【摘要】：重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）作為常見的重癥疾病，病死率非常高，死亡主要的原因是細(xì)胞因子（如TNF-α）的激活、免疫功能的紊亂以及炎癥介質(zhì)的釋放。因血流動(dòng)力學(xué)和解剖的關(guān)系，肝臟成為SAP最早累及的胰外器官之一，其并發(fā)肝損傷的機(jī)率可高達(dá)88.9%[1]，其機(jī)制主要是失控性炎癥反應(yīng)及機(jī)體免疫功能紊亂。而NF-κB在上述病變的發(fā)生過程中起著"信使"作用。作為重要的轉(zhuǎn)錄因子,NF-κB參與免疫反應(yīng)和淋巴細(xì)胞分化,其活化可能調(diào)控著SAP的啟動(dòng)。NF-κB信號(hào)通路對(duì)Foxp3表達(dá)的調(diào)控起著非常關(guān)鍵的作用，當(dāng)NF-κB被激活或信號(hào)強(qiáng)度增強(qiáng)時(shí)可直接促進(jìn)Foxp3的表達(dá)和Treg細(xì)胞的增加，，從而分泌大量的抑制性細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫功能的紊亂。SAP肝損傷重要的發(fā)病機(jī)制之一為腸源性內(nèi)毒素血癥，祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為內(nèi)毒素血癥在病機(jī)上為邪實(shí)正虛，所以治療應(yīng)是祛邪與扶正的有機(jī)結(jié)合[2]。連翹具有抗內(nèi)毒素、抗炎，又有其顯著的增強(qiáng)機(jī)體免疫和解毒系統(tǒng)對(duì)內(nèi)毒素予以解毒的功效[3]。且目前尚未見在SAP肝損傷中應(yīng)用的報(bào)告。本實(shí)驗(yàn)擬探討核因子(NF)-κB和Foxp3在重癥急性胰腺炎（SAP）肝損傷中的作用機(jī)制及連翹對(duì)其表達(dá)活性和SAP肝損傷保護(hù)的影響。 研究目的探討核因子(NF)-κB和CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在重癥急性胰腺炎（SAP）肝損傷中的作用及其可能的機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法雄性Wistar大鼠48只，隨機(jī)分成假手術(shù)組（SO組）（n=24）和模型組（SAP組）（n=24）。SO組僅翻動(dòng)胰腺，不注射牛黃膽酸鈉（NaTc），SAP組逆行性胰膽管注射�；悄懰徕c溶液（0.1ml/100g），SO組和SAP組均于術(shù)后3h、6h、12h在麻醉下處死大鼠，無菌操作法分別留取腹主動(dòng)脈血、胰腺、肝臟的標(biāo)本待測(cè)。生化儀測(cè)各組血淀粉酶（AMY）及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平，放射免疫法測(cè)血漿腫瘤壞死因子（TNF-α），鱟試劑法測(cè)血漿內(nèi)毒素含量，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)外周血Treg百分?jǐn)?shù)，對(duì)胰腺及肝臟進(jìn)行病理學(xué)檢查及評(píng)分，RT-PCR法檢測(cè)肝臟組織中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表達(dá)量,并對(duì)上述所有指標(biāo)統(tǒng)計(jì)后進(jìn)行分析。 主要結(jié)果與SO組比較，SAP組中各項(xiàng)指標(biāo)均隨時(shí)間升高，并于12h達(dá)高峰，外周血中的Treg百分?jǐn)?shù)與血漿中的AMY、ALT及TNF-α的含量均隨時(shí)間明顯升高，SAP組的肝臟、胰腺有明顯的病理性改變，各時(shí)間點(diǎn)胰腺、肝臟病理學(xué)評(píng)分均顯著高于SO組（P0.01）。此外肝臟組織NF-κBmRNA的增高導(dǎo)致了Foxp3mRNA和外周血Treg表達(dá)明顯升高，呈時(shí)間依賴性和動(dòng)態(tài)性，（p0.01），NF-κBmRNA的表達(dá)與Treg呈正相關(guān)（r=0.738，p0.01）。主要結(jié)論SAP可引起肝損傷，NF-κB高水平激活和Treg大量增多參與SAP肝損傷的發(fā)生。 研究目的研究各個(gè)濃度的連翹水煎液對(duì)SAP大鼠肝損傷12h后的肝臟組織中NF-κB和Foxp3水平表達(dá)的影響，探討在用連翹干預(yù)后對(duì)SAP肝損傷大鼠中的NF-κB作用及免疫調(diào)節(jié)作用以及兩者之間的可能機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法雄性Wistar大鼠48只，隨機(jī)分成假手術(shù)組（SO組）（n=8）、SAP組（n=8）和干預(yù)組（n=32），其中干預(yù)組分連翹高（AFS1組）、中（AFS2組）、低（AFS3組）劑量組和陽性對(duì)照組(PDTC組)。連翹干預(yù)組在造摸前7天開始給藥，給予連翹水煎液H（5g/kg）、M（2.5g/kg）、L（1.25g/kg），每天一次，選用灌胃方式。陽性對(duì)照組于造摸前1小時(shí)給藥，100mg／Kg，腹腔注射。每組的模型制作及在12小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)上留取的標(biāo)本均同第一章。測(cè)各組血淀粉酶（AMY）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）及TNF-α水平，鱟試劑法測(cè)血漿內(nèi)毒素含量，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)外周血Treg百分?jǐn)?shù)，對(duì)胰腺及肝臟進(jìn)行病理學(xué)檢查及評(píng)分，RT-PCR法檢測(cè)肝臟組織中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表達(dá)量，并對(duì)上述所有指標(biāo)統(tǒng)計(jì)后進(jìn)行分析。 主要結(jié)果與SO組比較，SAP組外周血中的Treg百分?jǐn)?shù)與血漿中的AMY、ALT及TNF-α的含量均于12h時(shí)明顯升高，且肝臟、胰腺有明顯的病理性改變，同時(shí)胰腺、肝臟病理學(xué)評(píng)分均顯著高于SO組（P0.01）。干預(yù)組（大鼠死亡率為0）肝臟組織中的上述指標(biāo)明顯下降，NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表達(dá)的降低與Treg呈正相關(guān)（r=0.738，p0.01）。隨連翹劑量增加，AMY、ALT及TNF-α的含量均明顯降低，肝臟和胰腺組織炎癥明顯減輕，高劑量組和陽性對(duì)照組相比較無明顯差異（p0.05）。 結(jié)論 1采用5%牛磺膽酸鈉造模后，病理學(xué)檢測(cè)證實(shí)：胰腺和肝臟組織中出現(xiàn)了不同程度的壞死、水腫、出血及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，說明大鼠重癥急性胰腺炎造模成功。 2隨SAP的發(fā)展，肝功能及病理損害進(jìn)行性加重，證實(shí)SAP時(shí)出現(xiàn)了肝功能的障礙和肝損傷。 3SAP的進(jìn)行性發(fā)展可引起肝損傷，肝臟組織中NF-κB、Foxp3的含量及外周血中Treg百分率升高，NF-κB高水平激活和Treg大量增多參與SAP肝損傷的發(fā)生。 4SAP時(shí)，應(yīng)用連翹能顯著降低NF-κB的活性及肝臟組織中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA的表達(dá)，減輕SAP肝損傷的嚴(yán)重程度。連翹通過抗炎、抗內(nèi)毒素作用及其顯著的增強(qiáng)機(jī)體免疫的功能對(duì)SAP大鼠的肝損傷起著重要的治療作用。 上述研究了NF-κB和Foxp3在重癥急性胰腺炎所致肝損傷中的作用機(jī)理及連翹對(duì)其表達(dá)活性和SAP肝損傷保護(hù)的影響，從而為治療重癥進(jìn)行胰腺炎提供新辦法。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R576

