【摘要】： 目的建立并優(yōu)化人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells, hUCBMSCs)的培養(yǎng)體系和體外標(biāo)記、體內(nèi)示蹤體系；觀察綠色熒光蛋白標(biāo)記的人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植給急性肝壞死大鼠模型后,移植細(xì)胞的體內(nèi)遷徙途徑、分化命運及間充質(zhì)干細(xì)胞對急性肝壞死大鼠模型的治療作用。 方法密度梯度離心、貼壁培養(yǎng)法分離人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞,低血清／富含血清兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞,單一人份／三人份混合兩種方式培養(yǎng)人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞。慢病毒為載體轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白基因至人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞做體外標(biāo)記。標(biāo)記的hUCBMSCs肝臟局部注射移植給模型大鼠,CCl4腹腔注射制造急性肝壞死模型；統(tǒng)計組間存活率差異探討間充質(zhì)干細(xì)胞移植對急性肝壞死大鼠模型的治療作用；移植后48h、72h、1w、2w、4w取模型大鼠肝組織做冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察中GFP-hUCBMSCs的遷徙途徑；免疫組織化學(xué)和實時熒光RT-PCR檢測移植細(xì)胞的分化和存活命運。 結(jié)果富含血清培養(yǎng)基和混合培養(yǎng)有利于人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的生長。綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光顯微鏡下呈現(xiàn)均一綠色熒光影像。hUCBMSCs移植治療急性肝壞死大鼠模型的存活期顯著延長。移植治療組48h存活率與對照組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。細(xì)胞移植給急性肝壞死模型鼠24h內(nèi)可見熒光信號由進(jìn)針孔遷徙至匯管區(qū),移植治療48h時移植細(xì)胞定居于匯管區(qū),48h后熒光信號向壞死病灶區(qū)域遷徙,1w后一定數(shù)量的移植細(xì)胞在壞死區(qū)域彌散定居,4w后未見熒光信號明顯衰弱。細(xì)胞移植給生理鹽水模擬造模組24h內(nèi)可見熒光信號由進(jìn)針孔遷徙至匯管區(qū),移植治療48h時移植細(xì)胞定居于匯管區(qū),48h后熒光信號隨機彌散分布,1w后熒光信號開始減弱,4w后熒光信號明顯衰弱。免疫組織化學(xué)檢測顯示在移植組模型鼠肝組織中有人類肝細(xì)胞特異性AFP、ALB、Hep parⅠ標(biāo)記蛋白表達(dá)。實時熒光RT-PCR分析移植組模型鼠肝組織中存在人類肝細(xì)胞特異性AFP、ALB、CK18、CK19mRNA基因表達(dá)。 結(jié)論本研究建立了優(yōu)化的人類臍血間從質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系和人類臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外標(biāo)記、體內(nèi)示蹤體系。移植細(xì)胞在模型鼠體內(nèi)經(jīng)過“進(jìn)針孔-匯管區(qū)”、“匯管區(qū)-壞死區(qū)域”的二次遷徙模式。移植細(xì)胞在模型鼠體內(nèi)呈現(xiàn)肝樣細(xì)胞表型。hUCBMSCs移植可明顯延長急性肝壞死大鼠模型存活期。其治療效果與移植細(xì)胞向病變部位靶向遷徙、定向分化有關(guān),也與免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞融合等機制相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R575

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2645564