【摘要】： 目的：(1)探討慢性重型肝炎患者的血清胎球蛋白A(fetuin—A)水平與肝損害程度、預(yù)后及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor—α，TNF-α)的關(guān)系。(2)體外觀察在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激下，胎球蛋白A對人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)分泌TNF-α和IL-6的影響。(3)建立一種簡便、有效、穩(wěn)定的暴發(fā)性肝衰竭(fulminant hepatic failure，F(xiàn)HF)動物模型，觀察該模型動物不同時間點(diǎn)胎球蛋白A的表達(dá)情況；并用胎球蛋白A對FHF模型小鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察胎球蛋白A對實(shí)驗(yàn)動物肝功能、肝臟組織學(xué)改變、肝細(xì)胞凋亡率和病死率的影響，并進(jìn)一步探討可能的機(jī)制。 方法：(1)設(shè)立健康對照組、慢性肝炎組和慢性重型肝炎組，慢重肝組中分設(shè)恢復(fù)組和未恢復(fù)組，檢測血清胎球蛋白A、TNF—α、凝血酶原活動度、白蛋白和總膽紅素。(2)常規(guī)分離培養(yǎng)人外周血單個核細(xì)胞，2％臺盼藍(lán)進(jìn)行細(xì)胞活力檢測后，分組觀察胎球蛋白A干預(yù)對上清液中TNF-α和IL-6的表達(dá)量變化(ELISA法)。(3)采用析因試驗(yàn)法，以小鼠24 h病死率為評價指標(biāo)，以實(shí)驗(yàn)鼠的血清肝功能和肝組織病理學(xué)改變?yōu)轵?yàn)證指標(biāo)，建立規(guī)范化小鼠FHF模型。(4)利用RT-PCR、Western Blot和免疫組化技術(shù)，分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平研究FHF模型小鼠胎球蛋白A的表達(dá)變化。(5)分組觀察胎球蛋白A的干預(yù)對模型小鼠的24h病死率、肝功能、肝組織病理改變(HE染色)、肝細(xì)胞凋亡率(原位末端標(biāo)記法，TUNEL)改變和血清中TNF-α和IL-6的水平(ELISA法)的影響。 結(jié)果：(1)血清胎球蛋白A水平在慢性重型肝炎患者(114.02±89.11μg／ml)較健康對照者(317.75±107.83μg／ml)和慢性肝炎患者(253.14±206.45μg／ml)明顯降低(P＜0.01)；在慢性重型肝炎患者未恢復(fù)組(82.53±47.90μg／ml)較恢復(fù)組(203.05±112.94μg／ml)明顯降低(P＜0.01)；與凝血酶原活動度(Rho=0.493，P＜0.01)和血清白蛋白水平顯著正相關(guān)(Rho=0.420，P＜0.01)，與血清總膽紅素水平顯著負(fù)相關(guān)(Rho=—0.463，P＜0.01)；與血清TNF—α水平顯著負(fù)相關(guān)(Rho=—0.378，P＜0.01)。(2)胎球蛋白A與精胺的聯(lián)合應(yīng)用顯著抑制了LPS刺激下人PBMC分泌TNF-α(24.89±7.71 pg／ml)和IL-6(112.91±37.80 pg／ml)的水平(P＜0.01)。 (3)采用析因?qū)嶒?yàn)法篩選出D-GalN 800 mg／kg+LPS 0.04 mg／kg和D-GalN 600 mg／kg+LPS 0.5 mg／kg均為合適建模劑量組合，并通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)確證。(4)在FHF小鼠模型中，隨著肝損傷的加重，胎球蛋白A的表達(dá)逐漸減少，胎球蛋白AmRNA的表達(dá)量下降早于蛋白。免疫組化的結(jié)果顯示胎球蛋白A主要在肝細(xì)胞的胞漿中表達(dá)，部分在胞膜表達(dá)。(5)胎球蛋白A干預(yù)明顯降低FHF小鼠的病死率(由83％降至25％，P＜0.05)，明顯降低血清ALT的水平(由291370.76±29241.68nkat／L降至31585.15±4086.35 nkat／L，P＜0.05)，降低血清和肝組織中TNF—α和IL-6的水平(P＜0.05)，減輕肝組織炎癥壞死程度，減輕肝細(xì)胞凋亡的程度(凋亡指數(shù)由FHF模型組的23.10±7.39降至2.20±2.97，P＜0.05)。 結(jié)論：(1)慢性重型肝炎患者的血清胎球蛋白A水平與肝臟損害嚴(yán)重程度、血清TNF-α水平及預(yù)后密切相關(guān)。(2)胎球蛋白A和精胺合用可以有效抑制LPS刺激下人PBMC釋放TNF-α和IL-6。(3)以析因?qū)嶒?yàn)法建立一種規(guī)范、重復(fù)性好、費(fèi)效比低的FHF模型；在該模型中，隨著肝損傷的加重，胎球蛋白A的表達(dá)逐漸減少；胎球蛋白A的干預(yù)可以改善由D-Galn和LPS誘導(dǎo)的暴發(fā)性肝衰竭，其可能的機(jī)制之一是通過抑制TNF-α和IL-6等炎癥介質(zhì)的表達(dá)。
【圖文】：

巨.到圖2一1:各實(shí)驗(yàn)組中TNF-Q的濃度2.2.2各實(shí)驗(yàn)組中PBMC分泌IL一6的量(見表2一2，，圖2一2)(一)PBMC在受到 LPS(100ng/ml)刺激后，釋放大量的IL一 6(581.05士122.89Pg/m1)(見表2一2，圖2一2，第2組);

3，4，5組;洲 #P<0.05vsl只，3，4，6組6005004003002001000份到圖2一:各實(shí)驗(yàn)組上清夜中IL-6的表達(dá)量圖2.3討論本研究結(jié)果顯示在LPS刺激下，人PBMC分泌TNF一Q和IL一6明顯增加，與之前的研究結(jié)果一致【”，。在精胺同時存在的前提下，胎球蛋白A可以協(xié)同作用，抑制這兩種炎癥介質(zhì)的釋放，胎球蛋白A和精胺合用可以明顯增強(qiáng)抑制作用顯著精胺是一種常見的內(nèi)生性生物胺，在炎癥和感染的部位明顯增加。把精胺加
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R575.3

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本文編號：2641683