【摘要】： 許多研究已經(jīng)證明促性腺激素釋放激素及其受體存在于下丘腦-垂體軸以外的器官和組織,例如胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞、前列腺、胰腺及一些腫瘤組織中[1.2.3]。Chegini等[4]首次證明了子宮平滑肌細(xì)胞上存在GnRH及其受體的mRNA。我們先前的研究也報道了胃腸胰系統(tǒng)能自身合成GnRH[5],而且證實(shí)胃腸胰系統(tǒng)及甲狀腺均含有GnRH受體免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)[6.7]。GnRH在下丘腦-腦垂體軸外生成的同時,其亦發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),Gurrie等[8]發(fā)現(xiàn)GnRH可以使胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]明顯升高,進(jìn)而參與細(xì)胞內(nèi)的信號傳遞過程。Tache等[9]發(fā)現(xiàn)腦室及靜脈注射GnRH類似物后,胃液的pH值升高,其作用機(jī)制可能是GnRH類似物通過抑制迷走神經(jīng)而發(fā)揮間接的調(diào)節(jié)作用。 近年來在臨床上觀察到藥理劑量的GnRH類似物可導(dǎo)致糖代謝紊亂,但其發(fā)生機(jī)制尚不明確,有人認(rèn)為可能與使用GnRH類似物時機(jī)體的性激素改變有關(guān);GnRH對葡萄糖代謝是否存在直接作用未見報道。肝臟是物質(zhì)代謝的主要器官,同時胃腸胰系統(tǒng)能自身合成GnRH,因此,肝臟細(xì)胞是否存在GnRH受體,GnRH是否在GnRH受體介導(dǎo)下對肝糖代謝產(chǎn)生影響是值得關(guān)注的問題。 研究方法: 取大鼠肝臟組織制成切片,運(yùn)用免疫組織化學(xué)SABC法和原位雜交技術(shù),觀察大鼠肝臟細(xì)胞是否存在GnRH受體;用原代培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞,GnRH受體免疫組化、糖原染色比較不同濃度葡萄糖培養(yǎng)液對GnRH受體表達(dá)的影響。 研究結(jié)果: (1):大鼠肝細(xì)胞呈GnRH受體免疫反應(yīng)陽性,陽性反應(yīng)物質(zhì)分布在細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中,細(xì)胞核呈陰性反應(yīng)。一個肝小葉內(nèi),靠近中央靜脈的肝細(xì)胞,其GnRH受體免疫反應(yīng)較強(qiáng),著色較深,遠(yuǎn)離中央靜脈的肝細(xì)胞,其GnRH受體的免疫反應(yīng)較弱,著色較淺。(2):大鼠肝細(xì)胞GnRH受體的mRNA雜交信號物質(zhì)呈深棕色,背景不著色,反差明顯。信號物質(zhì)分布于細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核未檢測到GnRH受體mRNA雜交信號,呈陰性反應(yīng)。一個肝小葉內(nèi),靠近中央靜脈的肝細(xì)胞,其GnRH受體mRNA雜交信號較強(qiáng),著色較深,遠(yuǎn)離中央靜脈的肝細(xì)胞,其GnRH受體mRNA雜交信號較弱,著色較淺。(3):用SABC免疫組織化學(xué)染色法分別對葡萄糖濃度1g/L、葡萄糖濃度2g/L培養(yǎng)液培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞行GnRH受體的免疫組織化學(xué)染色;鏡下觀察兩種葡萄糖濃度培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下GnRH受體的表達(dá),用圖像分析軟件對其進(jìn)行光密度值分析,結(jié)果顯示正常葡萄糖濃度(1g/L)培養(yǎng)時肝細(xì)胞GnRH受體的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于高糖培養(yǎng)液(2g/L)中肝細(xì)胞的表達(dá)(P0.01)。 結(jié)論: (1)大鼠肝細(xì)胞呈GnRH受體免疫反應(yīng)陽性,又有GnRH受體mRNA雜交信號,說明大鼠肝臟在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平能自身合成GnRH受體,同時此部位GnRH受體的分布具有中央靜脈旁肝細(xì)胞增多的特點(diǎn)。(2)GnRH受體的表達(dá)強(qiáng)度與細(xì)胞外液葡萄糖濃度有關(guān),表現(xiàn)為正常葡萄糖濃度培養(yǎng)時肝細(xì)胞GnRH受體表達(dá)強(qiáng)度明顯高于高糖濃度培養(yǎng),說明高濃度葡萄糖使肝細(xì)胞GnRH受體表達(dá)下調(diào),提示腸胰系統(tǒng)產(chǎn)生的GnRH可能通過其在肝細(xì)胞上的受體調(diào)節(jié)糖代謝。
【圖文】：

圖 1 GnRH 基因結(jié)構(gòu)及其與 GnRHR 相互作用模式示意圖Fig.1 Structure of GnRH gene and reciprocity between GnRH and GnRHRGnRH 基因結(jié)構(gòu)中的陰影部分為內(nèi)含子，，1～4 為外顯子，aa:氨基酸殘基引自： 葉丹、朱睦元等 促性腺激素釋放激素的結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展 2003;30(1)49-53

圖 1 圖 2圖 1 GnRH-R 在大鼠肝中的表達(dá). 免疫組織化學(xué)染色 SABC 法×200圖 2 GnRH-R 在陽性對照大鼠胃中的表達(dá). 免疫組織化學(xué)染色 SABC 法×200Fig.1 Expression of GnRH-R in rat liver. Immunohistochemical staining SABC×200Fig.2 Expression of GnRH-R in rat stomach as positive control. Immunohistochemi
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2612319