【摘要】：目的：食管胃底靜脈曲張是門(mén)脈高壓癥的嚴(yán)重并發(fā)癥,一旦破裂可造成大出血,危及患者生命。普萘洛爾(心得安)是目前預(yù)防肝硬化靜脈曲張破裂出血的最常用藥物,需要長(zhǎng)期、足量給藥。但肝硬化病人長(zhǎng)期服用普萘洛爾是否會(huì)對(duì)患者肝星狀細(xì)胞活化及肝纖維化產(chǎn)生影響,目前尚不得而知。而對(duì)肝硬化有無(wú)促進(jìn)或抑制作用是給肝硬化患者長(zhǎng)期服藥時(shí)需要考慮到的問(wèn)題。 本研究以肝纖維化的關(guān)鍵細(xì)胞—肝星狀細(xì)胞為研究對(duì)象,采用細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)技術(shù),觀察p-受體阻滯劑普萘洛爾對(duì)人肝星狀細(xì)胞(Hepatic Stellate Cell,HSC)的增殖、凋亡以及致肝纖維化作用的影響,目的是探討普萘洛爾對(duì)肝星狀細(xì)胞形態(tài)和功能的影響,從而闡明肝硬化患者長(zhǎng)期服用普萘洛爾對(duì)肝纖維化有無(wú)潛在的促進(jìn)或抑制作用。 方法：采用HSC-LX2肝星狀細(xì)胞系作為活化肝星狀細(xì)胞的研究模型,在培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞中分別加入不同濃度的鹽酸普萘洛爾(10μmol·L-1、25μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1),于24小時(shí)收集細(xì)胞,觀察HSC的生長(zhǎng)情況。采用水溶性四唑鹽-1(Water-Soluble Tetrazolium-1,WST-1)細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)不同藥物濃度下肝星狀細(xì)胞的增殖情況,流式細(xì)胞儀(Fluorescence Activated Cell Sorting,FACS)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。提取細(xì)胞蛋白成分,用Western blotting法檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Smooth Muscle Actin,a-SMA)表達(dá)水平。提取細(xì)胞培養(yǎng)液上清,用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2)以及膠原I、III的表達(dá)水平。數(shù)值用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,不同組間結(jié)果的比較用單因素方差分析(One-way ANOVA),兩個(gè)組之間的比較采用最小顯著差(the Least Significant Difference,LSD) t檢驗(yàn),P0.05為差異有顯著性。 結(jié)果：采用WST-1試劑盒檢測(cè)HSC增殖情況,普萘洛爾可抑制HSC的增殖,且隨藥物濃度增高,其抑制作用逐漸增強(qiáng),抑制率由35.51%逐漸上升至95.74%。FACS法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,普萘洛爾可促進(jìn)HSC的凋亡,且呈劑量依賴性,隨普萘洛爾濃度增加,HSC凋亡率逐漸升高,各組依次為54.97±0.86%、57.17±1.15%、66.30±1.11%和81.96±1.72%,與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用Western blotting法檢測(cè)HSC表達(dá)α-SMA的水平,普萘洛爾處理組細(xì)胞α-SMA的表達(dá)水平(四組灰度比值依次為0.6771±0.0064、0.6899±0.0185、0.6271±0.0091和0.5951±0.0219)明顯低于正常對(duì)照組(0.7550±0.0157)和生理鹽水組(0.7439±0.0165),具有顯著性差異,且與劑量具有相關(guān)性。采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中TGF-β1、MMP-2以及膠原Ⅰ、Ⅲ的表達(dá)水平,普萘洛爾可濃度依賴性地抑制HSC分泌TGF-β1、MMP-2以及膠原Ⅰ、Ⅲ的水平。 結(jié)論： 1.普萘洛爾可使HSC-LX2的活化、增殖受到明顯抑制,且呈濃度依賴性,其發(fā)揮作用可能是通過(guò)與β-AR結(jié)合實(shí)現(xiàn)的。 2.普萘洛爾可使HSC-LX2的凋亡率明顯升高,且呈濃度依賴性,提示普萘洛爾可能通過(guò)與β-AR結(jié)合促進(jìn)HSC凋亡 3.普萘洛爾可濃度依賴性地抑制HSC-LX2表達(dá)α-SMA和分泌TGF-β1、MMP-2以及Ⅰ、Ⅲ型膠原。 上述結(jié)果提示肝硬化患者長(zhǎng)期服用普萘洛爾可能具有減緩肝纖維化、抑制細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生并繼而降低肝竇內(nèi)阻力的作用。
【圖文】：

濃度的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)(表1)。按下面的公式計(jì)算普蔡洛爾對(duì)HSC的細(xì)胞增殖抑制率(%)=〔1一(A藥物獷A調(diào)零組)/(A對(duì)照獷A調(diào)零組)〕X10O%，得出的結(jié)果如圖2所示，普蔡洛爾隨著濃度的增加，對(duì)HSC增殖的抑制率由35.51%逐漸上升至95.740k，證明普蔡洛爾對(duì)HSC的增殖有抑制作用，且組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(只0.05)。表1普蔡洛爾對(duì)HSC增殖的影響組別次數(shù)(n)吸光度值抑制率(y0)調(diào)零組 50.3517士0.0121正常對(duì)照組 50.5277士0.0204生理鹽水組 50.5163士 0.01456.4810林mol·L一，普蔡洛爾組 50.4652士0.0121**35.5125林mol·L一，普蔡洛爾組 50.4388士0.0193**50.5150林mol·L一，普蔡洛爾組 50.4239士0.0272**64.66100林mol·L一，普蔡洛爾組 50.3592士0.0131**95.74*與正常對(duì)照組相比只0.05

及普蔡洛爾組(54.97士0.86%、57.17士1.15%、66.30士1.11%、81.96士1.72%)HSC的凋亡率與正常對(duì)照組相比升高(36.27士0.61%)，且有顯著性差異(代0.05)，，普蔡洛爾濃度越高，細(xì)胞凋亡越明顯(表2、圖3)。表2普蔡洛爾對(duì)HSC凋亡的影響組別次數(shù)(n)凋亡率(%)正常對(duì)照組 336.27士0.61生理鹽水組 341.47士0.93*10林mol·L一，普蔡洛爾組 354.97士0.86**25腳01·L一，普蔡洛爾組 357.17士1.15**50林mol·L一，普蔡洛爾組 366.30士1.11**100林mol·L一‘普蔡洛爾組 381.96士一72***與正常對(duì)照組相比P<0.05，*與生理鹽水組相比P<O.05謬 1111111 CCCCCCCCC拳拳一 一 一氣 氣 222 111)))‘‘畝心 ...一一…~{嗽歲萬(wàn)-一—一萬(wàn) 萬(wàn) lllllll FFFFFFFFF一一季 季 季FFF’ ’ ......;;;黔。 。一一{澡獷’ ’圖3A:正常對(duì)照組D:25林mol·L一’普蔡洛爾組普蔡洛爾對(duì)HSC凋亡的影響B(tài):生理鹽水組E:50四ol.L一’普茶洛爾組10件mol·I100林mol·普蔡洛爾普蔡洛力組(組.…CF
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575.2

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 曲春曉;肝靜脈壓力梯度短期變化預(yù)測(cè)β受體阻滯劑長(zhǎng)期療效的初步研究[D];山東大學(xué);2012年

2 任榮榮;卡維地洛與普萘洛爾降低肝硬化門(mén)靜脈高壓患者HVPG的近期療效比較[D];山東大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2642434