【摘要】：背景資料 急性胰腺炎是一種能夠引起復(fù)雜的全身反應(yīng)的一種急性炎癥，其臨床上總死亡率約10％左右，但重癥病例的死亡率可達(dá)20－30％。大多數(shù)重癥患者死亡原因多為多臟器功能衰竭（MOF），其中包括急性呼吸功能、肝功能和腎功能的衰竭。目前急性胰腺炎的病理機(jī)制尚未完全明了，但許多研究已證實(shí)中性粒細(xì)胞的過(guò)度活化在急性胰腺炎病理?yè)p害加重及并發(fā)多臟器功能衰竭乃至死亡中起了一個(gè)中心樞紐作用，在各種炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子的作用下中性粒細(xì)胞通過(guò)脫顆粒釋放的氧自由基、彈力酶等毒性物質(zhì)是胰腺局部及全身臟器損害的主要介質(zhì)。 目前已知，促炎性細(xì)胞因子如TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、PAF，一些黏附分子如ICAM-1、?整合素和自由基等均參與了胰腺炎局部損害加重及伴發(fā)遠(yuǎn)隔臟器功能衰竭的病理過(guò)程；一些研究試圖通過(guò)應(yīng)用這些細(xì)胞因子的拮抗劑來(lái)治療胰腺炎，但由于參與的細(xì)胞因子種類繁多，但用一種細(xì)胞因子拮抗劑很難取得良好效果。近年來(lái)這些因子被認(rèn)為通過(guò)增加毛細(xì)血管通透性，促使中性粒細(xì)胞向炎癥部位黏附、浸潤(rùn)并最終通過(guò)激活中性粒細(xì)胞來(lái)達(dá)到局部和全身病理?yè)p害的；因此，及時(shí)清除掉已激活的中性粒細(xì)胞在很大程度上能夠改善重癥胰腺炎的預(yù)后。在重癥胰腺炎時(shí)，活化的中 WP=83 性粒細(xì)胞自發(fā)凋亡延遲，這就意味著更多的粒細(xì)胞毒性物質(zhì)被釋放，從而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)持續(xù)不斷擴(kuò)大。 中性粒細(xì)胞是壽命最短的、已分化的終末細(xì)胞，正常情況下自發(fā)走向凋亡。中性粒細(xì)胞的自發(fā)凋亡在急性炎癥消退、防止出現(xiàn)繼發(fā)組織損傷中起重要作用。許多證據(jù)顯示，凋亡是使中性粒細(xì)胞失活的重要途徑；在凋亡過(guò)程中，中性粒細(xì)胞喪失了黏附、吞噬、脫顆粒和釋放炎性介質(zhì)的能力，并很快被巨噬細(xì)胞所吞噬掉；這種胞膜完整狀態(tài)下的粒細(xì)胞清除可避免像粒細(xì)胞壞死時(shí)大量細(xì)胞內(nèi)毒性物質(zhì)的釋放。中性粒細(xì)胞凋亡后被巨噬細(xì)胞吞噬，吞噬細(xì)胞不但不釋放促炎介質(zhì)，反而釋放抑制炎癥反應(yīng)的因子，，如TGF-?,PGE2等。許多報(bào)道證實(shí)燒傷、重癥感染、全身炎癥反應(yīng)綜合征和再灌注損傷的病人均伴有外周血中性粒細(xì)胞凋亡延遲。由于中性粒細(xì)胞可通過(guò)多種途徑損傷機(jī)體，粒細(xì)胞的凋亡延遲就意味著持續(xù)的炎癥反應(yīng)，并進(jìn)一步可導(dǎo)致多臟器功能衰竭。 中性粒細(xì)胞可表達(dá)一系列Bcl-2家族蛋白，但由于人們應(yīng)用不同的檢測(cè)手段，這方面還有很多爭(zhēng)議。目前已公認(rèn)的是中性粒細(xì)胞不表達(dá)Bcl-2蛋白，但常規(guī)表達(dá)促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid和Bad，這些促凋亡蛋白的半衰期相對(duì)較長(zhǎng)，因此它們的持續(xù)表達(dá)可以解釋為什么外周血中PMN生存期如此之短（6－10小時(shí)）；同時(shí)中性粒細(xì)胞也表達(dá)抗凋亡蛋白A1、Bcl-xl、Mcl-1，但抗凋亡蛋白表達(dá)時(shí)間很短暫（半衰期僅2－3小時(shí)）離體培養(yǎng)很快消失，因此，中性粒細(xì)胞凋亡是受半衰期短暫的抗凋亡蛋白A1、Bcl-xl、Mcl-1的調(diào)控。