【摘要】： 目的:①篩選三氯乙烯(TCE)致L-02肝細(xì)胞損傷相關(guān)蛋白。②研究TCE對(duì)肝細(xì)胞蛋白R(shí)ho GDIα表達(dá)的影響。 方法:①收集TCE接觸者血清(正常對(duì)照)、TCE中毒病人急性期和恢復(fù)期血清(均伴隨嚴(yán)重肝損傷)。以40μmol/L TCE處理的L-02肝細(xì)胞總蛋白作為抗原來(lái)源,利用血清蛋白質(zhì)組分析方法(SERPA)篩選并鑒定TCE致L-02肝損傷相關(guān)蛋白。②以DMSO和40μmol/L TCE分別對(duì)L-02肝細(xì)胞做對(duì)照和致?lián)p傷處理,提取總蛋白及總RNA,以β-actin為內(nèi)參,采取western blot和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)對(duì)分別從蛋白和mRNA水平檢測(cè)Rho GDIα表達(dá)變化。 結(jié)果:①建立并優(yōu)化了雙向電泳-免疫印跡-質(zhì)譜鑒定的系統(tǒng)分析方法,得到高重復(fù)性、高匹配率的雙向電泳圖譜和免疫印跡圖譜。篩選并成功鑒定了6個(gè)致L-02肝細(xì)胞損傷相關(guān)蛋白,分別為:腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因NM23蛋白、嘌呤核苷磷酸化酶、烯酰輔酶A水合酶Ⅰ、核糖體蛋白P0、乳酸脫氫酶B和蛋白酶體激活因子PA28蛋白。②TCE處理24h后Rho GDIαmRNA表達(dá)量顯著下降,蛋白含量明顯升高,與比較蛋白質(zhì)組分析結(jié)果一致。 結(jié)論:①TCE致肝損傷患者血清中存在與TCE致肝細(xì)胞損傷相關(guān)的抗體。②血清蛋白質(zhì)組分析方法鑒定的6個(gè)TCE致肝細(xì)胞損傷相關(guān)性蛋白為進(jìn)一步研究TCE致肝細(xì)胞損傷機(jī)制提供了重要線索。TCE處理可以使L-02肝細(xì)胞中的Rho GDIαmRNA表達(dá)量顯著下降,蛋白表達(dá)水平明顯升高。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R575;R595

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2600036