【摘要】：目的：觀察過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（γPPARγ）對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）生物學(xué)特性、脂聯(lián)素表達(dá)的影響及其抗肝纖維化作用，為PPARγ抗肝纖維化的臨床運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：將大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)用含10%胎牛血清（FBS）的高糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)至貼壁，經(jīng)血清饑餓同步24小時(shí)，分成4個(gè)組，即：空白對(duì)照組（用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)）；羅格列酮（10μmol/L）刺激組；GW9662(1μmol/L)阻斷組；羅格列酮+GW9662組：（10μmol/L羅格列酮+1μmol/LGW9662）。四組分別培養(yǎng)24小時(shí)后，①四甲基偶氮唑鹽比色實(shí)驗(yàn)（MTT）檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況；②ELISA方法分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的脂聯(lián)素（Adiponectin）、I型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑2(TIMP2)的含量；③RT-PCR半定量檢測(cè)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)；④Westernblot方法檢測(cè)脂聯(lián)素及PPARγ蛋白表達(dá)。結(jié)果：1、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示羅格列酮組的肝星狀細(xì)胞增殖率較其他組明顯減弱（P＜0.01）；2、ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)羅格列酮組I型膠原及MMP2的表達(dá)量較羅格列酮+GW9662組、GW9662組、空白對(duì)照組明顯下降（P＜0.01）；羅格列酮組脂聯(lián)素及TIMP2的表達(dá)量較其他三組明顯升高（P＜0.01）；3、RT-PCR結(jié)果顯示羅格列酮組脂聯(lián)素、PPARγ mRNA的表達(dá)較羅格列酮+GW9662組、GW9662組、空白對(duì)照組明顯升高（P＜0.01）；且脂聯(lián)素和PPARγmRNA表達(dá)存在顯著相關(guān)關(guān)系（相關(guān)指數(shù)為0.970，P=0.000，P0.01）。4、Western blot結(jié)果顯示羅格列酮組脂聯(lián)素、PPARγ蛋白的含量顯著高于羅格列酮+GW9662組、GW9662組及空白對(duì)照組（P＜0.01）；且脂聯(lián)素和PPARγ蛋白表達(dá)存在顯著相關(guān)關(guān)系（相關(guān)指數(shù)為0.966，P=0.001，P0.01）。結(jié)論：PPARγ特異性激動(dòng)劑羅格列酮可以抑制HSC增殖，下調(diào)I型膠原及MMP2的表達(dá)，上調(diào)脂聯(lián)素、PPARγ及TIMP2的表達(dá)，增加細(xì)胞外基質(zhì)的降解，達(dá)到抗肝纖維化的作用。PPARγ特異性激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)HSC脂聯(lián)素、PPARγ的表達(dá)影響具有相關(guān)性。
【圖文】：

圖 1 ELISA 檢測(cè) HSC-T6 細(xì)胞脂聯(lián)素、I 型膠原、MMP2、TIMP2 含量的變化2.3.3 RT-PCR 檢測(cè) HSC-T6 細(xì)胞脂聯(lián)素和 PPARγ 的 mRNA 表達(dá)的變化RT-PCR 結(jié)果顯示：①羅格列酮組脂聯(lián)素 mRNA 相對(duì)表達(dá)量為 1.273±0.04較 GW9662 組、GW9662 加羅格列酮組、空白對(duì)照組（0.653±0.075、0.633±0.090.693±0.065）明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t 值分別為 12.264、10.733、12.69P<0.01)。②羅格列酮組 PPARγmRNA 相對(duì)表達(dá)量為 1.633±0.015，較 GW96組、GW9662 加羅格列酮組、空白對(duì)照組（0.403±0.015、0.450±0.026、0.457±0.01明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t 值分別為 8.619、7.089、4.343，P<0.01)。③它各組脂聯(lián)素、PPARγ mRNA 相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯差異（P>0.05）。④GW9662斷羅格列酮對(duì) PPARγmRNA 表達(dá)同時(shí)，也阻斷了羅格列酮對(duì)脂聯(lián)素 mRNA 的達(dá)。⑤脂聯(lián)素和 PPARγmRNA 表達(dá)存在顯著正相關(guān)關(guān)系（相關(guān)指數(shù)為 0.970P=0.000，P<0.01）。（見(jiàn)表 6，，圖 2、3）

RT-PCR檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞脂聯(lián)素、PPARγmRNA表達(dá)的影響
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2

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本文編號(hào)：2643430