【摘要】： 肝纖維化是各種致病因子持續(xù)作用于肝臟所導(dǎo)致各種慢性肝病的共同結(jié)果,是一種受損肝細(xì)胞的修復(fù)性反應(yīng)。肝星狀細(xì)胞的活化被公認(rèn)為是各種慢性肝病最終向肝纖維化轉(zhuǎn)變的必要條件。同時(shí),許多細(xì)胞因子參與到肝纖維化的過(guò)程中,其中以轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)最為關(guān)鍵。TGF-β1可以促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的活化、細(xì)胞外基質(zhì)的沉積并抑制膠原纖維的降解。 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)是一種具有促肝細(xì)胞有絲分裂、抑制肝細(xì)胞凋亡、抑制肝細(xì)胞炎癥等作用的多功能細(xì)胞因子�？紤]到肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的缺乏可能與慢性肝病的發(fā)生息息相關(guān),而肝纖維化又是各種慢性肝病的共同結(jié)果,因此認(rèn)為給予一定量的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子可能是改善肝纖維化的一種嶄新的治療策略。 目的 觀察不同時(shí)間點(diǎn)CCl4復(fù)合因素誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型的變化,尋求最佳的給藥時(shí)間點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。觀察肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)對(duì)CCl4復(fù)合因素誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠基因治療的效果,探討Ad-HGF逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用機(jī)制。 方法 1.觀察CCl4復(fù)合因素誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的動(dòng)態(tài)變化40只雄性Wistar大鼠,隨機(jī)分為兩個(gè)大組:模型組(25只)、正常對(duì)照組(15只)。模型組大鼠采用CCl4復(fù)合法(40%CCl4/橄欖油、高脂低蛋白飼料、5%乙醇)制備大鼠肝纖維化模型,正常對(duì)照組大鼠皮下注射等量的橄欖油。于造模的1周,4周,8周末,從模型組和正常對(duì)照組中分別隨機(jī)各選取5只大鼠組成:1周模型組、1周正常組、4周模型組、4周正常組、8周模型組、8周正常組,并于這3個(gè)相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)被分別處死。檢測(cè)大鼠血清生化指標(biāo)(GOT、GPT、TP、ALB、TBil )、肝指數(shù)以及肝組織中羥脯氨酸含量的變化;通過(guò)HE染色觀察肝臟組織病理學(xué)變化。確定最佳的給藥時(shí)間點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。 2.觀察Ad-HGF對(duì)大鼠肝纖維化的治療作用 25只雄性Wistar大鼠隨機(jī)平均分為5組:模型組,正常對(duì)照組,低(1×109 pfu)、中(2.5×109 pfu)、高(5×109 pfu)劑量治療組。模型組和治療組大鼠均采用CCl4復(fù)合法(40%CCl4/橄欖油、高脂低蛋白飼料、5%乙醇)制備大鼠肝纖維化模型,正常對(duì)照組大鼠皮下注射等量的橄欖油。從最佳的給藥時(shí)間點(diǎn)開(kāi)始,低、中、高劑量治療組大鼠分別經(jīng)尾靜脈注射相應(yīng)劑量Ad-HGF(3次/周,iv×2 wk),模型組和正常組大鼠給予等體積生理鹽水。在最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)間點(diǎn),處死所有大鼠。檢測(cè)血清生化指標(biāo)(GOT、GPT、TP、ALB、TBil )以及肝組織中Hpy的含量;通過(guò)HE染色觀察肝臟組織病理學(xué)變化;通過(guò)天狼星染色觀察肝臟組織中膠原的分布,并采用美國(guó)Image—Pro Plus專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件對(duì)天狼星染色的切片膠原面積進(jìn)行定量分析;運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)大鼠肝組織中HGF和TGF-β1的表達(dá),其陽(yáng)性區(qū)域采用美國(guó)Image—Pro Plus專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件進(jìn)行定量分析。 結(jié)果 1.模型大鼠肝纖維化的階段性變化 與1周正常組比較,1周模型組大鼠血清生化指標(biāo)GOT、GPT、TBil(均P0.01)和肝指數(shù)(P0.05)顯著地升高;與4周正常組比較,4周模型組大鼠血清中GOT、GPT、TBil,肝指數(shù)以及肝組織中Hyp含量均有顯著(均P0.01)的升高,TP, ALB有顯著(均P0.05)的下降。與8周正常組比較,8周模型大鼠血清中TP、ALB顯著(均P0.01)下降,GOT、GPT、TBil(均P0.05)以及肝組織中Hyp含量(P0.01)均顯著增高。病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明:造模1周時(shí),未見(jiàn)纖維組織形成;造模4周時(shí),見(jiàn)大量纖維組織形成;造模8周時(shí),見(jiàn)假小葉形成。確定最佳的給藥時(shí)間點(diǎn)為造模4周末;最佳的實(shí)驗(yàn)終止的時(shí)間點(diǎn)為造模8周末。 2.Ad-HGF基因治療大鼠抗肝纖維化的作用 與模型組比較,高劑量組大鼠血清中的GOT、GPT、TP、ALB、TBil都有明顯的改善(P0.05),中劑量組和高劑量組肝組織中的膠原面積(P0.05)、Hyp的含量(P0.05)、肝細(xì)胞損傷程度和肝纖維化程度(P0.01)都有顯著的下降。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:與模型組比較,Ad-HGF在低、中、高劑量組均可以顯著地提高肝組織中HGF蛋白的表達(dá)(P0.05),顯著地降低肝組織中TGF-β1的表達(dá)(P0.05)。 結(jié)論 1.CCl4復(fù)合因素誘導(dǎo)的模型大鼠出現(xiàn)階段性肝纖維化改變。造模4周末是比較理想的給藥時(shí)間點(diǎn),造模8周末是比較理想的造模結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。 2. Ad-HGF基因治療對(duì)CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化具有阻斷作用;其作用機(jī)制: 1)促進(jìn)HGF基因在肝組織中的表達(dá),從而發(fā)揮其促肝細(xì)胞再生、抑制肝細(xì)胞凋亡、減輕肝細(xì)胞損傷程度等作用; 2)抑制TGF-β1表達(dá),促進(jìn)膠原降解;抑制細(xì)胞外基質(zhì)的沉積,最終阻斷肝纖維化的進(jìn)程。Ad-HGF是一種比較合理的肝纖維化基因治療藥物。
【圖文】：

