發(fā)布時(shí)間：2020-03-31 11:23

【摘要】：肝纖維化是肝臟對(duì)不同病因所致的慢性損害產(chǎn)生的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，以細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)成分的過度增生與異常沉積為主要特征，是多種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的中間病理階段。肝纖維化可發(fā)展為肝硬化、甚至肝癌。但肝纖維化的發(fā)病機(jī)制還不明確。因此，深入了解肝纖維化分子作用機(jī)制，尋找新的抗纖維化藥物具有重要的理論和實(shí)際意義。 肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化和增殖是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)多條離子通道蛋白可通過改變HSC中離子的變化，調(diào)控HSC的增殖活化。 瞬時(shí)受體電位通道是位于細(xì)胞膜上的一類重要的陽(yáng)離子通道蛋白，瞬時(shí)受體電位通道7(TRPM7)為TRP家族成員之一，是具有陽(yáng)離子通道和蛋白激酶雙重結(jié)構(gòu)的雙功能膜蛋白，可使自身或底物磷酸化，也被稱為“通道酶”。文獻(xiàn)報(bào)道，TRPM7參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖等多種生理過程。 本課題通過體外建立肝纖維化細(xì)胞模型，了解TRPM7在大鼠肝纖維化進(jìn)程中的作用，并通過檢測(cè)肝星狀細(xì)胞中PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵信號(hào)傳導(dǎo)分子PI3K、AKT等表達(dá)水平的變化，探討TRPM7在肝纖維化進(jìn)程中對(duì)HSC增殖調(diào)控的分子機(jī)制。 1. TRPM7與肝星狀細(xì)胞HSC-T6增殖之間的關(guān)系 建立體外PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6模型，再分別給予PI3K/AKT通路特異性阻斷劑LY294002、離子通道阻斷劑2-APB、Gd~(3+)處理，結(jié)果顯示：PDGF明顯促進(jìn)HSC的活化增殖，而給予LY294002、2-APB、Gd~(3+)干預(yù)后，HSC的增殖明顯受到抑制。 2.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染TRPM7siRNA對(duì)肝星狀細(xì)胞系HSC-T6細(xì)胞增殖的影響 建立體外TRPM7基因沉默模型，觀察TRPM7siRNA對(duì)HSC增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染TRPM7-siRNA48h后，，細(xì)胞增長(zhǎng)明顯減慢，在一定范圍內(nèi)抑制率呈濃度依賴性；隨著TRPM7表達(dá)的降低，α-SMA、Collagen的mRNA表達(dá)亦明顯降低，表明沉默TRPM7可抑制HSC的活化增殖。進(jìn)一步研究TRPM7對(duì)HSC-T6細(xì)胞周期的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沉默TRPM7可通過促使細(xì)胞聚積于G_0/G_1期，降低G2/M期及S期細(xì)胞，影響HSC-T6細(xì)胞的增殖。 以上結(jié)果提示：TRPM7參與了HSC的增殖與活化，抑制TRPM7的表達(dá)可明顯抑制HSC的活化增殖。 3. TRPM7對(duì)肝星狀細(xì)胞PI3K/AKT信號(hào)通路的影響 建立體外PDGF誘導(dǎo)的HSC-T6模型，再分別給予PI3K/AKT通路特異性阻斷劑LY294002、離子通道阻斷劑2-APB、Gd~(3+)處理，與正常組比較，PDGF能明顯促進(jìn)HSC-T6TRPM7、α-SMA、Collagen mRNA和p-PI3K和p-AKT蛋白的表達(dá)，當(dāng)使用LY294002、2-APB、Gd~(3+)處理后，TRPM7、α-SMA、Collagen mRNA和TRPM7、p-PI3K和p-AKT蛋白表達(dá)均受到抑制，T-PI3K、T-AKT表達(dá)無明顯變化。 以上結(jié)果均表明：TRPM7表達(dá)降低可以有效改善肝功能，減輕肝組織病理?yè)p傷程度，對(duì)肝纖維化具有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路有關(guān)。
【圖文】：

4誘導(dǎo)的纖維化肝組織及PDGF誘導(dǎo)的體外HSC-T6模型中TRPM7mRNA的表達(dá)均明顯高于正常組(P<0.01)，見圖1。M 1 2100250500100250500750**P <0.01 vs Normalβ-actin350bpTRPM7621bp00.10.20.30.40.50.61 2RPM7T/βactin-**圖1 肝臟組織中TRPM7mRNA的表達(dá)M: Marker 1: 正常組 2: CCL4模型組Fig1 TRPM7 mRNA expression in liverM: Marker 1: normal group 2: model group induced by CCL4

別 濃度(μmol/L) 吸光度值 抑制率(%)照 - 0.52±0.04 -型 - 0.84±0.02 -58.5△△Y294002 25 0.75±0.05 10.5*50 0.62±0.04 26.2**100 0.59±0.05 29.8**APB 50 0.74±0.05 11.9*100 0.61±0.02 27.4**200 0.58±0.07 30.9**3+1025500.76±0.050.63±0.040.60±0.069.5*25.1**28.6**
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2609012