【摘要】：研究目的 通過研究初始治療的乙型肝炎病毒(HBV)相關慢加急性肝衰竭(ACLF)患者外周血調(diào)節(jié)性T細胞(Treg細胞)及血清中促炎抗炎細胞因子表達和動態(tài)變化,探討外周血Treg細胞、血清中促炎抗炎細胞因子在初始治療的HBV相關ACLF患者疾病進程中的臨床意義。 研究方法 入組44例HBV相關ACLF患者、46例慢性乙型肝炎(CHB)患者、20例健康對照者,采用流式細胞儀檢測外周血Treg細胞頻率、CD39+Treg細胞頻率、CTLA-4+ Treg細胞頻率,采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清中白細胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平,同時檢測各項臨床指標。采用免疫組織化學法檢測5例HBV相關ACLF患者、6例CHB患者、3例健康者Foxp3+細胞在肝組織內(nèi)表達情況。對上述44例HBV相關ACLF患者進行為期3周的隨訪,動態(tài)觀察外周血Treg細胞頻率、CD39+Treg細胞頻率、CTLA-4+Treg細胞頻率,血清IL-1β水平、IL-6水平、IL-10水平、TGF-β1水平、TNF-a水平的變化趨勢。 結(jié)果 HBV相關ACLF組外周血Treg細胞頻率(5.69%±1.83%)、CD39+Treg細胞頻率(49.55%±25.01%)、CTLA-4+Treg細胞頻率(35.27%±12.28%)均高于CHB組(4.56%±1.59%,P0.01;36.10%±20.65%,P0.01；28.99%±10.59%,P0.01)、健康對照組(2.64%±0.42%,P0.01；19.67%±9.09%,P0.01；24.52%±7.52%,P0.01)。HBV相關ACLF組肝組織內(nèi)Foxp3+細胞在匯管區(qū)(19.53hpf±9.47hpf)、肝小葉(9.93hpf±2.51hpf)表達均高于CHB組(3.39hpf±1.12hpf, P0.01; 0.72hpf±0.65hpf, P0.01).健康對照組(0.22hpf±0.19hpf, P0.05; 0.11hpf±0.19hpf, P0.01)。HBV相關ACLF組血清中IL-1β(9.33pg/ml±6.85pg/ml)、IL-6 (20.90pg/ml±23.44 pg/ml)、IL-10 (8.48pg/ml±6.42pg/ml)、TGF-β1 (426.23pg/ml±296.36pg/ml)水平均高于CHB組(5.27pg/ml±5.45 pg/ml, P0.01; 3.79pg/ml±4.09pg/ml, P0.01; 4.34pg/ml±2.50 pg/ml, P0.01; 181.91pg/ml±82.23pg/ml,P0.01)、健康對照組(2.20pg/ml±1.11 pg/ml, P0.01; 1.35pg/ml±1.55pg/ml, P0.01; 2.83pg/ml±1.86pg/ml, P0.01; 212.12 pg/ml±108.24pg/ml, P0.01), HBV相關ACLF組血清中TNF-a水平(12.19pg/ml±10.32pg/ml)高于健康對照組(6.67pg/ml±4.32pg/ml,P0.05)。HBV相關ACLF中期組、晚期組外周血CD39+Treg細胞頻率(53.83%±26.62%,P0.05；52.88%±23.24%,P0.05)、血清IL-1β水平(11.41pg/ml±7.64pg/ml,P0.01；9.08pg/ml±6.03pg/ml,P0.05)均高于早期組(25.44%±8.73%;3.58pg/ml±2.55pg/ml),中期組血清TGF-p1水平(534.91pg/ml±347.19pg/ml)高于早期組(220.67pg/ml±86.88 pg/ml,P0.05).HBV相關ACLF組中Treg細胞頻率分別與Cre水平、MELD分值呈正相關(r=O.333,P0.05;r=0.388,P0.01),與IL-1β水平呈負相關(r=.0.382, P0.01)；CD39+Treg細胞頻率分別與CTLA-4+Treg細胞頻率.TGF-p1水平呈正相關(r=0.487,P0.01；r=0.325,P0.05)；IL-6水平分別與IL-10水平、TBIL.Cre水平、MELD分值、MELD-Na分值呈正相關(r=0.367,P0.05;r=0.470,P0.01；r=0.454,P0.01；r=0.520,P0.01；r=0.506,P0.01),與Na+呈負相關(r=-0.348, P0.05);IL-10水平分別與CHE、MELD-Na分值呈正相關(r=0.388,P0.01;r=0.438, P0.01),與Na+呈負相關(r=-0.523,P0.01)；TGF-β1水平與CHE呈正相關(r=0.320,P0.05)。