【摘要】：重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）作為常見的重癥疾病，病死率非常高，死亡主要的原因是細胞因子（如TNF-α）的激活、免疫功能的紊亂以及炎癥介質的釋放。因血流動力學和解剖的關系，肝臟成為SAP最早累及的胰外器官之一，其并發(fā)肝損傷的機率可高達88.9%[1]，其機制主要是失控性炎癥反應及機體免疫功能紊亂。而NF-κB在上述病變的發(fā)生過程中起著"信使"作用。作為重要的轉錄因子,NF-κB參與免疫反應和淋巴細胞分化,其活化可能調控著SAP的啟動。NF-κB信號通路對Foxp3表達的調控起著非常關鍵的作用，當NF-κB被激活或信號強度增強時可直接促進Foxp3的表達和Treg細胞的增加，，從而分泌大量的抑制性細胞因子來調節(jié)免疫功能的紊亂。SAP肝損傷重要的發(fā)病機制之一為腸源性內毒素血癥，祖國醫(yī)學認為內毒素血癥在病機上為邪實正虛，所以治療應是祛邪與扶正的有機結合[2]。連翹具有抗內毒素、抗炎，又有其顯著的增強機體免疫和解毒系統(tǒng)對內毒素予以解毒的功效[3]。且目前尚未見在SAP肝損傷中應用的報告。本實驗擬探討核因子(NF)-κB和Foxp3在重癥急性胰腺炎（SAP）肝損傷中的作用機制及連翹對其表達活性和SAP肝損傷保護的影響。 研究目的探討核因子(NF)-κB和CD4~+CD25~+調節(jié)性T細胞（Treg）在重癥急性胰腺炎（SAP）肝損傷中的作用及其可能的機制。 實驗方法雄性Wistar大鼠48只，隨機分成假手術組（SO組）（n=24）和模型組（SAP組）（n=24）。SO組僅翻動胰腺，不注射牛黃膽酸鈉（NaTc），SAP組逆行性胰膽管注射牛磺膽酸鈉溶液（0.1ml/100g），SO組和SAP組均于術后3h、6h、12h在麻醉下處死大鼠，無菌操作法分別留取腹主動脈血、胰腺、肝臟的標本待測。生化儀測各組血淀粉酶（AMY）及谷丙轉氨酶（ALT）水平，放射免疫法測血漿腫瘤壞死因子（TNF-α），鱟試劑法測血漿內毒素含量，流式細胞術測外周血Treg百分數，對胰腺及肝臟進行病理學檢查及評分，RT-PCR法檢測肝臟組織中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表達量,并對上述所有指標統(tǒng)計后進行分析。 主要結果與SO組比較，SAP組中各項指標均隨時間升高，并于12h達高峰，外周血中的Treg百分數與血漿中的AMY、ALT及TNF-α的含量均隨時間明顯升高，SAP組的肝臟、胰腺有明顯的病理性改變，各時間點胰腺、肝臟病理學評分均顯著高于SO組（P0.01）。此外肝臟組織NF-κBmRNA的增高導致了Foxp3mRNA和外周血Treg表達明顯升高，呈時間依賴性和動態(tài)性，（p0.01），NF-κBmRNA的表達與Treg呈正相關（r=0.738，p0.01）。主要結論SAP可引起肝損傷，NF-κB高水平激活和Treg大量增多參與SAP肝損傷的發(fā)生。 研究目的研究各個濃度的連翹水煎液對SAP大鼠肝損傷12h后的肝臟組織中NF-κB和Foxp3水平表達的影響，探討在用連翹干預后對SAP肝損傷大鼠中的NF-κB作用及免疫調節(jié)作用以及兩者之間的可能機制。 實驗方法雄性Wistar大鼠48只，隨機分成假手術組（SO組）（n=8）、SAP組（n=8）和干預組（n=32），其中干預組分連翹高（AFS1組）、中（AFS2組）、低（AFS3組）劑量組和陽性對照組(PDTC組)。連翹干預組在造摸前7天開始給藥，給予連翹水煎液H（5g/kg）、M（2.5g/kg）、L（1.25g/kg），每天一次，選用灌胃方式。陽性對照組于造摸前1小時給藥，100mg／Kg，腹腔注射。每組的模型制作及在12小時的時間點上留取的標本均同第一章。測各組血淀粉酶（AMY）、谷丙轉氨酶（ALT）及TNF-α水平，鱟試劑法測血漿內毒素含量，流式細胞術測外周血Treg百分數，對胰腺及肝臟進行病理學檢查及評分，RT-PCR法檢測肝臟組織中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表達量，并對上述所有指標統(tǒng)計后進行分析。 主要結果與SO組比較，SAP組外周血中的Treg百分數與血漿中的AMY、ALT及TNF-α的含量均于12h時明顯升高，且肝臟、胰腺有明顯的病理性改變，同時胰腺、肝臟病理學評分均顯著高于SO組（P0.01）。干預組（大鼠死亡率為0）肝臟組織中的上述指標明顯下降，NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表達的降低與Treg呈正相關（r=0.738，p0.01）。隨連翹劑量增加，AMY、ALT及TNF-α的含量均明顯降低，肝臟和胰腺組織炎癥明顯減輕，高劑量組和陽性對照組相比較無明顯差異（p0.05）。 結論 1采用5%�；悄懰徕c造模后，病理學檢測證實：胰腺和肝臟組織中出現了不同程度的壞死、水腫、出血及炎細胞浸潤，說明大鼠重癥急性胰腺炎造模成功。 2隨SAP的發(fā)展，肝功能及病理損害進行性加重，證實SAP時出現了肝功能的障礙和肝損傷。 3SAP的進行性發(fā)展可引起肝損傷，肝臟組織中NF-κB、Foxp3的含量及外周血中Treg百分率升高，NF-κB高水平激活和Treg大量增多參與SAP肝損傷的發(fā)生。 4SAP時，應用連翹能顯著降低NF-κB的活性及肝臟組織中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA的表達，減輕SAP肝損傷的嚴重程度。連翹通過抗炎、抗內毒素作用及其顯著的增強機體免疫的功能對SAP大鼠的肝損傷起著重要的治療作用。 上述研究了NF-κB和Foxp3在重癥急性胰腺炎所致肝損傷中的作用機理及連翹對其表達活性和SAP肝損傷保護的影響，從而為治療重癥進行胰腺炎提供新辦法。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R576

【參考文獻】

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9 傅穎s

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