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;Protection effect of triptoKde to Kver injury in rats with severe acute pancreatitis[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2005年04期

2 孔瑞;孫備;;重癥急性胰腺炎并發(fā)肝損傷的研究進(jìn)展[J];國(guó)際外科學(xué)雜志;2006年06期

3 李蕓霞,蔣學(xué)華,周靜;大鼠在體吸收連翹苷的機(jī)理研究[J];華西藥學(xué)雜志;2005年05期

4 李敏利;張曉華;楊妙芳;季洪贊;郭婧蕓;朱人敏;;JAK/STAT信號(hào)通路在胰彈性蛋白酶誘導(dǎo)大鼠Kupffer細(xì)胞分泌促炎因子中的作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2008年10期

5 張維山,冷啟新,王金平;轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在內(nèi)毒素休克中的作用[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2005年02期

6 傅強(qiáng),崔華雷,崔乃杰;連翹提取物抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];天津醫(yī)藥;2003年03期

7 高淑娟;戴錫珍;要華民;;幾種清熱解毒中藥抗內(nèi)毒素作用的比較實(shí)驗(yàn)[J];天津中醫(yī);1992年03期

8 韓雙紅,王玉芬,張居馨,陳衛(wèi)平;連翹敗毒片的抗內(nèi)毒素及免疫調(diào)節(jié)作用研究[J];天津中醫(yī)藥;2004年05期

9 傅穎s

本文編號(hào)：2641652