【摘要】：研究目的： 通過將PHY106-CHBV質(zhì)粒(含C基因型HBV的全基因組)轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的正常人腎小球系膜細胞(NHMC),研究乙型肝炎病毒(HBV)在NHMC細胞內(nèi)的表達和對細胞凋亡的影響及淋巴細胞對表達乙肝標志物的NHMC細胞凋亡的影響。初步探討乙型肝炎病毒在乙型肝炎病毒相關性腎炎(HBV-GN)腎損傷中的作用機制。 方法： 采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將C基因型重組全長乙型肝炎病毒(PHY106-CHBV)轉(zhuǎn)染至人腎小球系膜細胞(NHMC)。收集24、48和72h細胞培養(yǎng)上清液,進行HBsAg與HBeAg的定量檢測；應用倒置顯微鏡和熒光顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化。MTT法檢測NHMC細胞增殖率。流式細胞儀檢測NHMC細胞凋亡率。半定量RT-PCR檢測Bax、Bcl-2mRNA在NHMC細胞內(nèi)的表達情況。Caspase-3酶活性檢測試劑盒檢測NHMC細胞內(nèi)Caspase-3酶的活性。將人外周血淋巴細胞與各組NHMC細胞共培養(yǎng),收集48h培養(yǎng)上清液進行HBsAg與HBeAg的定性檢測。MTT法檢測與人外周血淋巴細胞共培養(yǎng)的NHMC細胞的增殖率。流式細胞儀檢測共培養(yǎng)NHMC細胞的凋亡率。 結果： 轉(zhuǎn)染PHY106-CHBV的NHMC細胞培養(yǎng)上清液中可檢測至(?)HBsAg和HBeAg的高表達。轉(zhuǎn)染PHY106-CHBV48h后可誘導人腎小球系膜細胞形態(tài)學發(fā)生變化,表現(xiàn)為細胞皺縮、聚集,細胞稀疏,呈放射狀,細胞核出現(xiàn)大小不等的凋亡小體。MTT結果顯示實驗組細胞增殖受抑；流式細胞儀檢測顯示實驗組細胞凋亡率(5.84±1.70)%與正常對照組(1.09±0.55)%及陰性對照組(1.58±0.67)%比較明顯增加(P0.01)；半定量RT-PCR檢測結果示實驗組中Bax mRNA的表達比值為(0.32±0.02),高于空白對照組(0.22±0.02)及陰性對照組(0.25±0.02),其差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)；Bcl-2mRNA的表達比值在實驗組為(0.77±0.03)、空白對照組為(0.75±0.03)、陰性對照組為(0.75±0.01),其差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)；Caspase-3酶活性檢測顯示轉(zhuǎn)染PHY106-CHBV后可活化Caspase-3,其差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。NHMC細胞與人外周血淋巴細胞共培養(yǎng)后,實驗組細胞培養(yǎng)上清液中可檢測至(?)HBsAg和HBeAg的高表達。MTT結果顯示NHMC細胞增殖受抑制。流式細胞儀檢測結果顯示NHMC細胞凋亡率增加。實驗組細胞凋亡率(5.35±0.67)%與正常對照組(0.93±0.17)%及陰性對照組(1.22±0.22)%比較明顯增加(P0.01)。 結論： HBV可在人腎小球系膜細胞內(nèi)高表達,且能抑制細胞增殖,促進細胞凋亡。HBV能夠增強促凋亡基因Bax表達,通過活化Caspase-3誘導人腎小球系膜細胞凋亡。人外周血淋巴細胞可導致表達乙肝標志物的NHMC細胞凋亡增加。
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R512.62

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