【摘要】：研究背景:放射性食管炎是食管癌放射治療中常見的放療并發(fā)癥。當(dāng)放射治療累計劑量達(dá)到20Gy-30Gy時,照射野內(nèi)食管鏡下可表現(xiàn)為局部黏膜充血水腫、紅斑、糜爛、出血,患者可有吞咽困難、胸骨后燒灼感等臨床表現(xiàn),并逐漸加重。放射性食管炎的發(fā)生和發(fā)展與放療的時間-劑量-體積參數(shù)等密切相關(guān)。雖然放射性食管炎是自限性疾病,但其發(fā)生影響患者營養(yǎng)攝入,放射治療的依從性,甚至引起潰瘍、穿孔、氣管食管瘺管等嚴(yán)重并發(fā)癥。它是食管腫瘤放射治療中主要的劑量限制性因素,影響遠(yuǎn)期治療效果。因此放射性食管炎的預(yù)防及有效治療對患者的治療結(jié)局有重要意義。近年來,口腔微生物菌群在人類口腔疾病或者全身系統(tǒng)性疾病中的作用得到廣泛關(guān)注�？谘首鳛槭彻芘c外界相通的必經(jīng)通道,口腔菌群參與食管微環(huán)境的形成,兩者微生物結(jié)構(gòu)相似。食管內(nèi)微生物群落結(jié)構(gòu)的改變與胃食管反流病、巴雷特食管等疾病的發(fā)生相關(guān)。而放射性食管炎作為放療引起的一種非特異性炎癥,因照射野內(nèi)放射線殺傷作用,改變并破壞食管微環(huán)境,局部免疫受損,為相關(guān)細(xì)菌提供了致病條件。因此菌群在放射性食管炎的發(fā)生或發(fā)展過程中可以發(fā)揮一定作用。研究目的:采用16S rDNA擴(kuò)增子測序技術(shù)分析食管癌患者口腔菌群的構(gòu)成或豐度變化與放射性食管炎的相關(guān)性,并尋找與其相關(guān)的特異菌種,在微生物層面為食管炎的預(yù)防及治療提供理論基礎(chǔ)。材料與方法:本研究采用口腔黏膜拭子代表口腔菌群。食管癌患者放療過程中,累計劑量達(dá)到20Gy至30Gy之間出現(xiàn)急性放射性食管炎時,采集口腔拭子,按CTCAE標(biāo)準(zhǔn)分為1級或2級,分別納入11例、10例患者。并采集未行放療的食管癌患者的口腔拭子作為對照組,納入10例患者。主要實驗步驟如下:1.DNA提取:通過CTAB法提取拭子基因組DNA,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度和濃度。2.PCR擴(kuò)增:以基因組DNA為模板,選擇V3+V4區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增。通過2%濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳純化PCR產(chǎn)物,并剪切回收目標(biāo)條帶。3.文庫構(gòu)建:使用Ion Plus Fragment Library Kit 48 rxns建庫試劑盒進(jìn)行文庫的構(gòu)建。4.上機(jī)測序:對構(gòu)建的文庫進(jìn)行Qubit定量和文庫檢測,然后使用Ion S5TMXL上機(jī)測序。5.物種注釋:對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行剪切、過濾后,獲得有效數(shù)據(jù)并通過聚類成OTUs,選取OTUs代表序列,與SILVA132數(shù)據(jù)庫比對進(jìn)行物種注釋。6.統(tǒng)計分析:應(yīng)用生物信息技術(shù)進(jìn)行Alpha多樣性分析,驗證樣本測序深度是否合理,初步了解樣本物種多樣性及豐度。PCoA分析(Beta多樣性分析)探究組間物種結(jié)構(gòu)差異性,并通過LEfSe分析發(fā)現(xiàn)組間差異顯著的物種。結(jié)果:對樣本進(jìn)行處理、PCR、純化、數(shù)據(jù)庫構(gòu)建和測序,獲得準(zhǔn)確可靠的生物信息。單樣本多樣性分析證實本研究樣本量充足、測序深度合理,各組內(nèi)樣本豐度及均勻度良好。多樣本組間差異分析發(fā)現(xiàn)各組間物種結(jié)構(gòu)存在差異。各組間優(yōu)勢物種種類相似,但物種豐度不同。在三組間進(jìn)行LEfSe分析,并且在RE.1與RE.2兩組間未發(fā)現(xiàn)顯著差異。NRE組中LDA score4的biomarker共有8個,包括產(chǎn)擬桿菌門、擬桿菌綱、擬桿菌目、黑色普雷沃氏菌、普雷沃氏菌科、加氏乳酸桿菌等。這表明了這些菌種主要存在于NRE組中,而在RE.1與RE.2組中存在很少。結(jié)論:1.食管癌患者口腔內(nèi)存在眾多微生物菌群,菌種多樣、豐度顯著;2.1級與2級放射性食管炎患者間口腔菌群結(jié)構(gòu)相似,未發(fā)現(xiàn)差異顯著的菌種;3.與未行放療食管癌患者相比,放射性食管炎患者的口腔菌群優(yōu)勢菌種構(gòu)成在不同分類水平上存在相似性,但豐度上存在差異顯著的菌種。4.口腔中擬桿菌門及其所包含的以下水平相關(guān)菌種豐度的減少可能與放射性食管炎的發(fā)生有關(guān)。
【圖文】：

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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R735.1;R571

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本文編號：2616702