【摘要】：目的研究IGFBPrP1 siRNA對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的影響,并探討其可能的機(jī)制。方法體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6),分別設(shè)立:正常對(duì)照組,陰性對(duì)照組,IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染組。IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞,轉(zhuǎn)染不同時(shí)間后,用CCK-8試劑盒檢測(cè)肝星狀細(xì)胞增殖的變化,AnnexinV/PI雙標(biāo)法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝星狀細(xì)胞凋亡的變化,免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)P53及Bcl-2蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果 (1)IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞不同時(shí)間(24、48、72 h)后,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖受到抑制且凋亡率明顯增高,與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);(2)IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞48 h后,與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染組P53蛋白的表達(dá)量顯著增高(P0.01);Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯降低(P0.01)。結(jié)論 IGFBPrP1 siRNA能顯著抑制大鼠肝星狀細(xì)胞增殖且能促進(jìn)其凋亡;上調(diào)P53的表達(dá),下調(diào)Bcl-2的表達(dá)可能是IGFBPrP1 siRNA誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的途徑之一;推測(cè)抑制IGFBPrP1的表達(dá)有可能成為治療肝纖維化的新靶點(diǎn)。
【圖文】：

義(F=1536.190,P<0.01),分組主效應(yīng)與時(shí)間主效應(yīng)交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.696,P<0.01),說明各時(shí)間點(diǎn)三組間OD值有差別(表1,圖1)。966　J C liniHepato,l September2011, Vo.l 27, No.9

提示IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠HSC,24 h出現(xiàn)明顯的生長(zhǎng)抑制,48 h達(dá)到抑制高峰,72 h生長(zhǎng)抑制作用減弱,96 h生長(zhǎng)抑制作用消除(表2,圖2)。說明IGFB-PrP1 siRNA可以抑制HSC增殖。2. 2　AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率　AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)可區(qū)分實(shí)驗(yàn)樣本中正常、壞死及凋亡細(xì)胞。以AnnexinV為橫軸,PI為縱軸,作雙參數(shù)點(diǎn)圖,將細(xì)胞分為4個(gè)區(qū):左上象限為機(jī)械壞死細(xì)胞(Annexin -V-/PI+);右上象限為晚期凋亡細(xì)胞(Annexin- V+/PI+);右下象限為早期凋亡細(xì)胞(Annexin-V+/PI-);左下象限為活細(xì)胞(Annexin-V-/PI-)。取右上及右下兩個(gè)象限的細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)之和作為細(xì)胞凋亡率進(jìn)行比較,兩因素方差分析結(jié)果顯示:分組主效應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=216·139,P<0.01)說明三組間凋亡率值有差別,兩兩比較結(jié)果顯示IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染組凋亡率與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0·01)

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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