模型大鼠肝組織中病理組織學(xué)改變(HE 染色，×33)A: 正常對(duì)照組, B: 1 周模型型組，D:8 周模型組.1 Histopathological changes in liver tissue of model rats (HE staining, ×33) ) A: norm-week model group , C: 4-week model group，D: 8-week model group.結(jié)果提示: 造模 4 周末是比較理想的給藥時(shí)間點(diǎn)，造模 8 周末是比較結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。Ad-HGF 基因治療大鼠肝纖維化的作用1 Ad-HGF 基因治療肝纖維化大鼠肝臟整體形態(tài)的觀察模型組大鼠的肝臟呈土黃色，質(zhì)地硬，表面有大量粗大的沙粒樣突起時(shí)與周?chē)M織粘連比較嚴(yán)重。Ad-HGF 治療組大鼠肝臟表面較光滑

圖 3 Ad-HGF 基因治療大鼠肝臟標(biāo)本對(duì)照 Liver-specimen contrasts of rats with gene therapy of Ad-HGFGF 基因治療的肝纖維化大鼠肝功能血清生化指標(biāo)的變化對(duì)照組比較，模型組大鼠的血清指標(biāo)（GOT、GPT、TP、ALB、TBil）差異（P<0.05）。Ad-HGF 各個(gè)治療組的血清生化指標(biāo)和模型組比較均的改善。其中與模型組比較，高劑量治療組大鼠血清中 GOT、、TBil0.05）的下降，血清中的 TP 有顯著（P<0.05）的升高，血清中的 ALB（P<0.01）的升高（見(jiàn)表 5）。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R450;R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 王曉昆;唐瑛;;肝纖維化動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年03期

2 毛曉玲,楊冬華;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年01期

3 張麗梅,劉殿武;肝炎和肝纖維化基因治療的研究進(jìn)展[J];臨床薈萃;2004年19期

4 陳霞,李昌平;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β與肝纖維化的關(guān)系[J];臨床肝膽病雜志;2004年06期

5 潘亮,楊大明;血清羥脯氨酸含量在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化中的變化[J];南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年02期

6 賈俊清,賀立山;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)小鼠急性肝損傷保護(hù)作用的量效關(guān)系[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年02期

7 王麗春;趙連三;唐紅;劉麗;劉聰;堯凡;張紅英;;兩種肝纖維化的組織學(xué)量化方法的實(shí)驗(yàn)研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2007年01期

8 唐云安,劉玉清,王國(guó)欽;肝損傷動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2002年04期

9 王寶恩;肝星狀細(xì)胞與肝纖維化[J];中華肝臟病雜志;2000年04期

10 劉萱,賈繼東;肝纖維化的基因治療[J];中華肝臟病雜志;2005年06期

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本文編號(hào)：2643147