【摘要】：目的:炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一組可能與環(huán)境、遺傳、感染、免疫等多種因素有關(guān)的慢性非特異性腸道炎癥性疾病,目前我國IBD的發(fā)病率較前有明顯升高趨勢,該疾病存在活動期與緩解期交替出現(xiàn)的特點。主要依賴內(nèi)鏡檢查來判斷疾病的活動性,但內(nèi)鏡檢查過程中患者痛苦大,尤其對腸道炎癥較重的患者檢查時存在較大的風(fēng)險,較難在短期內(nèi)反復(fù)檢查,所以一種無創(chuàng)、能夠反復(fù)檢查且相對特異性的評估疾病活動性的指標(biāo)越來越重要。因此多種糞便炎性標(biāo)志物在IBD的活動性方面的研究越來越多,但是哪一種指標(biāo)具有更好的作用并不十分肯定,為篩選更優(yōu)異的指標(biāo),本實驗選取了兩種指標(biāo)進(jìn)行一定的研究。其中糞便鈣衛(wèi)蛋白(Fecal Calprotectin,FC)的研究比較多,作用也比較確切,但是并不能反映所有腸道的炎癥水平,在此基礎(chǔ)上,有人提出了一種比較新的、目前研究較少的糞便標(biāo)志物中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin,NGAL),研究其作為糞便炎癥標(biāo)志物的作用是否更優(yōu)越,以及與FC是否具有一定的相關(guān)性,結(jié)合兩者是否可以提高評價疾病活動性的作用,旨在篩選出可以在內(nèi)鏡檢查前初步評價IBD活動性的指標(biāo),以減少不必要的侵入性檢查。研究方法:按照嚴(yán)格的納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)選取經(jīng)內(nèi)鏡檢查并結(jié)合病理證實的IBD患者54例,包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)患者35例和克羅恩病(Crohn's Disease,CD)患者19例,選擇健康體檢患者,內(nèi)鏡檢查結(jié)果正常的人群納入健康對照組共15例。在結(jié)腸鏡檢查之前,囑患者留取糞便約5g,于-80℃冰箱凍存,采用ELISA方法檢測FC和NGAL的濃度,并收集患者臨床癥狀、內(nèi)鏡結(jié)果以及C反應(yīng)蛋白(C Reactive Protein,CRP)及血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR)等指標(biāo)。首先研究FC及NGAL在疾病活動期、緩解期以及健康對照組糞便中的濃度,其次評價FC及NGAL與臨床評分、內(nèi)鏡評分的相關(guān)性,再者評價其與CRP、ESR之間的相關(guān)性,最后研究其作為評價疾病活動性指標(biāo)的敏感性與特異性以及二者聯(lián)合檢查的敏感性及特異性。結(jié)果:在UC患者中FC濃度活動期、緩解期及正常對照組分別為305.43±50.55pg/ml、254.49±36.40pg/ml及222.74±32.25pg/ml,活動期濃度明顯高于緩解期及正常對照組,緩解期亦高于正常對照組;CD患者FC濃度活動期、緩解期級正常對照組分別為331.94±63.95pg/ml、225.41±19.23pg/ml及222.74±32.25pg/ml,活動期濃度明顯高于緩解期及正常對照組,緩解期與正常對照組無明顯差異。在UC患者中糞便NGAL濃度活動期、緩解期及正常對照組分別8.36±1.37ug/l、7.05±0.96ug/l及5.95±0.48ug/l,活動期糞便NGAL濃度高于緩解期濃度,緩解期糞便NGAL濃度亦高于正常對照組濃度;CD患者糞便NGAL濃度活動期、緩解期及對照組分別為8.86±1.16ug/l、7.40±1.22ug/l及5.95±0.48ug/l,活動期NGAL濃度高于緩解期濃度,緩解期NGAL濃度亦高于正常對照組濃度。UC患者FC的濃度與臨床癥狀評分及內(nèi)鏡評分呈正相關(guān)(r=0.598 P=0.000;r=0.519 P=0.001);CD患者FC的濃度與臨床癥狀評分呈正相關(guān)(r=0.716 P=0.001),與內(nèi)鏡評分的相關(guān)性不顯著。UC及CD患者糞便NGAL濃度與臨床及內(nèi)鏡評分相關(guān)性不顯著(r=0.278P=0.105,r=0.314 P=0.066;r=0.248 P=0.305,r=0.357 P=0.133);且在UC及CD患者中FC與NGAL之間的相關(guān)性也不顯著(r=0.153 P=0.380,r=0.307 P=0.201)。對于UC及CD患者,FC濃度與CRP及ESR在評估疾病活動性方面相關(guān)性不顯著(r=0.277,P=0.108;r=0.315,P=0.074),對于UC及CD患者,NGAL濃度與CRP及ESR在評估疾病活動性方面相關(guān)性亦不顯著(r=0.094,P=0.592;r=0.085,P=0.638)。在判斷UC患者疾病的活動期與緩解期方面FC及NGAL的敏感性、特異性及二者聯(lián)合檢測檢測的敏感性及特異性為(81.80%,87.50%;55.60%,87.50%;40.74%,100%);判斷CD患者疾病的活動期與緩解期FC及NGAL的敏感性、特異性及二者聯(lián)合檢測檢測的敏感性及特異性為(91.70%,85.70%;83.30%,71.40%;75%,85.70%),FC在判斷IBD活動性方面的敏感性及特異性優(yōu)于糞便NGAL,二者聯(lián)合檢測敏感性降低,特異性會提高。結(jié)論:1、FC濃度和NGAL濃度檢測有助于判斷IBD患者的疾病活動性;2、FC濃度與IBD患者的臨床及內(nèi)鏡評分呈正相關(guān),可以作為內(nèi)鏡檢查前初篩疾病活動性的指標(biāo);3、FC在判斷UC和CD疾病活動性的敏感性及特異性方面優(yōu)于糞便NGAL;聯(lián)合FC與NGAL兩種指標(biāo)可降低判斷疾病活動的敏感性,但增強(qiáng)其特異性。
【圖文】：

11、測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。12、計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)，OD 值為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃。（2）NGAL 的 ELISA 的檢測方法1、已提取的糞便上清液用于檢測；2、將樣本進(jìn)行 1：5 倍稀釋；余下步驟同上述 Cal 的 ELISA 檢查方法2.2.6 糞便樣本相關(guān)蛋白濃度的計算：（1）根據(jù)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的鈣衛(wèi)蛋白濃度(pg/m1)和對應(yīng)的 OD 值做曲線，如下圖

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Y=-4.4739+192.9037X r=0.9986…………………………………………(1)將樣本 OD 值帶入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的函數(shù)式中，乘以校正稀釋度(5)后得到樣品中鈣衛(wèi)蛋白的濃度值(pg／ml)。（2）根據(jù)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的 NGAL 濃度(μg/L)和對應(yīng)的 OD 值做曲線，如下圖
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R574

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)[J];胃腸病學(xué);2012年12期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 韓瑋;炎癥性腸病臨床調(diào)查及其與鈣衛(wèi)蛋白、乳鐵蛋白表達(dá)的臨床研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號：2640517