在沒(méi)有新合成抗凋亡白A1、Bcl-xl、Mcl-1的情況下，半衰期長(zhǎng)的促凋亡基因（主要是Bax）的活性占優(yōu)勢(shì)，導(dǎo)致粒細(xì)胞凋亡。然而，當(dāng)生存信號(hào)存在時(shí)（如細(xì)胞因子），抗凋亡蛋白合成增加，粒細(xì)胞出現(xiàn)凋亡延遲。 目前關(guān)于急性胰腺炎時(shí)PMN凋亡方面的研究極少，胰腺炎時(shí)外周血中 WP=84 性粒細(xì)胞凋亡延遲的具體信號(hào)傳導(dǎo)方面更不清楚。盡管有報(bào)道發(fā)現(xiàn)了粒細(xì)胞在細(xì)胞因子如TNF-a、內(nèi)毒素等單因素刺激下凋亡延遲的一些信號(hào)通路，但總的來(lái)說(shuō)粒細(xì)胞凋亡延遲的具體通路還遠(yuǎn)未揭示。不同的細(xì)胞因子或刺激因素可通過(guò)不同激活不同的蛋白激酶、轉(zhuǎn)錄因子來(lái)發(fā)揮其促凋亡或抗凋亡的效應(yīng)。由于重癥胰腺炎時(shí)外周血中大量的細(xì)胞因子、活性氧、一氧化氮、炎性介質(zhì)、各種蛋白酶等均被激活，單因素刺激下粒細(xì)胞凋亡延遲的信號(hào)途徑并不能解釋胰腺炎時(shí)粒細(xì)胞凋亡延遲的具體通路。近年來(lái)，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控的蛋白激酶（ERK）和細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB被認(rèn)為是細(xì)胞生存的兩大重要傳導(dǎo)通路，而它們?cè)谝认傺琢＜?xì)胞凋亡中的作用還未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)建立重癥胰腺炎動(dòng)物模型，在體外培養(yǎng)的中性粒細(xì)胞中用ERK、NF－kB特異性阻滯劑來(lái)探討ERK、NF－kB的激活在SAP時(shí)外周血中性粒細(xì)胞凋亡延遲中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法 1、動(dòng)物模型的建立：重癥胰腺炎模型采用用微量泵向大鼠膽胰管內(nèi)逆行注射3％的牛黃膽酸鈉0.3ml來(lái)建立，假手術(shù)組僅作小切口開(kāi)腹再縫合，PDTC組在建立胰腺炎模型前30分鐘大鼠皮下注射PDTC（50mg/kg 體重）的生理鹽水8ml，重癥胰腺炎組、假手術(shù)組僅注射等量生理鹽水，6小時(shí)后重復(fù)注射鹽水或PDTC。 2、大鼠外周血中性粒細(xì)胞的分離 Wister大鼠乙醚麻醉后經(jīng)下腔靜脈取抗凝血8-10ml,加入20ml無(wú)菌試管中，加入葡聚糖T-500,室溫下沉淀紅細(xì)胞45分鐘，取上層富含粒細(xì)胞的血漿，小心疊加于離心管中不連續(xù)密度梯度的percoll上面(含2ml65％的percoll疊加在2ml76％的percoll上)，保持各界面清晰，1500轉(zhuǎn)20分鐘，取中性粒細(xì)胞層，殘余紅細(xì)胞裂解后可得到純度和活性大于95％的中性粒細(xì)胞。 WP=85 3、血漿的制備 SAP大鼠、假手術(shù)大鼠、PDTC治療組的大鼠取抗凝血，1000轉(zhuǎn)離心15分鐘，可得到各組血漿，血漿直接加入培養(yǎng)液中，體積比是1：4。 4、大鼠中性粒細(xì)胞體外培養(yǎng) 無(wú)菌的外周血中性粒細(xì)胞懸浮于RPMI1640培養(yǎng)液中(10％的
【圖文】：

圖.叭，口
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R576

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本文編號(hào)：2635872