HBV相關ACLF未完成觀察組(n=13)Treg細胞頻率(6.72%±1.42%)、IL-6水平(38.43pg/ml±31.84pg/ml).MELD分值(34.9±7.1)、MELD-Na分值(40.62±10.89)基線水平均高于好轉(zhuǎn)組(n=14)(5.39%±2.15%,P0.05；15.61pg/ml±16.87 pg/ml,P0.05；24.2±4.3,P0.01；22.49±6.18,P0.01)、無效組(n=13)(4.57%±0.93%,P0.01;13.00pg/ml±11.99pg/ml,P0.01；24.1±2.5,P0.01；20.06±7.02,P0.01),好轉(zhuǎn)組與無效組外周血Treg細胞頻率、CD39+Treg細胞頻率、CTLA-4+Treg細胞頻率,血清IL-1β水平、IL-6水平、IL-10水平、TGF-β1水平、TNF-α1水平、MELD分值、MELD-Na分值基線無統(tǒng)計學差異(P均0.05)。近期隨訪過程中的動態(tài)觀察顯示,好轉(zhuǎn)組患者隨著病情好轉(zhuǎn)MELD分值、MELD-Na分值呈逐漸下降的趨勢,Treg細胞頻率呈逐漸上升的趨勢,IL-6水平.TGF-β1水平呈逐漸下降的趨勢,TNF-α水平呈先短暫上升后逐漸下降的趨勢；而無效組患者隨著病情加重MELD分值、MELD-Na分值呈逐漸上升趨勢,Treg細胞頻率呈先短暫上升后逐漸下降的趨勢,IL-6水平呈先逐漸上升后短暫下降的趨勢,TGF-β1水平呈先逐漸下降后短暫上升的趨勢；CD39+Treg細胞頻率、CTLA-4+Treg細胞頻率、IL-1β水平、IL-10水平在好轉(zhuǎn)組、無效組中均無明顯波動。 結(jié)論 HBV相關ACLF患者體內(nèi)存在細胞免疫失衡及促炎抗炎細胞因子紊亂；外周血Treg細胞及其亞群CD39+Treg細胞、CTLA-4+Treg細胞的頻率、IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1、TNF-α水平在HBV相關ACLF患者體內(nèi)明顯增高；基線外周血Treg細胞頻率、IL-6、IL-10水平與HBV相關ACLF患者病情嚴重程度存在一定的相關性；外周血Treg細胞頻率、IL-6水平基線值高的患者預后差；外周血Treg細胞頻率IL-6、TGF-β1、TNF-α水平的動態(tài)變化與HBV相關ACLF患者預后存在一定的相關性；HBV相關ACLF患者外周血Treg細胞和血清促炎抗炎細胞因子的表達及動態(tài)變化為臨床觀察患者疾病進展和預測近期預后提供了良好的輔助手段。
【圖文】：

HBv相關ACLF患者肝組織內(nèi)Foxp3肝小葉十細胞的表達(x400倍)

(2)CHB患者肝組織內(nèi)FoxP3+細胞的表達匯管區(qū)圖1一 8cHB患者肝組織內(nèi)FoxP3肝小葉+細胞的表達(x400倍)(3)健康對照者肝組織內(nèi)FoxP3+細胞的表達匯管區(qū)圖1一9健康對照者肝組織內(nèi)肝小葉Foxp3十細胞的表達(x400倍)2、不同人群免疫組織化學半定量FoxP3+細胞比較l)HBv相關AeLF組匯管區(qū)Fo卻3+細胞(19.53hP任9.47沖f)高于eHB組(3.39hP任1.12hPf， P<0.OI)、健康對照組 (0.22hP任O.19hPf， P<0.05)，CHB組高于健康對照組(尸<0.05)。2)HBv相關魷LF組肝小葉Fo卻3+細胞(9.93hP任2.slhPf)高于eHB組(0.72hP任0.65hPf，入0.01)、健康對照組 (0.llhP任0.19hPf， P<0.OI)，CHB組高于健康對照組(P<0.05)。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62;R575.3

【參考文獻】

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本文編號：2603004