【摘要】：研究背景:乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染在我國依然是全國性的公共健康問題,人群中慢性乙肝病毒攜帶率近10%,而母嬰傳播是形成慢性HBV感染的重要原因。據(jù)估計我國的慢性HBV感染約有30%-50%是通過母嬰傳播發(fā)生的。雖然新生兒免疫接種已經(jīng)取得了巨大的成就,但仍有部分免疫失敗。有些嬰兒雖已產(chǎn)生抗體,但并不完全處于安全狀態(tài)。本課題組前期基于血清HBV轉(zhuǎn)錄體檢測的研究表明,既使經(jīng)過免疫治療和接種,大部分HBsAg(+)孕婦所生的新生兒血清中仍可檢測到頓挫型轉(zhuǎn)錄體(truncated RNA,trRNA),且是新生兒出生時唯一可檢測到的HBV血清學標志物。trRNA是一個潛在的診斷低復制特殊HBV感染狀態(tài)的新的標志物,但這種特殊感染狀態(tài)的穩(wěn)定性及其臨床意義尚待進一步明確。 在治療慢性HBV感染中,拉米夫定能快速、有效地抑制HBV復制,但不能完全清除病毒,停藥后易復發(fā),也有耐藥問題。拉米夫定為核苷類藥物,通過抑制HBV多聚酶的活性阻斷HBV復制,作用靶位是HBV聚合酶反轉(zhuǎn)錄活性區(qū)YMDD基因,長期應用可致病毒耐藥變異。拉米夫定的阻斷效果必會導致大量HBV復制中間體的產(chǎn)生,這些中間體是不完整不成熟的。前期拉米夫定治療對血清HBV轉(zhuǎn)錄體影響的研究中表明,XDNA檢測能更真實地反映病毒含量的變化,也可能是反映患者耐藥的早期血清學標志物,同時發(fā)現(xiàn)在停藥時HBV血清標志物均陰性但trRNA始終穩(wěn)定表達,提示HBV感染狀態(tài)的持續(xù),trRNA有可能作為預測拉米夫定治療停藥后反跳的血清標志物。 目的:本研究擬在前期研究的基礎上,對HBsAg(+)孕婦及其所生新生兒進行動態(tài)觀察,探討trRNA確定的早期特殊感染狀態(tài)是否穩(wěn)定,是否會引起HBV感染活動性改變及影響因素。同時選擇隨訪拉米夫定治療出現(xiàn)停藥后反跳的慢性HBV感染病例模型,探討trRNA的動態(tài)變化規(guī)律及其在停藥后反跳預警中的作用。 方法:跟蹤隨訪90例HBsAg陽性孕婦及所生新生兒,孕婦在接受HBIG治療前和分娩前各采血1次,新生兒在出生后24h內(nèi)、1、3、6、9、12月各采血1次,檢測trRNA、fRNA、乙肝五項和HBVDNA定量,按新生兒trRNA分組比較新生兒HBV活動性感染的發(fā)生率,按母親HBIG治療、HBeAg、HBVDNA定量分別分組比較母嬰trRNA、fRNA的陽性率。 選擇100例拉米夫定治療停藥反跳的病例模型,從治療始每3個月采血1次,隨訪24個月,觀察分析HBVDNA、HBsAg、HBeAg、ALT、YMDD突變和HBVX區(qū)DNA、fRNA/trRNA的變化規(guī)律。 結(jié)果:隨訪的新生兒12個月內(nèi)無HBV活動性感染發(fā)生,新生兒fRNA均陰性。分別以母嬰是否行HBIG治療分組,比較新生兒trRNA檢出率,差別均無統(tǒng)計學意義(χ2=1.208,P=0.272;χ2=2.225,P=0.136);以母親HBeAg分組,分別比較母嬰trRNA檢出率,差別無統(tǒng)計學意義(χ2=0.008,P=0.928;χ2=0.694,P=0.405),而母親fRNA檢出率差別有統(tǒng)計學意義(χ2=10.565,P=0.001);以孕婦產(chǎn)前HBVDNA定量分組,同樣分別比較母嬰trRNA檢出率,差別無統(tǒng)計學意義(χ2=4.349,P=0.226;χ2=3.182,P=0.364),而母親fRNA的檢出率差別有統(tǒng)計學意義(χ2=21.193,P=0.000)。 入選的100例拉米夫定治療的患者均成功動態(tài)觀察24個月。所有患者在治療滿3-6個月期間均有程度不同的治療反應,HBVDNA和fRNA定量均迅速下降至低水平,其中78例轉(zhuǎn)陰,HBeAg血清轉(zhuǎn)換率24%(HBeAg消失±anti-HBe),繼續(xù)鞏固治療至滿12個月后停藥。停藥時共91例HBVDNA和fRNA均陰性,余下9例也均降至低水平(105copies/ml)。HBeAg血清轉(zhuǎn)換率28%,ALT均恢復正常,YMDD變異檢測均陰性。停藥后繼續(xù)觀察12個月,所有患者均出現(xiàn)不同程度的反跳,HBeAg復陽性率32.12%(9/28)。HBVDNA、fRNA的變化規(guī)律相同,由高降低至消失,停藥后又不同程度地升高,而trRNA在治療停藥及反跳的全過程中始終穩(wěn)定持續(xù)表達。 結(jié)論:在隨訪的12個月內(nèi),新生兒trRNA陽性與否不受母嬰是否行HBIG治療、HBeAg和HBVDNA定量的影響,這種特殊感染狀態(tài)是穩(wěn)定的,這可能是新生兒今后發(fā)生開放性感染的病理學基礎。 trRNA是一個潛在的預測拉米夫定治療慢性HBV感染停藥反跳的血清學標志物。
【圖文】：

圖 1 各目 標 片段 在 HB V 基因 組中 的位 置 示意 圖 5 瓊脂 糖凝 膠電 泳EB ，瓊 脂 糖 ， 1× TA E 緩 沖 液 ，D N A M a rk er ， 6 ×溴 酚 藍加 樣緩 沖 液 。 1 ） 配膠 稱取 瓊脂 糖 1 g 放于 錐形 瓶 ， 加入 1 ×T A E 緩沖 液

將 凝 膠 放置 干燥 玻 璃 皿 內(nèi)， 切 除 凝 膠 多余 部 以便 易 辨認 。 中 加 入變 性 液 ， 浸泡 約 3 0m i n 并 不斷 搖 動 ，，使 DN 剪 一張 比 凝 膠 略 大 一點 的 Hy b o n d- N+尼龍 膜 ， 膜 先浸 入 變 性液 中 15 m i n。 細 原 理 使凝 膠 中 變性 的 DN A 轉(zhuǎn)移 到 膜上 ， 具 體 放 時 間 為 18 - 2 2 h 。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R512.62

【參考文獻】

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本文編號：2604629