【摘要】： 第一部分TRAIL基因多態(tài)性與中國(guó)山東漢族人慢性乙型肝炎的相關(guān)性研究 背景: 乙型肝炎是由乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的肝臟炎癥性病變,是我國(guó)當(dāng)前流行最廣、危害最嚴(yán)重的一種傳染病,其中約5%-10%感染者可轉(zhuǎn)為慢性,遷延數(shù)年,反復(fù)活動(dòng),甚至轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不蚋伟Ｒ倚透窝茁曰c多種因素有關(guān),包括年齡、免疫功能、飲酒、合并感染或藥物等。目前,凋亡因子在慢性乙型肝炎病變過(guò)程中的作用已引起許多學(xué)者的關(guān)注。 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumor necrosis factor relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL),是1995年由Wiley發(fā)現(xiàn)并命名的,人TRAIL基因定位于染色體3q26,由5個(gè)外顯子組成,編碼1.77 kb mRNA,并可編碼281個(gè)氨基酸殘基組成的分子量為32.5 KDa的Ⅱ型跨膜蛋白。TRAIL屬于TNF超家族成員,其結(jié)構(gòu)與該家族的其他成員相仿。TRAIL可通過(guò)與其受體結(jié)合,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,或發(fā)揮其他生物學(xué)作用。近幾年通過(guò)臨床資料及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)TRAIL的表達(dá)水平與乙肝病毒在人體的感染呈現(xiàn)相關(guān)性,外周血sTRAIL的分泌能夠從一定程度上反映HBV感染后疾病的進(jìn)展及肝臟的損傷狀況,表明TRAIL參與乙型病毒性肝炎的致病過(guò)程,但TRAIL的多態(tài)性是否與慢性乙型肝炎的發(fā)生有關(guān)尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的: 通過(guò)檢測(cè)慢性乙型肝炎和健康對(duì)照組人群TRAIL基因第五外顯子3'-非編碼區(qū)(3'-untranslated region,3'-UTR)1525G/A、1595C/T位點(diǎn)基因單核苷酸多態(tài)性(SNPs),探討慢性乙型肝炎與TRAIL基因SNPs的關(guān)聯(lián)性。 方法: 采用病例對(duì)照的方法,收集確診的慢性乙型肝炎患者187例,同時(shí)選擇142例健康個(gè)體作為對(duì)照。全部選擇對(duì)象均空腹抽取靜脈血,通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction-Restrictionfragmem length polymorphism,PCR-RFLP)法檢測(cè)兩組人群TRAIL基因第五外顯子3'-非編碼區(qū)1525/1595兩位點(diǎn)基因多態(tài)性。 結(jié)果: 1.TRAIL等位基因1525G/A和1595C/T在病例組和對(duì)照組中的分布已達(dá)到遺傳平衡。病例組(x~2=1.207,P=0.547)和對(duì)照組(x~2=0.917,P=0.632)P值均大于0.05,無(wú)顯著性差異。 2.TRAIL基因1525位點(diǎn)檢測(cè)到GG、GA、AA三種基因型,從1595位點(diǎn)檢測(cè)到CC、CT、TT三種基因型。并發(fā)現(xiàn)TRAIL基因1525位點(diǎn)的GG、GA、AA基因型分布分別與1595位點(diǎn)的CC、CT、TT基因型一一對(duì)應(yīng)。 3.正常對(duì)照組中,男性的TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT的出現(xiàn)頻率分別為34.2%、41.0%、24.8%;女性出現(xiàn)頻率分別為24.0%、60.0%、16.0%,TRAIL 1525G/A和1595C/T位點(diǎn)SNPs在男性、女性中分布無(wú)顯著性差異(x~2=3.016,P=0.221),說(shuō)明在正常個(gè)體中TRAIL基因1525及1595位點(diǎn)三種基因型分布無(wú)性別差異,該位點(diǎn)SNPs與性別無(wú)關(guān)。 4.慢性乙型肝炎組中,男性TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT的出現(xiàn)頻率分別為39.2%、51.0%、9.8%;女性出現(xiàn)頻率分別為14.7%、61.8%、23.5%,兩組比較有顯著性差異(x~2=9.680,P=0.008),提示在慢性乙型肝炎患者中,1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs與性別有關(guān),在女性中多表現(xiàn)為1525AA/1595TT純合,而在男性中多表現(xiàn)為1525GG/1595CC純合。 5.TRAIL1525G/A和1595C/位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT在對(duì)照組中出現(xiàn)頻率分別為32.4%、44.4%、23.2%:而慢性乙型肝炎組出現(xiàn)頻率分別為34.8%、52.9%、12.3%,兩組比較有顯著性差異(x~2=7.014,P=0.03)。但等位基因1595C/1525G和1595T/1525A在對(duì)照組與病例組中的分布無(wú)顯著性差異(x~2=2.940,P=0.086)。 6.