【摘要】： 肝纖維化的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜,是一個(gè)由多因素多環(huán)節(jié),涉及細(xì)胞、細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)共同作用的結(jié)果。肝臟是機(jī)體最重要的代謝器官,因其血供系統(tǒng)的特殊性,從門靜脈和肝動(dòng)脈到中央靜脈形成明顯的氧分壓梯度,所以肝臟容易遭受缺氧。各種原因引起的肝損傷都是造成肝臟缺氧的重要因素,缺氧激活肝星狀細(xì)胞從而啟動(dòng)肝纖維化形成,可能是各種病因致肝纖維化的共同機(jī)制,因此探討缺氧在肝纖維化形成中的作用機(jī)制,對(duì)于了解肝纖維化形成機(jī)制有重要的意義。 目的 探討缺氧在大鼠膽汁性肝纖維化形成中的作用機(jī)制。 方法 1.利用膽管結(jié)扎(bile duct ligation,BDL)建立大鼠膽汁性肝纖維化模型,于術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d、28d殺鼠取材,觀察組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)改變;逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、I型膠原mRNA的表達(dá);蛋白免疫印跡檢測(cè)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle,α-SMA)的表達(dá)。 2.缺氧培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)株HSC-T6,逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)HIF-1α、TGF-β1、I型膠原mRNA的表達(dá),蛋白免疫印跡檢測(cè)α-SMA表達(dá)。缺氧/常氧下,加2μg/mL TGF-β1中和抗體、50μmol/L HIF-1α誘導(dǎo)劑氯化鈷(cobalt chloride, CoCl2)或HIF-1α抑制劑2-甲氧雌二醇(2ME2),逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)HSC-T6表達(dá)I型膠原mRNA的變化。 結(jié)果 1.電鏡結(jié)果顯示膽管結(jié)扎后早期肝細(xì)胞便出現(xiàn)缺氧、能量代謝障礙表現(xiàn);膽管結(jié)扎3d時(shí),HIF-1α表達(dá)明顯升高,于膽管結(jié)扎7d時(shí),α-SMA蛋白、TGF-β1、I型膠原mRNA表達(dá)明顯升高。 2.缺氧能誘導(dǎo)HSC-T6表達(dá)HIF-1α、TGF-β1、I型膠原mRNA及α-SMA蛋白;常氧下CoCl2能誘導(dǎo)HSC-T6表達(dá)I型膠原mRNA,TGF-β1中和抗體及2ME2能減弱缺氧誘導(dǎo)HSC-T6表達(dá)I型膠原mRNA; 結(jié)論 缺氧激活肝星狀細(xì)胞,分泌I型膠原,增加細(xì)胞外基質(zhì)沉積,其作用機(jī)制既依賴于TGF-β1的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制,也與HIF-α介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān),在大鼠膽汁淤積性肝纖維化形成中起著重要的作用。
【圖文】：

肝細(xì)胞呈雙核，線粒體腫脹明顯，嵴斷裂甚至空泡變，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，溶酶體增多，可見(jiàn)膽汁栓形成；狄氏間隙內(nèi)庫(kù)普弗細(xì)胞數(shù)量明顯增多，體積增大，吞噬膽汁栓，可見(jiàn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，尚未見(jiàn)膠原沉積。BDL-7d 組上述肝臟缺氧、能量代謝障礙、膽汁淤積等表現(xiàn)明顯加重；狄氏間隙內(nèi)可見(jiàn)肝星狀細(xì)胞明顯增多，胞內(nèi)脂滴減少，周圍有膠原沉積。具體電鏡下改變見(jiàn)圖 2-7。2.6 肝組織 HIF-1α 蛋白表達(dá)的變化膽管結(jié)扎 3d 時(shí)，肝組織 HIF-1α 蛋白表達(dá)量（0.91±0.13）便顯著高于Sham 組（0.41±0.22）（P＜0.05），且隨著結(jié)扎時(shí)間的延長(zhǎng)，HIF-1α 蛋白表達(dá)量逐漸升高。在膽管結(jié)扎 1d 時(shí)，HIF-1α 蛋白表達(dá)量稍有升高，但與 Sham組未見(jiàn)明顯差異（P＞0.05），如圖 8 。相關(guān)分析顯示，HIF-1α 蛋白表達(dá)量與肝纖維化積分呈顯著正相關(guān)（r=0.875，P＜0.05）

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文Fig.8. Activation of HIF-1αin the livers of bile duct-ligated rats. Proteinexpression was measured by Western blot at different time points of treatmentand quantitated by densitometry. n = 3 experiments.2.7 肝組織 α-SMA 蛋白的變化膽管結(jié)扎 7d 時(shí)，肝組織 α-SMA 蛋白表達(dá)量（0.69±0.21）就顯著高于 Sham組（0.37±0.21）（P＜0.05），且隨著結(jié)扎時(shí)間的延長(zhǎng)，α-SMA 蛋白表達(dá)量逐漸升高。膽管結(jié)扎 1d 和 3d 時(shí)，α-SMA 蛋白表達(dá)量稍有升高，但均與 Sham組未見(jiàn)明顯差異（P＞0.05），如圖 9
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.2

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本文編號(hào)：2613804