【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)是一種病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確的慢性非特異性腸道炎性病變,科學(xué)家們普遍認(rèn)為其是一種遺傳、環(huán)境和免疫因素相互作用導(dǎo)致的炎癥性腸病。由于UC是病因不明的慢性復(fù)發(fā)性的腸道炎癥,其遷延不愈和反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)需要長期服藥,停藥后易復(fù)發(fā),病人對(duì)藥物的不耐受和毒副作用成了制約其療效的關(guān)鍵因素之一。在UC患者需要長期或終生服用化學(xué)藥物或免疫抑制劑治療,副作用大、緩解率低的情況下,尋找一種益生菌治療或者輔助治療UC不失為一種選擇。具有營養(yǎng)腸粘膜、免疫調(diào)節(jié)作用的益生菌逐漸引起人們的重視。針對(duì)當(dāng)前的問題,為了達(dá)到預(yù)防和緩解潰瘍性結(jié)腸炎的目的,同時(shí)也為醫(yī)療保健行業(yè)和治愈潰瘍性結(jié)腸炎提供理論基礎(chǔ)和治療方法,本論文應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室自主分離的副干酪乳桿菌HD1.7作為試驗(yàn)菌株,首先運(yùn)用噴霧干燥法對(duì)其進(jìn)行包裹制備微膠囊,然后應(yīng)用葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)建立UC小鼠模型,將BaLb/c小鼠隨機(jī)分為1.模型組(生理鹽水)2.裸菌組(1.0×1010 cfu/mL)3.空微膠囊組(無菌微膠囊)4.微膠囊組(1.0×1010 cfu/mL)5.正常組(正常飲食)。實(shí)驗(yàn)期間每日觀察小鼠飲食、飲水、毛色、活動(dòng)等日常情況,觀察小鼠糞便形狀、糞便隱血以及便血情況,稱量體重。分別于試驗(yàn)第7、14天,眼球取血法對(duì)小鼠取血,運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞因子含量;運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量。然后頸椎脫臼法處死小鼠,觀察結(jié)腸的改變狀況,測(cè)量其長度;取出小鼠的脾臟、肝臟稱量其質(zhì)量,計(jì)算小鼠脾臟、肝臟指數(shù)。剪取小鼠整個(gè)結(jié)腸段,采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞因子及SIgA表達(dá)量;另一部分結(jié)腸組織石蠟包埋切片行HE染色。之后剪取腸系膜淋巴結(jié)、派伊兒氏結(jié),利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞數(shù)量。取得的研究結(jié)果如下:(1)與空微膠囊組和模型組相比,微膠囊組和裸菌組能夠顯著地減緩結(jié)腸炎小鼠體質(zhì)量、結(jié)腸長度、DAI積分及組織病理學(xué)積分下降的趨勢(shì),有顯著性差異(P0.05),同時(shí)能夠顯著地提高脾臟和肝臟指數(shù),有顯著性差異(P0.05),其中以微膠囊組效果最佳�？瘴⒛z囊組和模型組相比較,無顯著性差異(P0.05)。(2)與空微膠囊組和模型組相比,副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌能夠顯著地降低結(jié)腸組織和外周血中IFN-γ和TNF-α表達(dá)量(P0.05),其中又以微膠囊組效果最佳。雖然副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌能夠降低結(jié)腸組織和外周血中IL-6的表達(dá)量,但與空微膠囊組和模型組相比,無顯著性差異(P0.05)。與空微膠囊組和模型組相比,副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌可以顯著地提高結(jié)腸組織和外周血中IL-10和IL-13的表達(dá)量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中以微膠囊組效果最好。雖然副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌能夠降低結(jié)腸組織和外周血中IL-4表達(dá)量,但與空微膠囊組和模型組相比,無顯著性差異(P0.05)。(3)與空微膠囊組和模型組相比,副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌可以顯著地提高UC小鼠結(jié)腸組織中SIgA的表達(dá)量,有顯著性差異(P0.05),其中微膠囊組效果最佳。副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌對(duì)外周血和MLN中CD4+、CD8'T淋巴細(xì)胞數(shù)量沒有顯著性影響,與空微膠囊組和模型組相比,無顯著性差異(P0.05)。與空微膠囊組和模型組相比,副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌可以顯著提高PP結(jié)中CD4·T淋巴細(xì)胞數(shù)量,并且能夠顯著地降低CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量,有顯著性差異(P0.05)。綜合分析,DSS誘導(dǎo)建立的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型可以模擬結(jié)腸炎臨床上的癥狀,副干酪乳桿菌HD1.7微膠囊及其裸菌對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠有治療作用,其治療作用的機(jī)制可能是抑制促炎性細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α的表達(dá),促進(jìn)抗炎性細(xì)胞因子IL-10和IL-13的表達(dá)以及SIgA的分泌,同時(shí)提升CD4+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)量和降低CD8+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)UC疾病的治療作用。
【圖文】：

腸炎小鼠的日常狀態(tài)，同時(shí)能夠顯著地減緩小鼠體重下降的趨勢(shì)，其中微膠囊組逡逑效果最佳，表明該益生菌經(jīng)過微膠囊化后可以顯著提升到達(dá)腸道的活菌數(shù)，從而逡逑能夠更好地發(fā)揮益生功能。１到１４天各組小鼠體質(zhì)量變化情況如圖２－１所示。逡逑１９逡逑

２．４．３小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)損傷的變化逡逑對(duì)各組小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行ＨＥ染色，然后在顯微鏡下對(duì)結(jié)腸組織進(jìn)行組織病理逡逑學(xué)評(píng)分，結(jié)果如圖２－６所示：逡逑試驗(yàn)地７天時(shí)，正常組：如圖（ａ）所示，低倍鏡視野內(nèi)可見小鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)逡逑完整，結(jié)腸隱窩無缺損。如圖（ｂ）所示，高倍鏡視野下可見黏膜上皮細(xì)胞排列整齊逡逑且無明顯病變，粘膜層腺泡結(jié)構(gòu)完整，黏膜下層無炎性細(xì)胞浸潤，肌層肌纖維捕＾逡逑列整齊。逡逑微膠囊組：如圖（ｃ）所示，低倍鏡下可見小鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)基本完整，結(jié)腸隱逡逑窩也有少量缺損存在，且存在少量潰瘍?cè)詈蛪乃涝�。腸壁仍存在少量腫脹與斷裂。逡逑如圖（ｄ）所示，高倍鏡下可見黏膜上皮結(jié)構(gòu)比較完整，，但也存在上皮細(xì)胞缺損；結(jié)逡逑腸隱窩內(nèi)部分具有腺泡結(jié)構(gòu)，部分仍存在壞死與缺失；粘膜下層可見炎性細(xì)胞浸逡逑潤以及纖維素樣物質(zhì)滲出；肌層肌纖維排列比較整齊
【學(xué)位授予單位】：黑龍江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：2597071