本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一種由多種病因?qū)е碌募毙匝装Y反應(yīng),起病急驟,臨床表現(xiàn)多樣,輕度患者治療后短期內(nèi)即可恢復(fù),預(yù)后良好,而重度AP病情進(jìn)展迅速,可誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS),病死率高達(dá)30%~50%。目前關(guān)于AP的發(fā)病機(jī)制還未完全闡明,近年來隨著研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡在AP的發(fā)生發(fā)展中具有不可忽視的作用。AP中胰腺腺泡細(xì)胞損傷主要表現(xiàn)為凋亡和壞死。細(xì)胞壞死時各種消化酶和炎癥介質(zhì)隨著細(xì)胞膜的破壞而釋放,從而導(dǎo)致劇烈的炎癥反應(yīng);而凋亡是程序性細(xì)胞死亡,由于細(xì)胞膜保持完整,從而減少炎癥介質(zhì)的釋放,避免炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重。半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase)家族是調(diào)控細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子,其中Caspase-3是凋亡執(zhí)行因子之一。目前已證實(shí),上調(diào)Caspase-3表達(dá)可通過促進(jìn)腺泡細(xì)胞凋亡而起到保護(hù)性作用。Hedgehog(Hh)信號通路在多種動物的胚胎發(fā)育、組織再生、干細(xì)胞增殖等過程中具有重要作用。研究表明,Hh信號通路不僅與胚胎發(fā)育有關(guān),而且與炎癥反應(yīng)及多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。已有研究者發(fā)現(xiàn)在AP病程中,Hh信號通路具有減輕炎癥反應(yīng)、保護(hù)胰腺組織的作用,但是其具體機(jī)制尚未明確,特別是Hh信號通路是否可以通過調(diào)控胰腺腺泡細(xì)胞凋亡影響AP的病程進(jìn)展,目前未見報(bào)道。目的:本實(shí)驗(yàn)采用L-精氨酸腹腔注射建立AP大鼠模型,并予Hh信號通路特異性激動劑Purmorphamine進(jìn)行干預(yù),探究Hh信號通路在AP中對胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響。方法:清潔級成年健康雄性SD大鼠54只,體重220±20 g,隨機(jī)分為正常對照組(N組)、急性胰腺炎組(AP組)、Purmorphamine干預(yù)組(Pur組),每組各18只。各組依據(jù)造模時間分為6h、12h、24h三個亞組,每個亞組6只大鼠。本實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射20%L-精氨酸的方法建立AP模型,劑量為2.5 g/kg×2次,間隔1h。其中Pur組于造模前1h給予Purmorphamine溶液0.69 mg/kg腹腔注射1次。在最后一次腹腔注射后6h、12h、24h,分別處死各組大鼠,觀察胰腺及胰周組織情況,留取胰腺組織標(biāo)本,通過蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察胰腺組織病理學(xué)改變,采用蛋白印跡(western blot)法檢測胰腺組織Caspase-3表達(dá)水平,實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法檢測Hh信號通路下游目的基因Ptch1表達(dá)水平,末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶d UTP缺口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)法檢測胰腺腺泡細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果:1胰腺肉眼觀察:N組胰腺顏色均勻,周圍組織未見明顯異常,腹腔內(nèi)僅有極少量清亮液體;AP組可見胰腺充血水腫、胃腸道積氣及血性腹水;Pur組大鼠在各時間點(diǎn)與AP組相比,胰腺充血水腫減輕,胃腸道積氣及腹水量較前明顯減少。鏡下觀察:N組胰腺組織在各時間點(diǎn)均未發(fā)現(xiàn)明顯異常;AP組胰腺組織可見小葉和腺泡間水腫、炎癥細(xì)胞浸潤及腺泡細(xì)胞壞死,并且隨著時間的推移逐漸加重;Pur組標(biāo)本在各時間點(diǎn)與A組相比水腫明顯減輕,炎癥細(xì)胞浸潤及壞死明顯減少。2胰腺腺泡細(xì)胞凋亡水平:N組胰腺組織僅有少量陽性細(xì)胞零星分布;AP組各時間點(diǎn)陽性細(xì)胞較N組明顯增加、凋亡指數(shù)升高(P0.05),并且隨著造模時間延長而逐漸降低;與AP組相比,Pur組胰腺組織凋亡指數(shù)進(jìn)一步升高(P0.05),變化趨勢與AP組相同。3胰腺組織Caspase-3表達(dá):N組可見Caspase-3少量表達(dá);與之相比,AP組Caspase-3表達(dá)增加(P0.05),但隨時間推移逐漸下降;經(jīng)Purmorphamine預(yù)處理后,Pur組Caspase-3表達(dá)水平較AP組明顯提高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4胰腺組織Ptch1 m RNA表達(dá):N組Ptch1未見明顯表達(dá);而AP組與N組相比,各時間點(diǎn)Ptch1表達(dá)水平均明顯升高(P0.05),且隨時間呈上升趨勢;Pur組由于Purmorphamine的作用,Ptch1表達(dá)水平較AP組進(jìn)一步升高(P0.05)。5相關(guān)性分析:胰腺組織凋亡指數(shù)與Caspase-3表達(dá)水平之間呈正相關(guān)(rs=0.911,P0.01)。胰腺組織Ptch1表達(dá)水平與凋亡指數(shù)、Caspase-3之間分別存在正相關(guān)(rs=0.713,P0.01;rs=0.648,P0.01)。結(jié)論:1正常對照組大鼠胰腺組織僅有少量凋亡細(xì)胞分布,而在AP組早期,凋亡細(xì)胞明顯增加、凋亡指數(shù)升高,之后隨著造模時間延長而逐漸下降,同時胰腺病理損傷逐漸加重,說明腺泡細(xì)胞凋亡可能在一定程度上抑制AP病情進(jìn)展。2 Caspase-3作為凋亡執(zhí)行因子之一,在AP組各時間點(diǎn)的表達(dá)均明顯增加,并且隨時間推移逐漸下降,其表達(dá)水平與細(xì)胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)。3作為Hh信號通路的重要組成部分和主要目的基因之一,Ptch1在AP組大鼠胰腺組織中的表達(dá)較正常對照組明顯增加;應(yīng)用Hh信號通路特異性激動劑Purmorphamine后,Ptch1的表達(dá)較AP組明顯增加,表明Hh信號通路在AP大鼠胰腺組織中被進(jìn)一步激活,參與AP的發(fā)生發(fā)展。4 Pur組胰腺病理損傷較AP組明顯減輕,同時腺泡細(xì)胞凋亡指數(shù)和Caspase-3表達(dá)水平均明顯升高;Ptch1與凋亡指數(shù)、Caspase-3之間分別存在正相關(guān),提示在AP大鼠胰腺組織中Hh信號通路激活后可能通過上調(diào)Caspase-3,而促進(jìn)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡,最終減輕胰腺損傷。
【關(guān)鍵詞】：急性胰腺炎 凋亡 Hedgehog信號通路 Purmorphamine 半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3 Ptch1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R576
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-35
• 附表35-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 綜述 急性胰腺炎細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究進(jìn)展44-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 尚宏清,李非,張?jiān)倥d,孫家邦;分次大劑量L-精氨酸腹腔內(nèi)注射致大鼠急性壞死性胰腺炎模型的研究[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年04期

2 Luo-Wei Wang;Han Lin;Yi Lu;Wei Xia;Jun Gao;Zhao-Shen Li;;Sonic hedgehog expression in a rat model of chronic pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年16期

  本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：262955