【摘要】：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一種遺傳—環(huán)境—代謝應(yīng)激相關(guān)性疾病,它可以進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化甚至肝癌等終末期肝病的疾病。其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明,一般認(rèn)為氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過(guò)氧化損傷是促進(jìn)脂肪變的肝臟發(fā)生炎癥、壞死和纖維化的關(guān)鍵因素。因此,臨床上應(yīng)以氧化應(yīng)激作為靶點(diǎn)來(lái)研究和開(kāi)發(fā)治療NASH的藥物,但今尚無(wú)確切療效的藥物。一些傳統(tǒng)的中藥單體在治療氧化應(yīng)激相關(guān)性疾病方面表現(xiàn)出令人驚異的治療效果。黃芩苷(BA)、苦參堿(MT)、小檗堿均(BE)作為其中的佼佼者,具有抗炎、抗氧化、抗纖維化、調(diào)節(jié)免疫機(jī)能等作用。近年發(fā)現(xiàn)肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)是一種有效的內(nèi)源性抗氧化物,有望被開(kāi)發(fā)成抗氧化應(yīng)激的新靶點(diǎn)。本研究旨在通過(guò)建立動(dòng)物模型觀察黃芩苷、苦參堿、小檗堿治療NASH的療效并研究三種中藥單體對(duì)L-FABP的影響；通過(guò)體外氧化應(yīng)激模型進(jìn)一步探討黃芩苷、苦參堿、小檗堿對(duì)L-FABP作用及其可能分子機(jī)制。研究方法及結(jié)果如下： 1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 建立高脂誘導(dǎo)NASH大鼠模型,給予BA30mg/kg/d, MT36mg/kg/d, BE18mg/kg/d灌胃治療3周,結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)上述三中藥單體治療后能減輕NASH大鼠的體重,但對(duì)肝重?zé)o影響。肝組織病理學(xué)顯示三種中藥單體能緩解肝細(xì)胞脂肪變性,改善炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、灶狀壞死和肝細(xì)胞氣球樣變。血清ALT、AST降低；肝組織SGH、SOD活性升高,MDA減少。Realtime PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BA、MT、BE對(duì)大鼠肝組織中L-FABP mRNA表達(dá)無(wú)影響。Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BA、MT能升高大鼠肝組織L-FABP蛋白水平,而B(niǎo)E對(duì)L-FABP蛋白水平無(wú)影響。 2、體外實(shí)驗(yàn) 建立H2O2誘導(dǎo)活性氧(ROS)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激體外模型,構(gòu)建過(guò)表達(dá)L-FABP質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染至Chang肝細(xì)胞,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)L-FABP后,細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯減少。MTT法篩選出120μ mol/L以下的BA、67.8μ mol以下的MT、78.2μ mol/L以下的BE持續(xù)作用48h內(nèi)為安全有效濃度。流式細(xì)胞技術(shù)和Confocal觀察細(xì)胞內(nèi)ROS含量,證實(shí)50μ mol BA、32μ mol MT、50μ mol BE持續(xù)作用48h后減少ROS含量效果最為明顯。檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH、CAT的活性,發(fā)現(xiàn)50μ mol BA、32μ mol MT、50μ mol BE持續(xù)作用48h后能增加細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的活性,減少LDH的產(chǎn)生,但對(duì)CAT的活性沒(méi)有影響。Realtime-PCR檢測(cè)顯示BA、MT、BE不能影響L-FABP mRNA的表達(dá),但BA、MT能升高L-FABP蛋白的水平,而B(niǎo)E對(duì)體內(nèi)L-FABP蛋白水平無(wú)影響。隨后分別加入蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮(CHX)和蛋白酶體降解抑制劑MG132,結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入CHX繼續(xù)培養(yǎng)后L-FABP蛋白水平降低,而MG132處理后L-FABP蛋白水平增加明顯。 結(jié)論：以上研究結(jié)果顯示黃芩苷、苦參堿、小檗堿對(duì)NASH大鼠有顯著治療作用。黃芩苷、苦參堿可能通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的活性,還可能通過(guò)提高體內(nèi)L-FABP的水平發(fā)揮抗氧化作用。其機(jī)制可能是通過(guò)增加該蛋白的穩(wěn)定性,減少該蛋白的降解來(lái)維持細(xì)胞內(nèi)L-FABP高水平。小檗堿可通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的活性發(fā)揮抗氧化作用,但對(duì)體內(nèi)L-FABP的水平無(wú)影響。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R285.5;R575.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組;;酒精性肝病診療指南[J];中國(guó)肝臟病雜志(電子版);2010年04期

2 段曉燕;范建高;;日本東京2010非酒精性脂肪性肝炎專題報(bào)道[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2011年01期

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本文編號(hào)：2641235