【摘要】： 目的 病理診斷是目前NAFLD診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但NAFLD的組織病理學(xué)特點(diǎn)仍需明確，，NAFLD病理組織學(xué)評(píng)估系統(tǒng)尚待完善。由于肝活檢病理屬創(chuàng)傷性檢查，篩選NAFLD無(wú)創(chuàng)性診斷和／或預(yù)測(cè)檢測(cè)指標(biāo)，是臨床NAFLD診治的迫切需要。NAFLD尤其是NASH的發(fā)病機(jī)制至今未明，有鑒于此，有效的NASH治療方法亟待研究。本研究中我們系統(tǒng)分析總結(jié)了NAFLD的組織學(xué)特點(diǎn)、探討其組織學(xué)評(píng)估方法、篩選NAFLD的無(wú)創(chuàng)性診斷指標(biāo)、建立NAFLD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究NASH的發(fā)病機(jī)制、并對(duì)NASH進(jìn)行藥物性干預(yù)研究。 方法 基于NASH-CRN 2005年推薦的NAFLD組織學(xué)評(píng)分方案，我們對(duì)確診的130例NAFLD患者的肝穿組織進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，總結(jié)分析NAFLD的病理改變。收集與肝穿活檢相配套的NAFLD患者血清，進(jìn)行血清生化檢測(cè)，結(jié)合組織病理學(xué)結(jié)果總結(jié)分析，篩選與病理改變相關(guān)性NAFLD無(wú)創(chuàng)性診斷指標(biāo)。建立高脂誘導(dǎo)性符合代謝綜合征范疇的NASH大鼠模型，常規(guī)病理、組織化學(xué)染色、免疫組織化學(xué)染色、分子原位雜交染色等組織原位檢測(cè)與血清ELISA和生物化學(xué)檢測(cè)相結(jié)合，研究脂肪源性激素(瘦素、脂聯(lián)素)、COX、AT-Ⅱ、TNF-α、TGF-β1等細(xì)胞因子或炎性因子在NASH發(fā)病過(guò)程中的作用。與維生素E相對(duì)照，驗(yàn)證殼聚糖治療NASH的治療效果及可能的干預(yù)途徑。 結(jié)果 1．NAFLD病理改變中脂肪變性、肝細(xì)胞氣球樣變、小葉內(nèi)炎癥和纖維化發(fā)生普遍，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，脂肪變性與小葉內(nèi)炎癥、纖維化及肝細(xì)胞氣球樣變程度間呈正相關(guān)關(guān)系(r分別=0.587，0.374，0.488，P均＜0.01)。微肉芽腫、脂性肉芽腫和凋亡小體隨脂肪變性、小葉內(nèi)炎癥、纖維化程度的加重，出現(xiàn)頻率呈增加之趨勢(shì)。巨大線粒體和糖原核則隨氣球樣變程度的加重發(fā)生率明顯增高。 2．NAFLD患者血清主要異常指標(biāo)包括，超重或肥胖(按照WHO推薦的BMI標(biāo)準(zhǔn))，轉(zhuǎn)氨酶升高，甘油三酯水平升高，GGT升高和ALP升高，此外，14.6％的NAFLD患者出現(xiàn)血清磷升高。年齡、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和CK-MB、高血壓、ALP和LDH等指標(biāo)與NAFLD的主要組織學(xué)病理改變存在不同程度的相關(guān)性。甘油三酯、空腹血糖與主要病理組織學(xué)改變之間并無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。Logistic回歸分析結(jié)果，僅BMI和AST在回歸方程中有顯著性差異(P分別＜0.01，＜0.05)，回歸方程為NASH=0.365BMI+0.012AST-9.289。 3．造模4w大鼠肝臟即出現(xiàn)典型的NASH改變，肝臟體重指數(shù)增加、大小泡混合性肝細(xì)胞脂肪變性、氣球樣變、小葉內(nèi)炎癥和肝竇壁細(xì)胞增生，至造模12w時(shí)，肝纖維化已比較明顯。模型組大鼠血清TC、LDL水平明顯增高，而HDL則有所降低，血清ALT、ALP和GGT升高，白蛋白／球蛋白比值降低，血清胰島素、瘦素和TNF-α水平明顯升高，其中瘦素與TNF-α和胰島素的水平呈平行關(guān)系，且隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)和纖維化程度的加重而增高。而脂聯(lián)素則相反，隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)血清脂聯(lián)素水平呈逐漸降低趨勢(shì)。