發(fā)布時(shí)間：2020-04-17 05:22

【摘要】：目的幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)所致感染是引起慢性胃炎、胃潰瘍和胃癌等多種胃疾病的主要原因。目前,臨床上對(duì)感染Hp出現(xiàn)癥狀的患者,主要通過三聯(lián)療法根除治療。然而,近年來隨著抗生素耐藥狀況日益嚴(yán)重以及質(zhì)子泵抑制劑帶來的副作用,傳統(tǒng)的根除療法已不能達(dá)到有效根除Hp的目的。因此,明確Hp致病機(jī)制,尋找有效的治療方法,是目前臨床上面臨的重要問題。本課題以建立Hp感染所致小鼠胃炎為動(dòng)物模型,用不同劑量褪黑素干預(yù),研究褪黑素對(duì)Hp致胃炎過程中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,以期為深化對(duì)Hp感染后引起的免疫應(yīng)答機(jī)制及對(duì)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)制的認(rèn)識(shí)提供一定的理論依據(jù),為潛在的臨床應(yīng)用提供新的思路。方法本研究建立Hp感染小鼠胃疾病模型,用Hp連續(xù)灌胃后間隔兩周,以不同濃度褪黑素干預(yù),設(shè)褪黑素拮抗劑干預(yù)組,分別于褪黑素用藥后2周、4周、6周取材:1.運(yùn)用石蠟切片HE染色方法檢測小鼠胃黏膜組織病理變化。2.免疫組織化學(xué)方法檢測小鼠胃TLR2、TLR4和脾Foxp3表達(dá)量變化。3.流式液相多重蛋白定量技術(shù)(CBA)檢測各組小鼠血清免疫炎癥因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-γ、TNF-α等含量的變化。4.Western Blot方法檢測小鼠胃TLR2、MyD88、p65、p50、p-ERK、p-p38蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果1.HE染色結(jié)果顯示,在小鼠胃黏膜及黏膜下層,有明顯散在分布的炎癥細(xì)胞,且以中性粒細(xì)胞居多,表明Hp感染致小鼠胃炎模型構(gòu)建成功。2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,小鼠胃黏膜層TLR2表達(dá)在Hp感染后明顯上調(diào),褪黑素干預(yù)后明顯下調(diào),褪黑素拮抗劑組明顯上升;TLR4表達(dá)在各組間無明顯變化;脾中Foxp3表達(dá)在Hp感染后上調(diào),褪黑素干預(yù)后表達(dá)下調(diào),拮抗劑組較未加拮抗劑組無明顯變化。3.CBA檢測結(jié)果顯示,小鼠血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-γ、TNF-α等各細(xì)胞因子在褪黑素干預(yù)2、6周后,較僅Hp感染組顯著下調(diào),拮抗劑組各細(xì)胞因子大量增多,褪黑素干預(yù)4周后各組間變化不明顯。4.Western Blot檢測結(jié)果顯示,小鼠胃TLR2、MyD88、p-ERK、p-p38在褪黑素干預(yù)2周后較僅Hp感染組明顯下調(diào),褪黑素干預(yù)4、6周后表達(dá)無明顯變化;p65、p50在褪黑素干預(yù)2周后表達(dá)略微下調(diào),而4、6周后變化不明顯。結(jié)論褪黑素調(diào)節(jié)Hp感染所致小鼠胃炎的機(jī)制可能包括褪黑素下調(diào)胃黏膜TLR2表達(dá)、抑制血漿各炎癥細(xì)胞因子表達(dá)、調(diào)節(jié)脾中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表達(dá)等。
【圖文】：

A B圖 1 H.pylori 感染小鼠胃組織 HE 染色，圖 A、B 放大倍數(shù)分別為×200，×400Fig 1 The stomach tissue of H.pylori-infected mouse HE staining. The magnification of figure A、B is ×200、×400疫組織化學(xué)檢測褪黑素對(duì) Hp 感染小鼠胃組織 TLR2、TLR Foxp3 表達(dá)影響 小鼠胃組織 TLR2、TLR4 表達(dá)為研究褪黑素及其拮抗劑 Luzindole 在 H.pylori 感染致胃炎天然免疫反應(yīng)中 樣受體(TLRs)的作用，運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測小鼠胃組織 TLR2 和4 的表達(dá)情況。結(jié)果如圖 2-9 所示，在 Hp 感染 2、4 周時(shí)，胃黏膜上皮 TLR明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而 6 周時(shí)空白對(duì)照組(Hp 感染未褪黑素，即 0 組)較正常對(duì)照組（無 Hp 感染，即 N 組）變化不明顯；褪黑素

TLR2 明顯回調(diào)，達(dá)到空白對(duì)照組水平，同時(shí)在拮抗劑加 50mg/kg 褪黑素(即 50L組)時(shí)較空白對(duì)照組及 L 組明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在褪黑素干預(yù) 6 周時(shí)，TLR2 表達(dá)略微上調(diào)，較空白對(duì)照組變化不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在 2 周時(shí)，胃黏膜 TLR4 表達(dá)，，無論在空白對(duì)照組還是感染 Hp 加褪黑素以及拮抗劑組干預(yù)后表達(dá)均無明顯變化；在 4 周時(shí)，空白對(duì)照組與正常對(duì)照組比表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），褪黑素 25mg/kg、50mg/kg 干預(yù)后，TLR4表達(dá)下調(diào)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；6 周時(shí)，空白對(duì)照組 TLR4 表達(dá)略有下調(diào)，與正常對(duì)照組比差異不明顯，而褪黑素干預(yù) 50mg/kg 組 TLR4 表達(dá)較正常對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R573.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李芳芳;馮義朝;;幽門螺桿菌感染的流行病學(xué)特點(diǎn)及其相關(guān)胃腸疾病的研究進(jìn)展[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2015年11期

2 劉卉;林晉;魏建恩;鄭琳;周瑞祥;;松果體及褪黑素對(duì)大鼠胸腺巨噬細(xì)胞酪氨酸激酶受體B表達(dá)的影響[J];解剖學(xué)雜志;2009年06期

3 周瑞祥,劉卉,魏建恩,黃云梅,謝美容,林建銀;松果體及褪黑素對(duì)大鼠胸腺CD4~+/CD8~+T細(xì)胞分化發(fā)育的影響[J];解剖學(xué)雜志;2005年02期

本文編號(hào)：2630499