【摘要】：背景急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是臨床診療中常見危重性疾病,近年來AP的診治研究取得了重大進步,但其發(fā)病率和死亡率仍然居高不下~([1])。研究表明,自噬參與急性胰腺炎的發(fā)病及進展,參與胰蛋白酶原活化和炎癥反應(yīng)過程~([13]),基礎(chǔ)水平的自噬維持胰腺腺泡細胞的穩(wěn)定,調(diào)節(jié)自噬通路在一定程度上可減輕AP嚴重程度。消退素D1是一種來源于ω-3多不飽和脂肪酸的內(nèi)源性抗炎脂質(zhì)體,多種炎癥性疾病證實其在限制炎癥方面具有獨特優(yōu)勢。實驗性AP模型中,消退素D1在降低IL-1β,TNF-α,IL-6等炎性反應(yīng)介質(zhì)水平的同時,顯著改善AP小鼠炎性損傷。Prieto等研究表明,消退素D1激活巨噬細胞自噬,促進自噬體溶酶體融合和巨噬細胞自噬流進行,改善巨噬細胞功能,促進炎癥反應(yīng)消退。目的本研究通過分析消退素D1對AP小鼠自噬的影響,探討消退素D1保護AP的作用機制。方法選用30只雄性C57BL/6小鼠,18-22g,完全隨機分為3組,分別為正常對照組、AP模型組和消退素D1組。AP模型組腹腔注射雨蛙肽(50ug/kg/h)建立AP模型,共7次;消退素D1組為在造模前1小時與造模的第4小時向小鼠腹腔內(nèi)注射消退素D1(50ug/kg)各1次;同時間內(nèi)向正常對照組小鼠腹腔內(nèi)注射相等體積生理鹽水。末次腹腔內(nèi)注射結(jié)束后的1小時分批處死小鼠,眼球取血并離心后測定血清淀粉酶及脂肪酶活性;測量并計算小鼠胰腺及肺濕重與體重的比值;解剖后獲取胰腺、肺,分別行胰腺電鏡及病理學(xué)、肺病理學(xué)檢查,檢測胰腺及肺組織IL-1?、IL-8、TNF-ɑ、IL-6水平及髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性,檢測胰腺自噬相關(guān)標志物相對表達水平。結(jié)果成功制備AP小鼠模型,與正常對照組比較,AP模型組小鼠血淀粉酶及脂肪酶水平、胰腺及肺濕重和體重的比值、胰腺及肺的組織病理損傷評分、胰腺及肺組織IL-1?、IL-8、TNF-ɑ、IL-6水平及MPO活性明顯升高(P均0.05)。與AP模型組比較,消退素D1組小鼠血淀粉酶及脂肪酶水平、胰腺及肺濕重和體重的比值、胰腺及肺的組織病理損傷評分、胰腺及肺組織IL-1?、IL-8、TNF-ɑ、IL-6水平及MPO活性不同程度降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。透視電鏡顯示,與正常對照組相比較,AP模型組小鼠胰腺組織自噬泡體積增大,數(shù)量顯著增多(P均0.05)。與AP模型組比較,消退素D1組小鼠胰腺組織自噬體數(shù)量較AP模型組減少,并且體積變小,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。RT-qPCR和Western Blot結(jié)果顯示,與正常對照組相比較,AP模型組胰腺組織自噬相關(guān)標志物Beclin-1、p62及LC3-ⅡmRNA和蛋白的相對表達水平升高(P均0.05)。與AP模型組比較,消退素D1組胰腺組織的自噬相關(guān)標志物Beclin-1、p62及LC3-ⅡmRNA和蛋白的相對表達水平降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論消退素D1明顯減輕AP小鼠胰腺炎性損傷,可能與修復(fù)AP小鼠胰腺組織中自噬通路,減少自噬受損,降低炎性介質(zhì)水平有關(guān)。背景急性胰腺炎是一種由腺泡細胞損傷起始的胰腺外分泌腺的炎癥反應(yīng),嚴重可導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征及多器官功能衰竭。胰腺炎癥反應(yīng)在急性胰腺炎發(fā)病機制中起著重要作用。急性胰腺炎模型中,胰腺、肺、血中炎性介質(zhì)如IL-1β、IL-6、MPO水平明顯升高。研究發(fā)現(xiàn),NLRP3炎癥小體激發(fā)和調(diào)節(jié)急性胰腺炎炎癥反應(yīng),調(diào)控急性胰腺炎炎癥介質(zhì)的合成釋放。