模型組及NASH患者肝組織中OB-Rb的蛋白及mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)。ATR-1蛋白和mRNA表達(dá)均明顯升高。正常肝組織僅少量表達(dá)的COX-1和難以檢測(cè)到的COX-2，在NASH患者穿刺肝組織以及NASH模型大鼠肝組織內(nèi)蛋白和mRNA均表達(dá)升高，并隨病變程度的加重而增強(qiáng)。 4．殼聚糖治療后，NASH脂肪變性增大的肝臟減小，肝細(xì)胞脂肪變性、氣球樣變、小葉內(nèi)炎癥以及竇周、中央靜脈周和匯管區(qū)纖維化等NASH病變均有不同程度的改善。血清白蛋白／球蛋白比值恢復(fù)正常。血清TC、LDL水平降低，高胰島素血癥也得到了明顯改善。在降低瘦素、胰島素和提高脂聯(lián)素水平方面優(yōu)于與維生素E。 結(jié)論 1．基于國(guó)際上最新的NASH-CRN方案，基本明確了NAFLD的肝臟病理組織學(xué)特點(diǎn)。在NAFLD的病理組織學(xué)評(píng)估中，除脂肪變性、肝細(xì)胞氣球樣變、小葉內(nèi)炎癥和纖維化外，匯管區(qū)炎癥也應(yīng)予以重視。微肉芽腫、脂性肉芽腫和凋亡小體可作為NAFLD病情進(jìn)展的組織學(xué)指標(biāo)。 2．篩選出了與NAFLD主要病理改變密切相關(guān)的無(wú)創(chuàng)性指標(biāo)主要包括年齡、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和CK-MB、高血壓、ALP和LDH等。初步建立了NASH臨床無(wú)創(chuàng)性診斷方程，為NASH的無(wú)創(chuàng)性診斷提供了潛在應(yīng)用模型。 3．建立了在肝臟病理、血脂及血生化變化、胰島素抵抗等NASH關(guān)鍵性指標(biāo)與NASH患者高度比擬的NASH大鼠試驗(yàn)?zāi)Ｐ停闹驹葱约に�、其他�?xì)胞因子等角度探索了NASH發(fā)生及進(jìn)展機(jī)制。NASH實(shí)驗(yàn)大鼠全身和肝臟內(nèi)可能均出現(xiàn)瘦素抵抗，瘦素在NASH肝組織內(nèi)炎癥和纖維化的發(fā)生過(guò)程中具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素可能具有拮抗TNF-α、減輕瘦素抵抗和胰島素抵抗等作用。AT-Ⅱ可能直接作用于肝臟ATR-1，促進(jìn)NASH肝脂肪變性和肝纖維化的發(fā)生。COX-1和COX-2，在NASH的發(fā)生過(guò)程中可能具有重要意義。 4．在制備NASH模型基礎(chǔ)上驗(yàn)證了殼聚糖可減少NASH肝組織內(nèi)炎癥、氣球樣變、脂肪變性和抗纖維化等治療作用，其對(duì)NASH的治療療效優(yōu)于維生素E。初步發(fā)現(xiàn)殼聚糖對(duì)NASH的治療作用除了通過(guò)減少腸道膽固醇的吸收、促進(jìn)脂類的排泌外，還可能通過(guò)影響脂肪源性激素或細(xì)胞因子的分泌產(chǎn)生而起作用。
【圖文】：

軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文 (p<0.05)。在發(fā)生肝細(xì)胞氣球樣變病理改變的病例中，巨大線粒體和糖原核隨氣球樣變程度的加重發(fā)生率明顯增高(尸均<0.01)，而Mallory小體(圖4)與肝細(xì)胞氣球樣變間，雖然Mallory小體隨肝細(xì)胞氣球樣變發(fā)生程度的增加而發(fā)生比例有所增高，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。圖4氣球樣變肝細(xì)胞中mallory小體形成，肝細(xì)胞周及竇周纖維化。(HE， X400)3討論NAFLD現(xiàn)已成為威脅人類健康的世界性肝病難題，是歐、美等國(guó)最常見的慢性肝臟疾病，我國(guó)的NAFLD病例也有逐年增加之趨勢(shì)(5，6

正常大鼠肝臟
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R575.5

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 曹玉珍;張秀英;;高脂飼料誘發(fā)C57BL/6J小鼠非酒精性脂肪肝相關(guān)指標(biāo)的動(dòng)態(tài)觀察[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年03期

本文編號(hào)：2624397