【摘要】：[目的]構(gòu)建mHSF2原核表達載體,純化mHSF2重組蛋白并研究其在體外是否具有生物活性,能否進入細胞發(fā)揮生物學功能。[方法]以mHSF2為模板,PCR法擴增出全長mHSF2編碼系列,用BamHI和xhoI對純化產(chǎn)物和pET-28a載體進行雙酶切,采用基因重組技術(shù)將mHSF2片段插入至pET-28a原核表達載體中。測序正確后,將pET-28a-mHSF2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21中,利用IPTG誘導宿主菌表達mHSF2,考馬斯亮藍染色及Western Blot鑒定重組蛋白;用Ni-NTA親和層析法分離重組蛋白,EMSA鑒定純化重組蛋白是否具有生物活性;重組蛋白干預Raw246.7細胞,提取細胞總蛋白,Western Blot評估重組蛋白能否進入細胞發(fā)揮生物學功能。[結(jié)果]將鼠全長HSF2編碼序列克隆到原核表達載體中,BamHI和xhoI酶切鑒定片段約為1500bp,且pET-28a-mHSF2重組質(zhì)粒測序正確。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BL21大腸桿菌后在IPTG誘導下可表達mHSF2。原核表達重組蛋白能與His抗體及HSF2抗體特異性結(jié)合,鑒定重組蛋白為mHSF2;EMSA檢測mHSF2與HSE結(jié)合情況,鑒定原核表達mHSF2具有生物活性;用重組蛋白干預Raw246.7細胞后發(fā)現(xiàn),mHSF2能進入細胞發(fā)揮功能。[結(jié)論]利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了 pET-28a-mHSF2原核表達載體并表達可溶性mHSF2;原核表達所得到的mHSF2具有生物學功能,并可進入細胞內(nèi),為本課題組后續(xù)研究HSF2奠定實驗基礎。
【圖文】：

圖１邋ｐＥＴ－２８ａ－ｍＨＳＦ２重組質(zhì)粒模式圖逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｐａｔｔｅｒｎ邋ｏｆ邋ｐＥＴ－２８ａ－ｍＨＳＦ２邋ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ邋ｐｌａｓｍｉｄ逡逑２、ｍＨＳＦ２ｃＤＮＡ原序列與優(yōu)化序列比對結(jié)果逡逑將ｐｕｂｍｅｄ上g業(yè)降模恚齲櫻疲蒼蛄杏胗嘔蛄薪行蛄斜榷�，结果可见辶x嫌嘔蛄刑婊渙嗽蛄械模常擔父黽罨�。辶x希玻村義，

本文編號：2641559