期

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本文編號：2648636