【摘要】： 食管靜脈曲張經(jīng)內(nèi)鏡治療曲張靜脈消失后，若門脈高壓仍存在，就會在食管內(nèi)壁逐漸出現(xiàn)一些再生的小靜脈，成為遠期再出血的根源。再生的小靜脈纖細、迂曲，很難用硬化劑注射、套扎或組織膠粘合治療方法，如何解決這一問題是防治遠期再出血的關(guān)鍵問題之一。本研究采用光動力療法，觀察培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細胞在光動力作用后的改變，進而采用光動力療法對小靜脈進行封閉，并與硬化劑注射方法進行比較，探討光動力療法在食管靜脈曲張治療中的潛在價值。 ECV304人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系，用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。首先用MTT比色方法篩選出光動力療法合適劑量，然后采用光動力療法處理細胞(加入含血啉甲醚10μg／ml的培養(yǎng)液，以15mW／cm~2功率密度混合銅蒸汽激光照射10分鐘)，和正常培養(yǎng)細胞進行對照。種植于加蓋玻片的6孔板，姬姆薩染色后觀察形態(tài)學(xué)改變；種植于24孔板，連續(xù)6天每天取樣計數(shù)，繪制生長曲線；種植于50cm~2玻璃培養(yǎng)瓶，Annexin Ⅴ-FITC／PI雙染后流式細胞儀檢測細胞凋亡。 正常內(nèi)皮細胞呈梭形或多角形，時可見分裂相；光動力作用后細胞變小、變圓，結(jié)構(gòu)不清，胞漿內(nèi)有空泡，分裂相少，細胞密度減低。正常血管內(nèi)皮細胞在培養(yǎng)2天后進入指數(shù)生長期，表現(xiàn)為S型生長曲線；光動力作用后細胞生長緩慢，2天后細胞開始減少，無指數(shù)生長期，表現(xiàn)為低平生長曲線圖型。正常血管內(nèi)皮細胞組凋亡率為4.19％±0.17％；光動力作用組細胞凋亡率為19.69％±2.45％，明顯高于正常對照組(P=0.001)。 動物實驗以純種新西蘭白兔耳緣靜脈為研究對象。試驗動物注射血啉甲醚或竹紅菌乙素后用銅蒸氣激光照射耳緣靜脈。選擇不同的功率密度、照射時間、光敏劑及其劑量，比較各組兔耳緣靜脈血栓形成率，篩選出合適劑量。 在血啉甲醚劑量相同(10mg／kg)時，150mW／cm~2激光照射40min(360J／cm~2)組的血栓形成率為6／7，高于180J／cm~2和240J／cm~2激光照射組(P=0.001，P=0.041)，是光動力療法封閉小靜脈比較合適的條件。激光照 射劑量相同門 J／cm句時，30mgthg血晰甲醚組血栓形成率高于10mg／kg 和20mg／kg組（P＝0刀10，P＝0刀41X但這樣大劑量的血淋甲醚并不能用 于臨床。 然后設(shè)立光動力治療組門 血淋甲醚，150 mwcmZ功率密度銅 蒸氣激光照射40分鐘）和單純注射光敏劑組、單純激光照射組、硬化劑 注射組3個對照組作為對照。從大體觀察、超聲探測、活檢病理三方面觀 察血栓形成情況�；顧z組織除進行蘇木素／伊紅染色外還進行維多利亞藍 彈力纖維特殊染色以重點觀察血管壁結(jié)構(gòu)。 實驗動物耳緣靜脈光動力治療后照射部位血管血栓形成、血流阻斷， 耳緣靜脈近心端腔內(nèi)無血流，跨過血栓部位有側(cè)枝循環(huán)形成，4周后血栓 被纖維組織代替，遠端血液經(jīng)側(cè)枝回流。單純注射光敏劑和單純激光照射 組耳緣靜脈外觀均無改變。硬化劑注射組注射后血管立即變成藍紫色，大 片組織逐漸壞死，4周后壞死組織脫落，耳廓形成巨大缺損。超聲微探頭 探測顯示光動力治療后，耳緣靜脈管腔回聲較前升高，，符合血栓形成改變。 單純注射光敏劑和單純激光照射組回聲無改變。硬化劑注射組為彌漫性無 結(jié)構(gòu)高回聲。顯微鏡下光動力作用后，耳緣靜脈血管內(nèi)皮細胞被破壞，管 腔內(nèi)血栓形成，維多利亞藍彈力纖維特殊染色顯示內(nèi)皮細胞被破壞而彈力 纖維仍完整。4周后原血管部位被纖維組織代替。單純注射光敏劑和單純 激光照射組組織學(xué)無改變。硬化劑注射組鏡下為彌漫性壞死改變。光動力 作用組血栓形成率高于單純注射光敏劑組、單純激光照射組0刀．015人 與硬化劑注射組無統(tǒng)計學(xué)差異（P＝0．467）。 此后選取正常犬進行內(nèi)鏡下光動力療法，觀察光動力療法對正常食管 粘膜的損傷作用。實驗用犬內(nèi)鏡下光動力療法的實驗中，光動力療法造成 正常食管粘膜的片狀糜爛，比臨床硬化劑注射形成的潰瘍明顯要輕。 最后將光動力療法用于臨床，治療2例食管靜脈曲張內(nèi)鏡治療消失后 出現(xiàn)的再生小靜脈。治療后，再生小靜脈明顯減少、紅色征減輕。 結(jié)論：在合適的光敏劑和光照劑量下，光動力作用可有效地殺傷靜脈 血管內(nèi)皮細胞，造成血栓形成，并最終使血管閉合。與硬化劑注射相比較， 光動力療法效果確切而過程溫和。對小靜脈良好的封閉作用使光動力療法 有可能成為食管靜脈曲張治療的新成員。
【圖文】：

牢靠(圖1一1)，有時可見分裂相，約48小時增殖1倍。圖1一1正常血管內(nèi)皮細胞為梭形或多角形，在倒置顯微鏡下邊緣清楚，附壁牢靠2、激光照射量及HMME濃度與細胞存活率的關(guān)系表1一1不同激光照射量及血琳甲醚劑量時細胞存活率血琳甲醚(pg/ml)激光照射時間(功率密度15mw/cm5分鐘10分鐘P值0(單純照光)O(單純給藥)100%98.38土0.96%99.12士0.59%95.36土1.58%96.58土3.59%98.27士1.67%90.24土4.22%81.56士4.81%68.39士9.83%49.32士9.53%95.31士4.72%78.04士6.36%71.45士7.86%42.38士14.63%11.05士4.65%0.2140.0040.0020.002<0.0012.551020P值0.061<0.001<0.001單純光敏劑作用組不同劑量下細胞存活率無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.061);光動力作用組激光照射量相同(15mw/cmZxs分鐘、10分鐘組)不同光敏劑劑量下細胞存活率有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.001，P<0.001);單純激光照射組不同照光時間下細胞存活率無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.214);光動力作用組光敏劑劑量相同(2.5一20。g/ml各組)不同照光時間下細胞存活率有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.004，P=0.002，P=0.002，P<0.001)。16

胞至IX1Annexin混勻，室時內(nèi)上機儀，488nm射光點圖群體進行)的熒光比率。調(diào)行光譜重lQuest功清楚，附空泡，分細胞碎片�？梢姺至亚�，胞漿見細胞碎縮、濃染、
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R571.3

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本文編號：2608640