【摘要】：目的吡嗪酰胺是一種抗結(jié)核藥物,在抗結(jié)核治療過程中可引起患者肝臟及腸黏膜屏障損傷;益生菌是一類對(duì)機(jī)體有益的活的微生物。本研究擬探討益生菌(干酪乳桿菌,Lc S)補(bǔ)充對(duì)吡嗪酰胺致大鼠肝臟及腸黏膜損傷的影響,為合理應(yīng)用益生菌改善抗結(jié)核藥物不良反應(yīng)提供參考依據(jù)。方法將40只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C組)、吡嗪酰胺組(L0組)、低劑量Lc S組(L1組)、高劑量Lc S組(L2組)。L0組、L1組和L2組均先給予吡嗪酰胺處理,以建立肝損傷模型;L0組為陽性藥物組,1小時(shí)后給予生理鹽水10m L·kg-1·d-1灌胃;L1組和L2組大鼠1小時(shí)后分別給予10 m L·kg-1·d-1和20 m L·kg-1·d-1干酪乳桿菌(Lc S)(108 CFU·m L-1)灌胃;C組以等體積生理鹽水灌胃;持續(xù)10周。HE染色觀察各組大鼠肝臟及結(jié)腸組織病理學(xué)變化,并對(duì)肝臟進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分;速率法檢測(cè)各組大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平;蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)腸緊密連接蛋白Occludin和ZO-1表達(dá)水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)大鼠糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌16Sr DNA V3可變區(qū)進(jìn)行定量分析;酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定結(jié)腸分泌型免疫球蛋白A(s Ig A)、β-防御素-2(βD-2)水平,血清及結(jié)腸脂多糖(LPS)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-12(IL-12)水平。結(jié)果經(jīng)吡嗪酰胺處理10周后,L0組大鼠HE染色切片顯示肝細(xì)胞中度水腫,出現(xiàn)明顯的氣球樣變并伴有炎性細(xì)胞浸潤,組織病理學(xué)評(píng)分達(dá)到3.20分,血清ALT及AST水平顯著高于C組,顯示肝損傷造模成功。大鼠結(jié)腸隱窩深度、上皮杯狀細(xì)胞比例、結(jié)腸緊密連接蛋白Occludin和ZO-1表達(dá)水平、s Ig A水平均顯著降低;βD-2水平升高了48.1%;在干預(yù)第6周末,大鼠糞便內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯升高,雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯降低,結(jié)果顯示吡嗪酰胺對(duì)大鼠腸黏膜造成損傷。大鼠血清及結(jié)腸LPS、TNF-α、IL-6、IL-12水平均較高(P0.05),血清及結(jié)腸IL-10水平較低。經(jīng)過不同劑量的益生菌干預(yù)10周后,L1組和L2組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)均較L0組得到明顯改善,病理學(xué)評(píng)分分別降低到0.40分和0.30分,血清ALT和AST水平分別降低到73.10 U/L,73.60 U/L和150.50 U/L,143.80 U/L,顯著低于L0組的95.90U/L和188.60 U/L,提示補(bǔ)充益生菌可以改善肝損傷。結(jié)腸隱窩深度分別增加了41.5%和59.7%,βD-2水平明顯降低,s Ig A水平升高。L2組大鼠上皮杯狀細(xì)胞比例升高了7.6%,結(jié)腸緊密連接蛋白Occludin和ZO-1表達(dá)量分別升高了59.7%和97.9%,在干預(yù)第6周末及干預(yù)第10周末,雙歧桿菌和乳酸桿菌的量明顯升高,大腸桿菌的量明顯降低,提示益生菌可以改善大鼠腸黏膜屏障損傷。L1組和L2組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-12水平均明顯降低,IL-10水平均達(dá)到了L0組的1.2倍;結(jié)腸LPS、IL-6、IL-12水平均降低(P0.05),IL-10水平均明顯升高。L2組大鼠血清LPS水平較L0組降低了26.2%,結(jié)腸TNF-α水平較L0組降低了55.4%。結(jié)論吡嗪酰胺可導(dǎo)致大鼠肝臟、腸道菌群及腸黏膜損傷,益生菌通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、促進(jìn)緊密連接蛋白表達(dá)及提高腸黏膜免疫力對(duì)腸黏膜屏障損傷具有一定的改善作用,并通過“肝腸軸”,進(jìn)一步對(duì)肝臟損傷具有一定的改善效果。
【圖文】：

7圖 1.1 干預(yù)期間各組大鼠體重變化情況注：C 組：正常對(duì)照組；L0 組：吡嗪酰胺組；L1 組：低劑量 LcS 組；L2 組：高劑量 LcS 組.2 肝臟組織病理學(xué)變化C 組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索呈放射狀排列，肝細(xì)胞胞漿均勻，，肝細(xì)胞無水腫及脂肪變性；L0 組大鼠肝細(xì)胞中度水腫，胞漿疏松化，出現(xiàn)明顯的氣球樣變索結(jié)構(gòu)及竇周隙消失，伴有炎性細(xì)胞浸潤；不同劑量的 LcS 組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu) L0 組得到明顯改善，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索呈放射狀排列，肝細(xì)胞胞漿均勻， L1 組大鼠肝細(xì)胞輕度水腫，胞漿疏松化；L2 組大鼠肝臟組織接近正常對(duì)照組。根據(jù)觀察結(jié)果對(duì)各組大鼠進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分，結(jié)果顯示，L0 組大鼠的分?jǐn)?shù).20 分，明顯高于正常對(duì)照組的 0.00 分，經(jīng)過不同劑量的 LcS 干預(yù)后，L1 組和

圖 1.2 干預(yù)后各組大鼠肝臟組織 HE 染色（×200）注：C 組：正常對(duì)照組；L0 組：吡嗪酰胺組；L1 組：低劑量 LcS 組；L2 組：高劑量 LcS 組。表 1.2 干預(yù)后各組大鼠肝臟組織病理學(xué)評(píng)分Group nHAI scoreMean±SDDifference1Difference2Mean（95%CI） P1Mean（95%CI） P2C 10 0.00±0.00 3.20(2.56,3.84) 0.000L0 10 3.20±1.23*-3.20(-3.84,-2.56) 0.000L1 10 0.40±0.52#-0.40(-1.04,0.24) 0.215 2.80(2.16,3.44) 0.000L2 10 0.30±0.48#-0.30(-0.94,0.34) 0.350 2.90(2.26,3.54) 0.000注：C 組：正常對(duì)照組；L0 組：吡嗪酰胺組；L1 組：低劑量 LcS 組；L2 組：高劑量 LcS 組；*表示與 C 組相比，P＜0.05；#表示與 L0 組相比，P＜0.05。Difference1：與 C 組相比的改變量；Difference2：與 L0 組相比的改變量。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R57

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2610789