消退素D1是來源于ω-3多不飽和脂肪酸的內(nèi)源性抗炎脂質(zhì)分子。消退素D1被證實能夠改善急性胰腺炎模型炎性損傷,降低炎性介質(zhì)的合成釋放,消退素D1發(fā)揮保護急性胰腺炎作用的機制的尚不明確。研究發(fā)現(xiàn),ω-3脂肪酸通過抑制NLRP3炎癥小體激活來預(yù)防炎癥。消退素D1可以調(diào)控NLRP3炎癥小體活化抑制炎性反應(yīng)介質(zhì)合成,減輕同型半胱氨酸引起的腎小球損傷。目的本研究通過觀察消退素D1對小鼠急性胰腺炎模型NLRP3炎癥體通路的影響,探討消退素D1保護急性胰腺炎的可能機制。方法將C57BL/6小鼠隨機均分至常對照組、AP模型組、消退素D1組。建立急性胰腺炎模型(腹腔注射雨蛙肽(50ug/kg/h),共7次),消退素D1組于造模前1h、造模后4h小鼠腹腔內(nèi)注射消退素D1各1次(50ug/kg)。正常對照組腹腔方式等時等體積注射生理鹽水。實驗結(jié)束后評估消退素D1對急性胰腺炎小鼠炎性損傷的影響。采用EMSA方法檢測小鼠胰腺組織NF-κB DNA結(jié)合活性。RT-q PCR、Western Blot方法檢測小鼠胰腺組織NLRP3炎癥小體組分NLRP3、ASC及caspase-1及效應(yīng)分子IL-1β及IL-1β前體(pro-IL-1β)相對表達量。結(jié)果與正常對照組比較,AP模型組小鼠血清淀粉酶及脂肪酶水平,胰腺及肺濕重與體重比值,胰腺及肺組織病理損傷評分、炎性介質(zhì)水平及MPO活性升高(P均0.05),成功建立急性胰腺炎成功。與AP模型組比較,消退素D1組小鼠血清淀粉酶及脂肪酶水平,胰腺及肺濕重與體重比值,胰腺及肺組織病理損傷評分、炎性介質(zhì)水平及MPO活性降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),消退素D1減輕小鼠炎性損傷。EMSA結(jié)果顯示,與正常對照組比較,AP模型組小鼠胰腺NF-κB DNA結(jié)合活性上升(P0.05),急性胰腺炎胰腺組織存在NF-κB核轉(zhuǎn)錄。與AP模型組比較,消退素D1組小鼠胰腺NF-κB DNA結(jié)合活性下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示消退素D1抑制急性胰腺炎胰腺組織NF-κB活性。RT-q PCR和Western Blot結(jié)果顯示,與正常對照組比較,AP模型組小鼠胰腺組織NLRP3炎癥小體的組分NLRP3、ASC及caspase-1和效應(yīng)分子IL-1β及pro-IL-1β的相對表達量升高(P均0.01),提示急性胰腺炎組織存在NLRP3炎癥體的激活。與AP模型組比較,消退素D1組NLRP3炎癥小體的組分NLRP3、ASC、caspase-1及效應(yīng)分子IL-1β及pro-IL-1β相對表達量降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),提示消退素D1抑制急性胰腺炎胰腺組織NLRP3炎癥體的激活。結(jié)論NLRP3炎癥體通路在小鼠急性胰腺炎模型激活,消退素D1保護急性胰腺炎的機制可能與抑制NLRP3炎癥小體通路表達有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R576

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 趙孝文;胡翠;鮑峻峻;劉曉昌;丁浩;梅俏;許建明;;消退素D1對急性胰腺炎小鼠的保護作用及其機制[J];中華消化雜志;2016年06期

2 Zilvinas Dambrauskas;Nathalia Giese;Antanas Gulbinas;Thomas Giese;Pascal O Berberat;Juozas Pundzius;Giedrius Barauskas;Helmut Friess;;Different profiles of cytokine expression during mild and severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2010年15期

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本文編號：2631173