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IGFBPrP1 siRNA誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細胞凋亡及其機制

發(fā)布時間:2020-04-03 23:36
【摘要】:目的研究IGFBPrP1 siRNA對大鼠肝星狀細胞凋亡的影響,并探討其可能的機制。方法體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細胞株(HSC-T6),分別設(shè)立:正常對照組,陰性對照組,IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染組。IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞,轉(zhuǎn)染不同時間后,用CCK-8試劑盒檢測肝星狀細胞增殖的變化,AnnexinV/PI雙標法流式細胞術(shù)檢測肝星狀細胞凋亡的變化,免疫細胞化學(xué)染色法檢測P53及Bcl-2蛋白表達的變化。結(jié)果 (1)IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞不同時間(24、48、72 h)后,轉(zhuǎn)染組細胞增殖受到抑制且凋亡率明顯增高,與正常對照組及陰性對照組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);(2)IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞48 h后,與正常對照組及陰性對照組相比,轉(zhuǎn)染組P53蛋白的表達量顯著增高(P0.01);Bcl-2蛋白的表達明顯降低(P0.01)。結(jié)論 IGFBPrP1 siRNA能顯著抑制大鼠肝星狀細胞增殖且能促進其凋亡;上調(diào)P53的表達,下調(diào)Bcl-2的表達可能是IGFBPrP1 siRNA誘導(dǎo)大鼠肝星狀細胞凋亡的途徑之一;推測抑制IGFBPrP1的表達有可能成為治療肝纖維化的新靶點。
【圖文】:

輪廓圖,主效應(yīng),轉(zhuǎn)染,統(tǒng)計學(xué)意義


義(F=1536.190,P<0.01),分組主效應(yīng)與時間主效應(yīng)交互作用有統(tǒng)計學(xué)意義(F=11.696,P<0.01),說明各時間點三組間OD值有差別(表1,圖1)。966 J C liniHepato,l September2011, Vo.l 27, No.9

輪廓圖,轉(zhuǎn)染,抑制率,生長抑制作用


提示IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染大鼠HSC,24 h出現(xiàn)明顯的生長抑制,48 h達到抑制高峰,72 h生長抑制作用減弱,96 h生長抑制作用消除(表2,圖2)。說明IGFB-PrP1 siRNA可以抑制HSC增殖。2. 2 AnnexinV-FITC/PI流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率 AnnexinV-FITC/PI流式細胞術(shù)可區(qū)分實驗樣本中正常、壞死及凋亡細胞。以AnnexinV為橫軸,PI為縱軸,作雙參數(shù)點圖,將細胞分為4個區(qū):左上象限為機械壞死細胞(Annexin -V-/PI+);右上象限為晚期凋亡細胞(Annexin- V+/PI+);右下象限為早期凋亡細胞(Annexin-V+/PI-);左下象限為活細胞(Annexin-V-/PI-)。取右上及右下兩個象限的細胞凋亡百分數(shù)之和作為細胞凋亡率進行比較,兩因素方差分析結(jié)果顯示:分組主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義(F=216·139,P<0.01)說明三組間凋亡率值有差別,兩兩比較結(jié)果顯示IGFBPrP1 siRNA轉(zhuǎn)染組凋亡率與正常對照組及陰性對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0·01)

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本文編號:2613847

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