【摘要】：目的:(1)探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向肝樣細(xì)胞的誘導(dǎo)方法,觀察BMSCs向肝樣細(xì)胞分化的能力;(2)探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)急性肝衰竭大鼠的治療作用。 方法:(1)采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、擴(kuò)增大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,培養(yǎng)至第3代時(shí)用肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF)和成纖維生長因子4(Fibroblast growth factor-4,FGF-4)聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠BMSCs向肝樣細(xì)胞分化,于誘導(dǎo)7、14、21d后收集細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)變化及肝細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志的表達(dá)。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞白蛋白(Albumin,ALB)、甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、細(xì)胞角蛋白18(Cytokeratin 18,CK18)的mRNA表達(dá),并于誘導(dǎo)7、14、21d進(jìn)行PAS糖原染色,誘導(dǎo)14、21d后免疫細(xì)胞熒光方法檢測(cè)白蛋白的表達(dá),以驗(yàn)證誘導(dǎo)分化結(jié)果;(2)以四氯化碳作為肝臟毒劑,構(gòu)建SD大鼠急性肝衰竭模型。在造模成功的24h后,以2×106/ml的劑量分別將誘導(dǎo)及未誘導(dǎo)的BMSCs經(jīng)尾靜脈注入同種大鼠體內(nèi)。肝衰竭模型組注入等量的生理鹽水。嚴(yán)密觀察各組大鼠的飲食、活動(dòng)及死亡情況,并分別在移植后3、7、14d處死,留取肝臟和血清標(biāo)本,評(píng)價(jià)肝功能的恢復(fù)情況。 結(jié)果:(1)隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表現(xiàn)出肝細(xì)胞樣特征,出現(xiàn)類圓形細(xì)胞,并呈集落生長,肝細(xì)胞特異性標(biāo)志物逐漸出現(xiàn)和成熟。誘導(dǎo)至7d出現(xiàn)AFP(mRNA)表達(dá),14d表達(dá)增高,21d時(shí)表達(dá)下降。CK18、ALB(mRNA)和糖原l4d時(shí)出現(xiàn)表達(dá),并隨時(shí)間延長表達(dá)逐漸增強(qiáng)。免疫細(xì)胞熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞誘導(dǎo)14d時(shí),胞漿ALB出現(xiàn)表達(dá),至21d時(shí),ALB表達(dá)增強(qiáng);(2)不同劑量的CCl4可導(dǎo)致不同程度的肝損傷,而50% CCl4 4ml/kg的劑量較好地模擬了急性肝衰竭的病理生理改變且穩(wěn)定性較好。移植BMSCs后3～14d在移植組大鼠肝臟內(nèi)均能檢測(cè)到DAPI陽性移植細(xì)胞。移植組恢復(fù)情況明顯優(yōu)于對(duì)照組,誘導(dǎo)細(xì)胞組情況稍好于未誘導(dǎo)細(xì)胞組。 結(jié)論:(1)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在HGF、FGF-4及多種因子的誘導(dǎo)作用下,具有強(qiáng)大的向肝細(xì)胞分化的能力;(2)經(jīng)尾靜脈移植的BMSCs可促進(jìn)急性肝衰竭大鼠的肝功能恢復(fù)。
【圖文】：

7d后，細(xì)胞梭形形態(tài)明顯，并呈漩渦狀生長，經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)后純度逐漸升高，誘導(dǎo)14d后少量細(xì)胞呈三角形、類圓形，21d 以后多數(shù)細(xì)胞變圓，并開始形成多個(gè)集落，，形狀似肝細(xì)胞，少數(shù)細(xì)胞具有雙核（見圖1）。

CD29、CD90 的陽性率分別為 98.7％、99.2％，驗(yàn)證此細(xì)胞為 BMSCs，純度較高（見圖2)。A BC DCD34 的陽性率為 0.5％ a:同型對(duì)照；b:波形圖；c:散點(diǎn)圖aacCD34 的陽性率為 0.48％ a：同型對(duì)照；b：波形圖；c：散點(diǎn)圖b
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575.3

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本文編號(hào)：2597488