【摘要】： 核因子相關(guān)因子-2(Nrf2)與機(jī)體的防御系統(tǒng)密切相關(guān),是細(xì)胞防御氧化應(yīng)激的重要調(diào)節(jié)因子,通過(guò)介導(dǎo)一系列抗氧化酶和2相解毒酶的表達(dá),可以保護(hù)多種組織免受有害物質(zhì)的攻擊。研究表明Nrf2在肝臟的功能穩(wěn)定中起著重要的作用,可以降低藥物介導(dǎo)的肝臟毒性、減輕肝臟炎癥和肝纖維化、抑制化學(xué)致癌作用、并與肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。深入研究可為治療疾病帶來(lái)新的途徑,故在本實(shí)驗(yàn)中,觀察Nrf2在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)形成不同階段表達(dá)的變化情況,為NAFLD的預(yù)防和治療提供新的思路。 目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)喂養(yǎng)昆明小鼠高脂高膽固醇的方法建立NAFLD小鼠模型,研究在脂肪肝和脂肪性肝炎兩個(gè)階段,Nrf2的表達(dá)及血漿8-異前列腺素F2a的變化情況,探討Nrf2在氧化應(yīng)激所致炎癥損傷中的作用,為進(jìn)一步闡明NAFLD的發(fā)病機(jī)制及治療提供新的線索。 方法健康成年昆明雌性小鼠26只,正常飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周后,隨機(jī)分成2組：正常飲食組(對(duì)照組)10只,普通飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組(實(shí)驗(yàn)組)16只,高脂飼料喂養(yǎng)。兩組均自由飲水和進(jìn)食分籠喂養(yǎng)于20-25℃明暗各12小時(shí)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi),分別于8周末,12周末隨機(jī)抓取5只對(duì)照組小鼠和8只實(shí)驗(yàn)組小鼠,處死前隔夜禁食,次日稱(chēng)重后以10％的水合氯醛(3-5ml/kg)腹腔注射麻醉,心臟穿刺取血,迅速摘取肝臟稱(chēng)肝濕重,后用10％的甲醛固定,制作石蠟切片,常規(guī)HE染色,觀察肝臟組織的病理學(xué)變化,心臟血離心后取血清,應(yīng)用7170-AHITAC全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素、血糖、甘油三酯、膽固醇；運(yùn)用免疫酶聯(lián)法檢測(cè)血漿中8-異前列腺素F2a的含量,用免疫組化法檢測(cè)Nrf2的表達(dá)。 結(jié)果 1.對(duì)照組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰,肝小葉結(jié)構(gòu)正常,中央靜脈大而壁薄,肝細(xì)胞排列成肝索,在中央靜脈周?chē)史派錉罘植?細(xì)胞呈多邊形。8周模型組小鼠肝細(xì)胞中度細(xì)胞水腫,多數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡(脂肪變性),以小葉中央?yún)^(qū)受累明顯,伴有肝細(xì)胞水樣變性。12周模型組小鼠出現(xiàn)彌漫性脂肪變性,呈現(xiàn)中至重度脂肪變性,小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),浸潤(rùn)細(xì)胞以單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主,并有一些中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)以及散在的點(diǎn)狀壞死,匯管區(qū)炎癥相對(duì)較輕但未見(jiàn)明顯的纖維化改變。 2.與對(duì)照組比較,8周模型組和12周模型組肝濕重量、肝指數(shù)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血糖、膽固醇均有顯著升高(p0.01),總膽紅素、甘油三酯水平差異不顯著。 3.對(duì)照組小鼠正常肝細(xì)胞中,Nrf2在極少數(shù)肝細(xì)胞胞漿中表達(dá),8周實(shí)驗(yàn)組小鼠肝細(xì)胞中,Nrf2在受損肝細(xì)胞胞漿中較強(qiáng)表達(dá),12周實(shí)驗(yàn)組小鼠肝細(xì)胞中,Nrf2在受損肝細(xì)胞胞漿中強(qiáng)表達(dá),實(shí)驗(yàn)組小鼠8,12周末肝細(xì)胞胞Nrf2表達(dá)明顯強(qiáng)于同期對(duì)照組小鼠(p0.05),且12周末明顯強(qiáng)于8周末(p0.05) 4.與對(duì)照組比較,8周模型組和12周模型組血漿8-異前列腺素F2a明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論 1.采用高脂飼料喂養(yǎng)可以成功復(fù)制小鼠NAFLD模型,造模方法簡(jiǎn)便易行,模型成功率高,是一種較為理想的造模方法。 2.隨著高脂飲食喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),出現(xiàn)脂質(zhì)代謝紊亂,炎癥反應(yīng)氧化應(yīng)激,小鼠表現(xiàn)出單純脂肪肝和脂肪性肝炎,8-異前列腺素F2a水平升高,Nrf2在肝細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng),提示隨著非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生和發(fā)展,Nrf2對(duì)氧化應(yīng)激所致炎癥損傷的保護(hù)作用增強(qiáng)。
【圖文】：

肝組織病理學(xué)表現(xiàn)(HE，，x40())

A:對(duì)照組B:8周模型組C:12周模型組Fig.l巧sto】ogicalfeaturesoflivertissuesA:C0n仃Dlgl舊uPB:SWModelgl心uPC:12WModelg℃uP
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 曾民德;脂肪性肝病的氧應(yīng)激及其治療對(duì)策[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));2005年05期

2 鐘嵐,范建高,王國(guó)良,吳偉清,史祺;肥胖、高脂血癥性脂肪性肝炎模型的建立[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2000年02期

3 ;非酒精性脂肪性肝病診療指南[J];中華肝臟病雜志;2006年03期

4 張冬梅;張桂英;王濤;鐘惠菊;陳文科;;改善胰島素抵抗藥物治療大鼠非酒精性脂肪肝病的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年18期

5 Lauren M Aleksunes;José EManautou;Michael Goedken;;Up-regulation of NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 during human liver injury[J];World Journal of Gastroenterology;2006年12期

本文編號(hào)：2621234