慢性乙肝HBeAg陽(yáng)性患者TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT出現(xiàn)頻率分別為39.0%、50.5%、10.5%,與對(duì)照組比較有顯著性差異(x~2=6.230,P=0.044);而慢性乙肝HBeAg陰性患者出現(xiàn)頻率分別為24.2%、59.7%、16.1%,與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(x~2=4.070,P=0.131)。慢性乙肝HBeAg陽(yáng)性與陰性患者TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)SNPs比較也無(wú)顯著性差異(x~2=3.970,P=0.137)。 結(jié)論: 中國(guó)漢族人存在TRAIL基因1525G/A、1595C/T多態(tài)位點(diǎn),且1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs情況完全一致。TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)的SNPs在正常人群的分布無(wú)性別差異,而在慢性乙型肝炎患者中的分布存在性別差異。慢性乙肝HBeAg陽(yáng)性患者與正常人比較,TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs有顯著差異;而慢性乙肝HBeAg陰性患者與正常人比較,TRAIL基因15256/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs無(wú)顯著差異。TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs在慢性乙型肝炎組與正常人群的分布有顯著差異,提示TRAIL SNPs與慢性乙型肝炎的易感性有關(guān)。 第二部分慢性乙型肝炎患者外周血中睪酮的變化及其意義 背景 乙型肝炎是由乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的肝臟炎癥性病變,是我國(guó)當(dāng)前流行最廣、危害最嚴(yán)重的一種傳染病,其中約5%-10%感染者可轉(zhuǎn)為慢性,遷延數(shù)年,反復(fù)活動(dòng),甚至轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不蚋伟�。乙型肝炎慢性化與多種因素有關(guān),包括年齡、免疫功能、飲酒、合并感染或藥物等。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎患者男性明顯多于女性,至于性激素是否在該病的發(fā)生中起一定作用,目前尚未見(jiàn)相關(guān)研究。在睪酮與肝癌的相關(guān)性研究中,發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性的肝癌患者其血清睪酮水平顯著高于HBsAg陰性患者,為進(jìn)一步明確血清睪酮水平與慢性乙型肝炎發(fā)生的相關(guān)性,本文采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)了65例慢性乙型肝炎患者及35例正常人血清中的睪酮水平,并進(jìn)一步檢測(cè)分析了睪酮與其他生化指標(biāo)的相關(guān)性,旨在探討血清雄激素睪酮在慢性乙型肝炎發(fā)生中的作用及其意義,為慢性乙型肝炎的預(yù)防、診斷及治療提供新的思路。 目的 探討睪酮水平與慢性乙型肝炎發(fā)生的相關(guān)性。 方法 用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定65例慢性乙型肝炎患者和35例健康者血清睪酮水平,同時(shí)用臨床化學(xué)國(guó)際聯(lián)盟(IFCC)推薦方法分別檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)以及γ-谷氨�；D(zhuǎn)肽酶(GGT),DCA終點(diǎn)法檢測(cè)血清總膽紅素(TBIL),AMP法檢測(cè)堿性磷酸酶(ALP),免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白IgG、IgM、IgA,熒光定量PCR檢測(cè)外周血HBV DNA水平。 結(jié)果 慢性乙型肝炎患者血清睪酮水平顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.01),尤其以20-40歲的慢性乙型肝炎患者血清睪酮升高最為明顯,HBeAg陽(yáng)性患者較HBeAg陰性患者升高明顯,但差別無(wú)顯著意義(P＞0.05)。慢性乙型肝炎患者肝功血清學(xué)指標(biāo)ALT、AST、TBIL、GGT、ALP及IgG水平顯著高于正常人(P＜0.05),但乙肝患者睪酮水平與ALT等生化指標(biāo)及HBV DNA水平無(wú)明顯相關(guān)性,與免疫球蛋白IgG呈中等負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論 慢性乙型肝炎患者血清睪酮水平顯著高于正常人,睪酮水平升高可作為慢性乙型肝炎的易感因素之一。
【圖文】：

正常對(duì)照組與慢性乙型肝炎患者TRAIL15乃G/A、1595C/T位點(diǎn)基因型

限制性內(nèi)切酶幾‘1酶切PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳圖(1595位點(diǎn))
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R512.62;R450

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本文編號(hào)：2613862